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结核杆菌CRISPR-associated csm4(Rv2820c)诱导iNOS表达对耻垢杆菌胞内存活的影响

四川大学学报（医学版） 2018年第3期49卷 319-324页

作者：翟小倩鲍朗罗涛彭璇孙长峰杨国平四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

目的研究csm4蛋白在重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)中的表达及其影响胞内存活的机制。方法 PCR扩增csm4基因,构建重组pMV261-csm4穿梭表达质粒,将重组质粒和空白质粒电穿孔进MS生成重组菌MS_csm4和对照重组菌MS_V,采用We... 详细信息

目的研究csm4蛋白在重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)中的表达及其影响胞内存活的机制。方法 PCR扩增csm4基因,构建重组pMV261-csm4穿梭表达质粒,将重组质粒和空白质粒电穿孔进MS生成重组菌MS_csm4和对照重组菌MS_V,采用Western blot对重组菌csm4蛋白表达进行检测。体外培养观察MS_csm4和MS_V生长曲线,并检测活性氮、活性氧环境下的集落形成单位(CFU)变化。MS_csm4和MS_V重组菌感染人源巨噬细胞THP-1,计数CFU反映胞内存活,实时荧光定量PCR检测诱导性一氧化氮合酶基因(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达。硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)释放指标。结果 csm4蛋白在MS_csm4中成功表达,且其表达不影响MS_csm4的生长情况;MS_csm4在体外活性氮、氧环境中CFU下降,与MS_V相比,差异有统计学意义(Pcsm4作用于THP-1细胞后诱导iNOS表达上调,促进NO的释放以及减少胞内生存,与MS_V相比,差异有统计学意义(Pcsm4不能耐受体外活性氮、氧压力环境,可诱导宿主细胞iNOS表达上调,促进NO释放,从而影响其胞内生存能力。

关键词：结核csm4基因重组耻垢分枝杆菌活性氮、氧环境胞内生存

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