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不同来源腐殖酸与U(Ⅵ)结合特性差异的实验与分子动力学模拟

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核化学与放射化学 2023年第5期45卷 444-455页

作者：赵煜帆吴鹏尹霄羽李飞泽廖家莉杨远友刘宁兰图四川大学原子核科学技术研究所辐射物理及技术教育部重点实验室四川成都610064

采用元素分析、化学滴定、光谱分析等方法对三种不同来源腐殖酸(AHA、YHA和EHA)进行了分析表征和官能团测定,系统地研究了不同pH、时间、温度和离子强度下它们与U(Ⅵ)的配位行为,并借助分子动力学模拟方法研究了不同腐殖酸模型与U(Ⅵ)... 详细信息

采用元素分析、化学滴定、光谱分析等方法对三种不同来源腐殖酸(AHA、YHA和EHA)进行了分析表征和官能团测定,系统地研究了不同pH、时间、温度和离子强度下它们与U(Ⅵ)的配位行为,并借助分子动力学模拟方法研究了不同腐殖酸模型与U(Ⅵ)相互作用的溶液动力学,探究了动力学过程、配位结构和作用机理。实验结果表明:三种不同来源腐殖酸的元素组成和官能团类型基本相似,均具有较强的芳香性和共轭双键,但也略有差异。YHA的低H/C原子比、高酸度和高官能团含量表明其腐殖化程度较高,存在高的共轭性或芳香族成分,具有较强的金属配位能力。不同来源腐殖酸与U(Ⅵ)的配位行为存在显著差异,且受pH、时间、温度和离子强度的明显影响。分子动力学模拟表明:单个腐殖酸分子与U(Ⅵ)的配位在很短时间内完成,主要的结合位点为羧基,在水溶液中可自发形成具有显著差异的HA-U(Ⅵ)配位结构,其主要驱动力为静电相互作用。上述研究结果不仅有助于进一步理解腐殖酸存在下铀在环境中的化学行为,对放射性废物的地质处置及安全性评价也具有参考价值。

关键词：腐殖酸 U(Ⅵ) 结合特性不同来源分子动力学模拟

GⅠ.5和GⅡ.4诺如病毒P蛋白的克隆表达及与长牡蛎类HBGAs的结合特性

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食品科学 2023年

作者：佟利惠杨敏王珊珊周德庆青岛滨海学院中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室

牡蛎是食源性人诺如病毒（Human norovirus， HuNoV）传播的重要载体，不同型别的HuNoV与类组织血型抗原（Histo-blood group antigens， HBGAs）具有不同的结合特性。为明确HuNoV与长牡蛎类HBGAs的结合特性，本研究运用大肠杆菌表达系... 详细信息

牡蛎是食源性人诺如病毒（Human norovirus， HuNoV）传播的重要载体，不同型别的HuNoV与类组织血型抗原（Histo-blood group antigens， HBGAs）具有不同的结合特性。为明确HuNoV与长牡蛎类HBGAs的结合特性，本研究运用大肠杆菌表达系统，克隆表达了GⅠ.5和GⅡ.4 HuNoV P蛋白，采用酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）研究HuNoV P蛋白与唾液HBGAs和长牡蛎类HBGAs的结合特性。结果表明，GⅡ.4 HuNoV与唾液A型、B型、AB型和O型HBGAs均有较好的结合，而GⅠ.5 HuNoV与B型HBGAs结合较弱，与O型HBGAs具有明显的结合优势。GⅠ.5和GⅡ.4 HuNoV在长牡蛎鳃、消化腺和外套膜中均可富集，在消化腺中富集最多，二者主要与类A型和H1型HBGAs结合，GⅡ.4 HuNoV与类Lea型、Leb型、Lex型和Ley型HBGAs有不同程度的结合，而GⅠ.5 HuNoV与类Leb型HBGAs仅微弱结合、与类H1型HBGAs具有明显结合优势。综上，不同型别的HuNoV与HBGAs的结合特性不尽相同，GⅡ.4 HuNoV具有广谱结合特性，GⅠ.5 HuNoV具有选择性结合特性。

关键词：人诺如病毒 P蛋白长牡蛎组织血型抗原结合特性

大黄鱼免疫球蛋白IgM鼠源多克隆抗体的制备及其结合特性

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水产学杂志 2022年第4期35卷 32-37页

作者：何亮银吴建绍陈卯森黄伟卿韩坤煌李进寿史晓丽宁德师范学院生命科学学院福建宁德352100 福建省水产研究所福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室福建厦门361013 闽东水产品精深加工福建省高等学校工程研究中心福建宁德352100

采用硫酸铵盐析结合Protein A亲和层析,分离纯化了体质量300~400 g大黄鱼(Larimichthys crocea)血清免疫球蛋白IgM,制备了鼠源IgM抗血清,并分析了其结合特性。SDS-PAGE结果显示,终浓度为50%的硫酸铵粗提结合Protein A亲和层析获得的IgM... 详细信息

采用硫酸铵盐析结合Protein A亲和层析,分离纯化了体质量300~400 g大黄鱼(Larimichthys crocea)血清免疫球蛋白IgM,制备了鼠源IgM抗血清,并分析了其结合特性。SDS-PAGE结果显示,终浓度为50%的硫酸铵粗提结合Protein A亲和层析获得的IgM纯度高,由2条分子量约为75 kDa和28 kDa的重链和轻链条带组成。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定鼠源IgM多克隆抗体的效价为20000,免疫印迹(Western blotting)显示了抗血清与IgM的良好结合活性。大黄鱼血清IgM多抗的制备,将为鱼体免疫机制研究及病害防治提供有力工具。

关键词：大黄鱼血清IgM Protein A 多克隆抗体结合特性

中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP7的表达及结合特性

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中国农业科学 2022年第3期55卷 613-624页

作者：赵慧婷彭竹姜玉锁赵淑果黄丽杜亚丽郭丽娜山西农业大学生命科学学院山西农业大学动物科学学院

【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana，简称中蜂)是我国本土蜂种，也是重要的传粉昆虫和经济昆虫。气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白。在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上，本研究进... 详细信息

【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana，简称中蜂)是我国本土蜂种，也是重要的传粉昆虫和经济昆虫。气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白。在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上，本研究进一步对其表达特性及与气味物质的结合能力进行探究，为揭示气味结合蛋白在中蜂嗅觉系统中的作用提供基础数据。【方法】采用qRT-PCR检测AcerOBP7在工蜂不同组织和发育阶段的表达特性；通过原核表达系统获得AcerOBP7融合蛋白，使用Ni-NTA柱进行蛋白纯化；采用荧光竞争结合法，以1-NPN(N-phenyl-1-naphthylamine)为荧光探针，测定AcerOBP7与信息素及植物挥发物的结合能力；设计并合成ds AcerOBP7，采用饲喂法对该基因进行沉默，通过qRT-PCR测定沉默效率；结合RNAi，利用EAG检测并比较对照组与干扰组中蜜蜂触角对待测物质反应值的差异。【结果】qRT-PCR结果显示，AcerOBP7mRNA在工蜂触角中的表达量极显著高于其他组织(P结合试验表明，AcerOBP7与9-ODA、1-壬醇结合能力最强，Ki值均为1.85μmol·L-1，其次与(+)-柠檬烯、1-辛烯-3-醇、芳樟醇、反式肉桂酸乙酯、桉树脑、(+)-3-蒈烯及壬醛有较强的结合活性，Ki值分别为1.87、2.66、2.72、3.05、3.88、4.14和4.40μmol·L-1，与所选择的幼虫信息素均无结合能力。使用饲喂dsRNA的方法成功干扰了AcerOBP7的表达，干扰效率最高可达70.63%。干扰后的EAG试验表明，中蜂触角对所测气味物质的反应强度均有所下降，其中1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA的EAG相对值显著降低(P结合，表明AcerOBP7是一种广谱型结合蛋白，推测其可能在工蜂采集和哺育蜂王的行为中发挥着重要作用。另外，1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA可能是AcerOBP7结合特异性较高的配体物质。

关键词：中华蜜蜂气味结合蛋白表达模式蛋白纯化结合特性

斜纹夜蛾化学感受蛋白SlitCSP2的表达模式定位及配体结合特性分析

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中国生物防治学报 2022年第6期38卷 1495-1507页

作者：汪洋陈俊元许汝冰王福莲李传仁谭晓玲董小林长江大学农学院荆州434025 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 湖北省烟草公司武汉430000

研究斜纹夜蛾Spodoptera litura化学感受蛋白Slit CSP2的表达模式、组织定位及与配体结合特性,为揭示SlitCSP2在化学通讯中的功能提供理论依据。利用RT-qPCR检测了SlitCSP2在蛹及雌、雄成虫各组织的基因表达水平;Westernblot方法检测了S... 详细信息

研究斜纹夜蛾Spodoptera litura化学感受蛋白Slit CSP2的表达模式、组织定位及与配体结合特性,为揭示SlitCSP2在化学通讯中的功能提供理论依据。利用RT-qPCR检测了SlitCSP2在蛹及雌、雄成虫各组织的基因表达水平;Westernblot方法检测了SlitCSP2在幼虫期和雄成虫头部、触角和足部的蛋白表达水平;利用免疫组织化学技术对Slit CSP2在幼虫各龄期的分布情况进行定位分析;利用荧光竞争结合试验检测Slit CSP2与13种非挥发性化合物的结合特性。RT-qPCR结果表明,SlitCSP2在3龄幼虫表达量最高,3~6龄表达量逐渐降低;成虫阶段雄成虫足部及胸部和雌成虫头部及翅的表达量最高,且雄成虫头部、足部和胸部的表达量显著高于雌成虫。Western blot结果显示,SlitCSP2在3龄幼虫头部(去触角)的蛋白表达水平较高。免疫组化结果表明,Slit CSP2在幼虫阶段主要分布于头部、口器和胸足;在雄成虫中,Slit CSP2主要分布于足部前跗节和足部外骨骼内侧。荧光竞争结合试验表明,Slit CSP2与单宁(Ki=1.77)、花青素(Ki=2.34)和叶酸(Ki=4.56)有很强的结合能力。本研究明确了Slit CSP2在幼虫各龄期和成虫各组织的表达特征。根据免疫定位及荧光竞争结合试验结果,我们推测Slit CSP2可能在斜纹夜蛾寄主选择和解毒过程中发挥重要作用。

关键词：斜纹夜蛾 Slit CSP2 原核表达组织表达结合特性

米蛾气味结合蛋白基因鉴定、组织表达及其潜在结合特性分析

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米蛾气味结合蛋白基因鉴定、组织表达及其潜在结合特性分析

作者：张秋婷中南林业科技大学

学位级别：硕士

米蛾Corcyra cephalonica是热带及亚热带地区常见的鳞翅目仓储害虫,严重威胁着粮食的安全。目前以昆虫嗅觉系统为靶标的昆虫引诱剂以其高效、专一、无毒、不易产生抗药性等特点越来越受到关注,这种方法防治效果的好坏主要基于害虫对其... 详细信息

米蛾Corcyra cephalonica是热带及亚热带地区常见的鳞翅目仓储害虫,严重威胁着粮食的安全。目前以昆虫嗅觉系统为靶标的昆虫引诱剂以其高效、专一、无毒、不易产生抗药性等特点越来越受到关注,这种方法防治效果的好坏主要基于害虫对其识别的特异性和灵敏性。因此,深入研究昆虫嗅觉感受机制及参与识别过程的嗅觉蛋白结构和功能十分必要。本课题以米蛾为研究对象,通过扫描电子显微镜对其触角进行微观结构观察,比较了雌雄两性米蛾嗅觉感器的类型,数量及大小;同时在构建米蛾雌雄成虫转录组基础上,全面挖掘和鉴定了气味结合蛋白基因,并利用qRT-PCR分析了这些基因的组织表达模式;并采用同源建模的方法构建米蛾气味结合蛋白的三维结构,通过分子对接探索性信息素结合蛋白和普通气味结合蛋白与米蛾性信息素的结合特征与能力,为设计与开发更为高效的米蛾性信息素防治技术提供新思路。其主要研究结果如下:1.米蛾成虫触角感器超微结构的观察利用扫描电镜对米蛾雌、雄成虫触角进行了超显微结构的观察,发现米蛾触角整体呈丝状,且雌蛾触角的平均长度（6.77±0.56 mm）明显长于雄蛾（5.23±0.42 mm）。雌雄蛾触角感器均主要分布在鞭节腹面,感器类型一致,为7种,分别是毛形感器、刺形感器、鳞形感器、耳形感器、腔锥形感器、栓锥形感器和B?hm氏鬃毛,但从数量上看雄虫的感器明显多于雌虫。不论在雌蛾还是雄蛾中,毛形感器均为分布最广、数量最多的感器类型,且雄蛾感器长度（35.27±3.42 μm）明显长于雌蛾（28.27±2.87μm）,鞭节每节感器数量（24.87±2.26）也显著多于雌虫（20.43±2.65）。此外,雄虫鳞形感器、腔锥形感器和B?hm氏鬃毛的长度也明显长于雌虫,表明雄虫接收外界化学信息的能力可能明显强于雌虫。2.米蛾气味结合蛋白基因的鉴定在构建米蛾雌雄成虫转录组基础上,通过NR、NT、KO、GO、KOG、PFAM和Swiss-Prot数据库中注释,共鉴定出25个气味结合蛋白基因:20个气味结合蛋白（Odorant binding proteins,OBPs）、2 个普通气味结合蛋白（General odorant binding proteins,GOBPs）和 3 个性信息素结合蛋白（Pheromone binding proteins,PBPs）,分别命名为 CcepOBP1-20,CcepPBP1-3 和 CcepGOBP1、2。3.气味结合蛋白基因的克隆及组织表达分析通过RT-PCR技术扩增得到了米蛾气味结合蛋白的开放阅读框ORF,对其进行序列分析,CcepOBP3、4、6、8、12、15、16 和 PBP1、3 属于经典氨基酸;CcepOBP7、9、13、20 属于 plus-C-A 型;CcepOBP10、11、14,CcepGOBP1、2 以及 CcepPBP2属于 plus-C-B 型;CcepOBP1、2、5、18 属 Minus-C 型;CcepOBP17、19 属 Atypial。利用实时荧光定量对以上25个基因在雌雄成虫不同组织（触角、头、胸、腹、足和翅）中的表达进行了分析。结果显示CcepPBPs和CcepGOBPs在触角上特异性表达,CcepPBPs在雄虫触角的表达明显高于雌虫,在雄蛾触角的表达量分别约是雌蛾触角的1.9,4.5和1.4倍,而CcepGOBPs则与之相反,雌蛾触角中的表达量分别约是在雄蛾触角中表达量的3.5倍和3.6倍。而CcepGOBPs则与之相反。CcepOBPs主要在头（无触角）和触角中表达,其次在翅中也有少量表达。4.米蛾OBPs的同源建模及分子对接通过同源建模的方法成功构建CcepOBP1、5、12、18,CcepPBP1-3及CcepGOBP1、2的三维结构。选择已报道的2种米蛾性信息素与CcepPBP1-3及CcepGOBP1、2进行分子对接,发现CcepPBP1-3,GOBP1、2与3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯醛的结合能集中在-6.6～-3.5 kJ/mol;与6,10,14-三甲基-2-十五烷醇的结合能分布在-4.4～-1.58 kJ/mol,整体上不论是 CcepPBPs 还是 CcepGOBPs 都与 3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯醛的结合能力较好。在结合特征上,CcepPBP1、3与2种性信息素关键作用力均为氢键,关键结合位点分别为SER160,MET29,ASP173,GLN30。CcepPBP2与3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯醛的关键作用力是疏水作用,结合位点是ALA136;与6,10,14-三甲基-2-十五烷醇无关键作用力。CcepGOBP1、2与2种性信息素结合的关键作用力均为氢键,关键结合位点为ILE117。

关键词：米蛾触角感器气味结合蛋白组织表达结合特性

GI.5和GII.4诺如病毒P蛋白的克隆表达及与长牡蛎类HBGAs的结合特性

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食品科学 2024年第2期45卷 113-119页

作者：佟利惠杨敏王珊珊王大军王明丽周德庆中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室山东青岛266071 青岛滨海学院山东青岛266555 烟台海裕食品有限公司山东烟台264000 蓬莱汇洋食品有限公司山东烟台264000

为明确人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)与长牡蛎类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)的结合特性,本实验运用大肠杆菌表达系统,克隆表达了基因簇I.5(genogroup I.5,GI.5)和GII.4 HuNoV P蛋白,采用酶联免疫吸附测定研究HuNoV P蛋白与唾液HBGAs和长牡蛎类HBGAs的结合特性。结果表明,GII.4 HuNoV与唾液A型、B型、AB型和O型HBGAs均有较好的结合,而GI.5 HuNoV与B型HBGAs结合较弱,与O型HBGAs具有明显的结合优势。GI.5和GII.4 HuNoV在长牡蛎鳃、消化腺和外套膜中均可富集,其中在消化腺中富集最多,二者主要与类A型和H1型HBGAs结合,GII.4HuNoV与类Lea型、Leb型、Lex型和Ley型HBGAs有不同程度的结合,而GI.5 HuNoV与类Leb型HBGAs仅微弱结合,与类H1型HBGAs具有明显结合优势。综上,不同型别HuNoV与HBGAs的结合特性不尽相同,GII.4HuNoV具有广谱结合特性,GI.5HuNoV具有选择结合特性。

关键词：人诺如病毒 P蛋白长牡蛎组织血型抗原结合特性

中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP62基因的克隆、表达及与人体挥发物的结合特性

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应用与环境生物学报 2021年第6期27卷 1601-1608页

作者：何兴菲张嘉俊乔梁陈斌何正波重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所媒介昆虫重庆市重点实验室昆虫与分子生物学研究所重庆401331

嗅觉系统在蚊虫追寻宿主、寻找配偶、选择产卵场所等行为中起着重要的作用,气味结合蛋白与气味分子结合是昆虫嗅觉识别的第一步生化反应.为研究中华按蚊气味结合蛋白在追寻宿主中的作用,通过反转录PCR(RT-PCR)克隆气味结合蛋白62(odoran... 详细信息

嗅觉系统在蚊虫追寻宿主、寻找配偶、选择产卵场所等行为中起着重要的作用,气味结合蛋白与气味分子结合是昆虫嗅觉识别的第一步生化反应.为研究中华按蚊气味结合蛋白在追寻宿主中的作用,通过反转录PCR(RT-PCR)克隆气味结合蛋白62(odorant binding protein 62,AsinOBP62)基因,利用定量PCR分析AsinOBP62在不同组织(触角、喙、下颚须及头胸腹部)、不同发育时期(蛹期、羽化1 d、3 d)和吸血前后的表达水平,通过荧光竞争结合实验测定AsinOBP62蛋白与16种人体气味物质和2种趋避剂的结合能力.结果显示,AsinOBP62基因开放阅读框长507 bp,编码168个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸残基,属于Classic亚家族成员.定量PCR结果显示,AsinOBP62主要在成蚊触角中表达,羽化后AsinOBP62的表达水平逐渐增强.吸食血液后,AsinOBP62的表达水平显著下降.荧光竞争结合实验显示,在测定的18种气味物质中,AsinOBP62与12种化合物具有结合活性,表明AsinOBP62对人体挥发物具有明显的选择性.其中,与2-甲基吡啶结合能力最强,解离常数K_(i)=34.34μmol/L.根据AsinOBP62基因的表达特点和重组蛋白的结合特性,推断AsinOBP62基因可能在雌蚊追寻宿主的过程中起着重要的作用.

关键词：中华按蚊气味结合蛋白62 基因克隆原核表达人体挥发物结合特性

植物挥发物与稻纵卷叶螟气味结合蛋白的结合特性分析

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植物挥发物与稻纵卷叶螟气味结合蛋白的结合特性分析

作者：高慧颖浙江师范大学

学位级别：硕士

稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)是水稻的主要迁飞性害虫之一。基于昆虫的嗅觉机制,筛选对害虫有显著行为活性的成分,是研发害虫引诱剂的一条有效途径,从而备受到国内外学者关注。作为在昆虫嗅觉系统中发挥重要功能的气味结合蛋白... 详细信息

稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)是水稻的主要迁飞性害虫之一。基于昆虫的嗅觉机制,筛选对害虫有显著行为活性的成分,是研发害虫引诱剂的一条有效途径,从而备受到国内外学者关注。作为在昆虫嗅觉系统中发挥重要功能的气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs),是识别并结合外界气味分子引发昆虫嗅觉反应的关键游离蛋白。目前已有研究明确了稻纵卷叶螟触角中气味结合蛋白(OBPs)的种类及基因序列,但具体有哪些气味结合蛋白参与识别植物挥发物及其内在机制与功能的研究还十分欠缺。因此本研究以稻纵卷叶螟气味结合蛋白(Cmed OBPs)及本实验室前期获得的一种对稻纵卷叶螟有引诱作用的植物挥发物组合(苯乙醛、乙酸苯甲酯、庚醇与己醛)为研究对象,通过荧光定量PCR、蛋白结构预测、荧光竞争结合等技术,从分子水平探索了参与识别苯乙醛、乙酸苯甲酯、庚醇与己醛4种植物挥发物的气味结合蛋白OBPs,明确植物挥发物与气味结合蛋白之间的作用机制,为开发稻纵卷叶螟高效植物挥发物引诱剂提供理论基础。主要研究结果如下:1、稻纵卷叶螟气味结合蛋白基因(Cmed OBPs)的表达通过实时荧光定量技术明确了稻纵卷叶螟气味结合蛋白基因Cmed PBP1、Cmed PBP2、Cmed GOBP1、Cmed GOBP2、Cmed OBP1、Cmed OBP6、Cmed OBP15与Cmed OBP26在稻纵卷叶螟雌、雄成虫不同日龄(2D、3D、4D和5D)触角中的表达量。结果显示Cmed OBPs在2日龄雌、雄成虫触角中均有表达。其中Cmed GOBP1雌虫触角表达量显著高于雄虫。Cmed GOBP2在4日龄雌、雄虫中高表达。Cmed PBP1在4日龄雌虫触角中高表达。Cmed PBP2在雄虫触角中的表达量随着日龄的增长呈现上升趋势,而在雌虫触角中则少量稳定表达。Cmed OBP1在5日龄雌虫、4日龄雄虫触角中高表达。Cmed OBP6在4日龄雌虫、3日龄雄虫触角中高表达。Cmed OBP15在5日龄雌虫、4日龄雄虫触角中高表达,雌虫整体表达量显著高于雄虫。Cmed OBP26在5日龄雌虫、4日龄雄虫触角中高表达。2、植物挥发物组合处理后对Cmed OBPs基因在成虫触角中的表达影响分析结果表明,部分基因在植物挥发物组合处理后表达情况有明显变化,雌、雄成虫的Cmed OBP1、Cmed OBP6、Cmed PBP1、Cmed PBP2、Cmed GOBP2基因表达量都显著上调,此外,雄成虫的Cmed OBP26与Cmed GOBP1基因表达量显著上调;雌成虫Cmed OBP26、Cmed OBP15、Cmed GOBP1基因表达量无明显变化;雄成虫Cmed OBP15基因表达量无明显变化。3、稻纵卷叶螟气味结合蛋白基因(Cmed OBPs)的克隆及其蛋白结构预测同源蛋白建模结果表明,Cmed OBP1参考模型为冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)气味结合蛋白Agam OBP20,其识别转运人类气味,参与指导蚊子的吸血行为,Cmd OBP1在雌虫触角中的表达量显著高于雄虫,推测Cmed OBP1可能参与雌成虫识别花香挥发物的过程,指导成虫的取食行为。Cmed OBP6参考模型为舞毒蛾(Lymantria dispar)信息素结合蛋白Ldis PBP1,其参与雌虫对植物挥发物的识别,Cmd OBP6在稻纵卷叶螟雌、雄成虫触角中均有表达,受植物挥发物组合处理后基因表达量显著上调,推测Cmed OBP6可能参与寄主植物挥发物的识别,在稻纵卷叶螟寄主定位过程中发挥功能。Cmed OBP15属于昆虫信息素/气味结合蛋白家族,其在雌成虫触角中的表达量显著高于雄成虫,推测其可能参与雌成虫识别植物挥发物的过程。4、稻纵卷叶螟气味结合蛋白Cmed OBPs与4种植物挥发物结合特性分析成功构建了重组质粒p ET32a(+)-Cmed GOBP1、p ET32a(+)-Cmed GOBP2、p ET32a(+)-Cmed PBP2、p ET32a(+)-Cmed OBP1、p ET32a(+)-Cmed OBP6、p ET32a(+)-Cmed OBP15和p ET32a(+)-Cmed OBP26,在大肠杆菌表达系统中表达后,利用离子层析法分离纯化得到纯蛋白。荧光竞争试验结果显示,Cmed OBP1与庚醇、己醛、苯乙醛均有较强结合力;Cmed OBP15与乙酸苯甲酯、苯乙醛有较强结合能力;Cmed OBP26与庚醇的Ki值大于20μM,表明二者可以结合但结合力不强。

关键词：稻纵卷叶螟气味结合蛋白植物挥发物结合特性嗅觉行为