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聚(L-天冬氨酸)衍生物-顺铂结合物的制备及体外细胞毒性研究

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高等学校化学学报 1998年第5期19卷 817-820页

作者：吕正荣余家会卓仁禧王旭立杨复华武汉大学化学系国家教育委员会生物医用高分子材料开放研究实验室

通过α，β－聚（Ｌ－天冬氨酸）及其衍生物α，β，Ｌ－天冬氨酸和［α，β，Ｌ－（Ｎ－羟乙基）天冬酰胺］共聚物，［α，β，Ｌ－（Ｎ－羟乙基）天冬酰胺］和［α，β，Ｌ－（Ｎ－丁二酸基）天冬酰胺］共聚物为载体，与顺式二氯二氨... 详细信息

通过α，β－聚（Ｌ－天冬氨酸）及其衍生物α，β，Ｌ－天冬氨酸和［α，β，Ｌ－（Ｎ－羟乙基）天冬酰胺］共聚物，［α，β，Ｌ－（Ｎ－羟乙基）天冬酰胺］和［α，β，Ｌ－（Ｎ－丁二酸基）天冬酰胺］共聚物为载体，与顺式二氯二氨合铂（Ⅱ）结合，合成了相应高分子－顺铂结合物．研究结果表明，在中性ｐＨ值络合最有效，聚合物－顺铂结合物的体外细胞毒性随结合物浓度增大而增大，但均小于同浓度顺铂毒性．

关键词：抗肿瘤药物天冬氨酸顺铂结合物细胞毒性

氟尿嘧啶-花生凝集素结合物与LoVo细胞的结合特性研究

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中国药学杂志 2008年第15期43卷 1153-1157页

作者：蔡勤赵栋聂宇张志荣四川大学靶向药物及传递系统重点实验室成都610041

目的研究氟尿嘧啶-花生凝集素结合物与细胞的作用。方法采用一步法制备得到结合物。应用荧光显微镜定性观察结合物与细胞的结合。应用MTT法检测结合物的细胞毒作用。结果LoVo细胞与结合物呈浓度依赖性结合;但Chang细胞不结合结合物。结... 详细信息

目的研究氟尿嘧啶-花生凝集素结合物与细胞的作用。方法采用一步法制备得到结合物。应用荧光显微镜定性观察结合物与细胞的结合。应用MTT法检测结合物的细胞毒作用。结果LoVo细胞与结合物呈浓度依赖性结合;但Chang细胞不结合结合物。结合物对癌细胞的细胞毒作用呈浓度依赖性和时间依赖性。结论结合物可选择性地与癌细胞结合,并保留抗癌活性。

关键词：花生凝集素氟尿嘧啶结合物

以白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素为载体的Y群脑膜炎球菌多糖结合物对小鼠的免疫原性

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 441-443,447页

作者：陈玉秋张梦霏何建东陶佳明范荣坤李福有白锐琼黄镇云南沃森生物技术股份有限公司云南昆明650106

目的探讨以天然白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为载体的Y群脑膜炎球菌多糖(group Y meningococcal polysaccharide,MenYPS)结合蛋白对小鼠的免疫原性。方法将MenYPS用1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)进行衍生,制备MenYps-ADH衍生物,将MenYPS-ADH衍生物在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,分别与CRM197和TT共价结合,制备3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物,采用琼脂双扩散法检测结合物中多糖抗原的血清型特异性。经BALB/c小鼠大腿内侧皮下注射制备的衍生物及结合物,2.5μg/只,0、14、28 d各免疫1次,分别于第7、21和35天经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清GMT。参考《中国生物制品规程》(2000版)进行无菌试验及异常毒性试验。结果制备的3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物可与MenYPS诊断血清产生沉淀线。MenYPSTT和MenYPS-CRM197免疫小鼠3次后,均产生较高的滴度,MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2、3次免疫小鼠后产生的GMT均明显高于MenYPS-ADH衍生物,差异有统计学意义(P均结合物GMT差异无统计学意义(P均>0.05);MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2次免疫后产生的GMT均明显高于第1次免疫后,第3次免疫后明显高于第2次免疫后,差异均有统计学意义(P均物制品规程》(2000版)相关要求;异常毒性试验中,豚鼠和小鼠观察7 d后,均无异常反应,体重增加,无死亡。结论 MenYPS与CRM197和TT的结合物均能诱导BALB/c小鼠产生较高的抗体水平,且产生了免疫记忆。

关键词：脑膜炎球菌多糖 CRM197 破伤风类毒素结合物免疫原性

四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2015年第2期28卷 170-176页

作者：朱涛邓捷邓新邵忠琦毛慧华宇学峰天津科技大学天津300457 天津康希诺生物技术有限公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室天津300457

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体（CRM197）特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特... 详细信息

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体（CRM197）特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物（GAMP-CRM197）多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物（GCMP-CRM197）多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物（GWMPCRM197）多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物（GYMP-CRM197）多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数（CV）均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。

关键词：四价脑膜炎球菌多糖疫苗双抗体夹心ELISA 结合物多糖

聚乙二醇-重组人干扰素α2b结合物冻干保护剂的筛选

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中国生物制品学杂志 2008年第10期21卷 887-889页

作者：张雪梅石晓丽姚为民陈云声赵大鹏关晓峰赵虹盛军孙金海吉林大学畜牧兽医学院长春130062 成都生物制品研究所成都610023 长春生物制品研究所长春130062

目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂。方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和... 详细信息

目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂。方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和生物学稳定性,筛选最佳保护剂配比。结果通过6～12个月的试验,证实该冻干制剂外观、pH无明显改变,但再溶解速度略慢于以人血白蛋白作保护剂的冻干制剂;采用15mmol/L精氨酸+10mmol/L谷氨酸+4%甘露醇+1%蔗糖/海藻糖的冻干保护剂配方,在4℃和25℃放置12个月后,抗病毒活性仍较好,相当于人血白蛋白的冻干保护效果。结论已筛选出不含人血白蛋白的PEG-rhIFNα2b结合物的冻干保护剂。

关键词：聚乙二醇重组人干扰素α2b 结合物保护剂

冻干b型流感嗜血杆菌荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物的制备及其质量评价

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中国生物制品学杂志 2020年第10期33卷 1093-1096页

作者：马伟曹方胡利平郭阳漾王良超杨欢王丹雅艾美卫信生物药业(浙江)有限公司浙江宁波315600

目的制备冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,并评价其质量。方法发酵培养白喉棒状杆菌C7 M1菌株表达CRM197蛋白,产物经DEAE SFF阴离子层析柱纯化,冻干后获得载体蛋白CRM19... 详细信息

目的制备冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,并评价其质量。方法发酵培养白喉棒状杆菌C7 M1菌株表达CRM197蛋白,产物经DEAE SFF阴离子层析柱纯化,冻干后获得载体蛋白CRM197。Hib荚膜多糖水解后,采用氧化还原法与CRM197蛋白结合,制备结合物原液,冻干后制备3批成品。按《中国药典》三部(2015版)要求对成品进行各项生化指标检测及鉴别试验,并通过免疫新西兰幼兔,检测结合物的免疫原性。结果3批冻干疫苗成品的各项生化指标及鉴别试验均符合相关规定,免疫后家兔血清中抗体滴度明显升高(P结合物,且具有良好的免疫原性。

关键词： b型流感嗜血杆菌白喉毒素无毒变异体 CRM197蛋白结合物免疫原性

分子印迹和包覆策略制备亲和力和特异性显著提高的抗体模拟物

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Science Bulletin 2022年第3期67卷 278-287页

作者：邢荣荣郭展辰卢海峰张齐刘震 State Key Laboratory of Analytical Chemistry for Life Science School of Chemistry and Chemical EngineeringNanjing UniversityNanjing 210023China

分子印迹聚合物(MIPs)已经发展成为抗体的重要模拟物并在一些领域得到了应用。然而,目前的分子印迹技术面临着一个困境:在最优条件下制备的MIPs往往不能同时提供最佳亲和力和最佳特异性。而是两者之间的折衷。为此。我们提出了一种称为... 详细信息

分子印迹聚合物(MIPs)已经发展成为抗体的重要模拟物并在一些领域得到了应用。然而,目前的分子印迹技术面临着一个困境:在最优条件下制备的MIPs往往不能同时提供最佳亲和力和最佳特异性。而是两者之间的折衷。为此。我们提出了一种称为“分子印迹和包覆(MIC)”的新策略来解决该问题。该策略的原理很简单:在分子印迹完成之后,再形成化学情性的包覆薄层去精准覆盖非印迹区域。由此本文提出了一种特殊的MIC方法来可控制备蛋白质的结合物-包覆分子印透聚合物(MIPs),其亲和力和特异性得到显著提升,进一步通过制得的cMIPs识别各种不同的蛋白质验证了该策略和方法的普遍适用性,并通过对癌细胞的靶向荧光成像和对人尿样品中C肽的免疫分析证明了cMIPs在实际应用中的潜力。因此。该策略为人工抗体的可控制备开辟了新颖的途径。在疾病诊断和纳米医学等重要应用领域具有广阔的前景.

关键词：分子印迹模拟物免疫分析疾病诊断普遍适用性结合物荧光成像纳米医学

多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2009年第8期22卷 792-794页

作者：任克明陈晓航张轶刘爱萍陈美华王剑虹沈荣兰州生物制品研究所第三研究室兰州730046

目的探讨多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响。方法分别用单一载体(破伤风类毒素)和混合载体(破伤风类毒素和白喉类毒素)作为多糖结合物的载体蛋白,制备5～9价肺炎链球菌荚膜多糖结合物,免疫NIH小鼠,采用间接ELISA法测... 详细信息

目的探讨多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响。方法分别用单一载体(破伤风类毒素)和混合载体(破伤风类毒素和白喉类毒素)作为多糖结合物的载体蛋白,制备5～9价肺炎链球菌荚膜多糖结合物,免疫NIH小鼠,采用间接ELISA法测定免疫小鼠血清中抗荚膜多糖特异性IgG抗体水平。结果多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物的免疫效果优于相应的单价结合物;随着结合物配制价数的增高,小鼠的免疫应答能力趋于下降;多价结合物中使用两种载体能缓解此现象,但载体含量过高时,依然会抑制免疫应答。结论多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物免疫小鼠后,随着载体剂量的增高,会出现载体诱导的表位抑制现象,使小鼠的免疫应答反应减弱。两种载体蛋白同时使用能缓解此现象。

关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合物破伤风类毒素白喉类毒素免疫应答表位抑制

层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖及其制备的多糖蛋白结合物的安全性和免疫原性

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中国生物制品学杂志 2013年第12期26卷 1705-1710,1714页

作者：王雪薇刘钰陈敬焦小玲王平张燕斌林海涛刘梅影北京微谷生物医药有限公司北京101111 北京生物制品研究所有限责任公司北京101111

目的采用层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖,以替代冷酚抽提法,并对制备的多糖蛋白结合物进行初步安全性和免疫原性评价。方法采用温和的表面活性剂去氧胆酸钠对C群脑膜炎球菌多糖进行前处理,并用Capto adhere和Capto DEAE阴离子交换凝胶柱串... 详细信息

目的采用层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖,以替代冷酚抽提法,并对制备的多糖蛋白结合物进行初步安全性和免疫原性评价。方法采用温和的表面活性剂去氧胆酸钠对C群脑膜炎球菌多糖进行前处理,并用Capto adhere和Capto DEAE阴离子交换凝胶柱串联,对多糖进行柱层析纯化,再通过脱盐去除残留的去氧胆酸钠,获得精制多糖。对缓冲液中的去氧胆酸钠浓度、缓冲液pH值、样品的前处理时间及离子交换流速进行优化,并对建立的层析纯化工艺进行放大,纯化3批多糖,按照《中国药典》三部(2010版)要求检测各项质控指标,并通过核磁共振-氢谱检测纯化后的多糖结构。将层析法和苯酚法纯化的多糖分别与破伤风类毒素结合,制备多糖蛋白结合物,对结合物进行异常毒性、小鼠急性毒性试验和免疫原性检测。结果经优化,确定缓冲液的去氧胆酸钠浓度为1.0%,pH值为8.0,样品前处理时间为6 h,离子交换流速为2.0 ml/min。放大工艺制备的3批C群脑膜炎球菌多糖各项检测指标均合格,多糖回收率均大于70%,明显高于苯酚法制备的多糖。核磁共振-氢谱显示,层析法与苯酚法纯化的多糖主要峰基本一致,层析法未改变多糖结构。层析法纯化的多糖制备的多糖蛋白结合物异常毒性试验合格,小鼠急性毒性试验结果与苯酚法纯化多糖制备的多糖蛋白结合物比较,差异无统计学意义(P>0.05),免疫小鼠后均具有良好的免疫原性。结论层析法分离杂蛋白操作简便,省时省力,工艺易于放大,且减少了对环境的污染,可替代苯酚抽提法用于C群脑膜炎球菌多糖的纯化。

关键词： C群脑膜炎球菌多糖阴离子交换层析结合物安全性免疫原性