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东北林蛙瘦素受体叠加转录蛋白基因的克隆及组织表达分析

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生物工程学报 2022年第5期38卷 1859-1873页

作者：吴彤刘婷婷刘依铭赵雪滢刘玉芬刘鹏赵文阁哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025

瘦素受体叠加转录蛋白(leptin receptor overlapping transcript, LepROT)在免疫调节中发挥多种作用。为了获得两栖类LepROT在抗感染中的作用及其机制的信息,首先采用RT-PCR技术克隆东北林蛙的LepROT基因并进行生物信息学分析;再分别构... 详细信息

瘦素受体叠加转录蛋白(leptin receptor overlapping transcript, LepROT)在免疫调节中发挥多种作用。为了获得两栖类LepROT在抗感染中的作用及其机制的信息,首先采用RT-PCR技术克隆东北林蛙的LepROT基因并进行生物信息学分析;再分别构建嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)与细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)东北林蛙的感染模型,获得组织病理解剖变化特征,并应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LepROT基因的变化规律及其对核转录因子NF-κB信号通路的影响。结果表明,LepROT基因长度为396bp,编码131个氨基酸残基,与两栖类同源性在93.74%以上,与哺乳类同源性在86.39%以上,在各个物种中相对保守;感染Ah、LPS后,基因LepROT、NF-κB、IKKα和IKKβ的相对表达量均显著上调(P<0.01),并且不同组织的表达量上调的时间规律不同,推测东北林蛙可能通过LepROT启动NF-κB信号通路发挥抗感染作用,为进一步扩展两栖类LepROT的生物学功能的研究提供了证据。

关键词： LepROT基因 NF-κB信号通路嗜水气单胞菌细菌脂多糖东北林蛙

双调蛋白对小鼠损伤肺组织的修复作用及机制研究

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中华急诊医学杂志 2022年第1期31卷 47-54页

作者：田书宁蒙臣罗向红王贤裕锦州医科大学十堰市太和医院研究生培养基地(湖北医药学院附属医院) 十堰442000 江门市中心医院(中山大学附属江门医院)麻醉科江门529099 十堰市太和医院麻醉科湖北医药学院麻醉学研究所十堰442000

目的探讨双调蛋白(amphiregulin, Areg)对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)小鼠损伤肺组织的修复作用及机制。方法使用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)气管滴注制作小鼠ARDS模型, 连续7 d提取支气管肺... 详细信息

目的探讨双调蛋白(amphiregulin, Areg)对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)小鼠损伤肺组织的修复作用及机制。方法使用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)气管滴注制作小鼠ARDS模型, 连续7 d提取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)。将成年雄性C57BL/6小鼠用随机数字法分为5组(n=4/组):①空白组;②Areg组(腹腔注射重组Areg蛋白);③LPS+PBS组;④LPS+Areg组;⑤LPS+Anti-Areg组(③④⑤组小鼠气管滴注LPS, 30 min后腹腔注射PBS、重组Areg或Areg中和抗体)。于ARDS后1、3、5、7 d提取肺组织与BALF, HE染色评估肺组织病理变化, BCA法检测BALF中总蛋白含量, ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)与免疫球蛋白M(IgM)浓度, Western Blot检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、表面活性蛋白-C(surface proteins-C, SP-C)的表达情况, 免疫荧光检测肺组织PCNA与SP-C共表达情况。符合正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析, 两组间比较采用LSD-t检验。结果与建模前相比[(51.05±2.47) pg/mL], ARDS后小鼠肺组织中的Areg含量在第1天[(71.97±6.51) pg/mL, P<0.01]与第3天[(147.58±7.56) pg/mL, P<0.01]显著升高。在ARDS后第1天, LPS+PBS组和LPS+Areg组出现明显肺组织间质水肿、中性粒细胞浸润和肺泡结构塌陷, 且损伤程度无明显差异。在第3、5、7天, 与LPS+PBS组相比, LPS+Areg组的肺组织病理损伤情况均有明显好转, 而LPS+Anti-Areg组的损伤情况却更为严重。与空白组相比, LPS+PBS组小鼠BALF中总蛋白、IgM、中性粒细胞数量、TNF-α、IL-1β、IL-6均有明显升高, Areg处理显著降低了这些指标的水平。LPS+Areg组PCNA(1.34±0.10)、SP-C(1.48±0.10)、p-EGFR(0.92±0.032)的表达水平较LPS+PBS组[(0.88±0.03), (1.06±0.15), (0.68±0.03), P<0.05]上调, 且LPS+Areg组PCNA及SP-C双阳性细胞较LPS+PBS组明显增多, 而LPS+Anti-Areg组则有所下降。结论 Areg可以通过激活EGFR通路增加肺泡Ⅱ型上皮细胞的增殖, 从而促进ARDS损伤肺组织的修复。

关键词：急性呼吸窘迫综合征细菌脂多糖双调蛋白表皮生长因子肺损伤修复

DHA对细菌脂多糖诱导的孕鼠炎症和胎鼠生长受限的作用

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营养学报 2023年第4期45卷 384-389页

作者：孟庆冲张志强林秋琳秦新生胡纯秋博庆丽安徽医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学系合肥230032

目的探讨二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)通过调节肠道紧密连接蛋白拮抗细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发的孕鼠炎症和胎儿生长受限的影响及机制。方法模型建立:ICR孕鼠分为对照、DHA、LPS和DHA+LPS四组,每组11只孕鼠,... 详细信息

目的探讨二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)通过调节肠道紧密连接蛋白拮抗细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发的孕鼠炎症和胎儿生长受限的影响及机制。方法模型建立:ICR孕鼠分为对照、DHA、LPS和DHA+LPS四组,每组11只孕鼠,DHA和DHA+LPS组全孕期(GD0-17)给予DHA(300mg/kg)灌胃处理,其余两组灌以等量的玉米油;LPS和DHA+LPS组在GD15-17灌胃1 h后腹腔注射LPS(100μg/kg),其余两组给予等量的生理盐水处理,GD18取材时测量胎鼠、胎盘发育指标。机制探索:分组同上,每组6只孕鼠,DHA和DHA+LPS组在GD0-15给予DHA(300 mg/kg)灌胃处理,其余两组灌以等量的玉米油;LPS和DHA+LPS组在GD15灌胃1小时后腹腔注射LPS(100μg/kg),其余两组给予等量的生理盐水处理,LPS注射1h后收集孕鼠血清及小肠组织。ELISA检测孕鼠血清中IL-6、TNF-α及DAO的水平;Westernblot、qPCR和IHC法检测母鼠小肠上皮紧密连接相关蛋白的表达及分布情况。qPCR方法检测孕鼠小肠组织中炎性因子和紧密连接相关蛋白的基因表达水平。结果DHA预处理可使LPS所致胎儿生长受限发生率从61%下降至42%(P<0.05),每窝胎鼠生长受限的只数由(6.373±0.706)下降至(4.0±0.289)(P<0.05)。LPS组孕鼠血清中IL-6、TNF-α和DAO以及小肠组织Il-1β、Il-6、Tnf-α和Kc mRNA水平均较对照组明显升高(P<0.01),DHA预处理均可使其降低(P<0.05)。LPS组肠道紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1在蛋白和基因水平上表达较对照组均明显降低(P<0.01),DHA+LPS组各指标水平均高于LPS组(P<0.05)。结论DHA预处理可能通过增加孕鼠肠道上皮紧密连接蛋白的表达,降低肠道通透性,缓解体内炎症水平达到拮抗胎儿生长受限的作用。

关键词：二十二碳六烯酸细菌脂多糖孕鼠胎儿生长受限紧密连接蛋白

TLR4/NF-κB p65信号通路介导雷公藤甲素对内毒血症大鼠内皮保护作用

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中国中药杂志 2019年第22期44卷 4912-4917页

作者：宗佳琪王烁阳苏萍孙贝贝郭马娣刁光华王静王海华皖南医学院生理教研室安徽芜湖241002 皖南医学院临床医学院安徽芜湖241002

通过腹腔注射细菌脂多糖复制内毒血症大鼠模型,观察雷公藤甲素(triptolide,TP)对其心血管功能的作用及其可能作用机制。将雄性SD大鼠随机分成6组:正常组(NC组)、内毒血症模型组(LPS组)、TP低浓度干预组(LPS+TP-L组)、TP中浓度干预组(LPS... 详细信息

通过腹腔注射细菌脂多糖复制内毒血症大鼠模型,观察雷公藤甲素(triptolide,TP)对其心血管功能的作用及其可能作用机制。将雄性SD大鼠随机分成6组:正常组(NC组)、内毒血症模型组(LPS组)、TP低浓度干预组(LPS+TP-L组)、TP中浓度干预组(LPS+TP-M组)、TP高浓度干预组(LPS+TP-H组)和多黏菌素B组(LPS+PMX-B组)。用LPS 10 mg·kg^-1腹腔注射处理6 h复制内毒血症大鼠模型。TP干预组在大鼠腹腔注射LPS前15 min进行预处理。各组大鼠行颈总动脉插管测量血流动力学指标,检测各组大鼠血清中BNP,CK-MB,c Tn-Ⅰ的含量;血浆中TNF-α和IL-6的含量;大鼠心肌组织中p65的含量,胸主动脉血管组织中i NOS,e NOS,TLR4,p65的含量。与NC组比较,LPS组大鼠血流动力学指标均显著下降,血清中BNP,CK-MB,c Tn-Ⅰ的含量,血浆中TNF-α和IL-6的含量,心肌组织中p65的含量,血管组织中i NOS,e NOS,TLR4,p65的含量均明显增高。与LPS组相比,LPS+TP-M组、LPS+TP-H组与LPS+PMX-B组大鼠血流动力学指标均显著改善;各组大鼠血清中BNP,CK-MB,cTn-Ⅰ的含量,血浆中TNF-α和IL-6的含量,心肌组织中p65的含量,血管组织中i NOS,eNOS,TLR4,p65的含量均显著降低。雷公藤甲素呈剂量依赖性保护内毒血症大鼠心血管功能损伤作用,可能是通过TLR4/NF-κB p65信号通路改善内皮功能实现的。

关键词：雷公藤甲素细菌脂多糖内毒血症 TLR4/NF-κB p65信号通路大鼠

细菌脂多糖对选择性激光熔化技术制作的钴铬钼合金腐蚀行为的影响

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口腔材料器械杂志 2022年第2期31卷 104-107,121页

作者：张曼曼孙健阿地力江·依米提程蕙娟焦婷上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔修复科国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011 喀什地区第二人民医院口腔科喀什844000

目的研究不同浓度细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)对选择性激光熔化技术(Selective laser melting,SLM)制作的钴铬钼合金腐蚀行为的影响。方法分别以SLM法及铸造法各制作12个钴铬钼合金试件,根据在腐蚀电解液中LPS浓度(0、0.15... 详细信息

目的研究不同浓度细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)对选择性激光熔化技术(Selective laser melting,SLM)制作的钴铬钼合金腐蚀行为的影响。方法分别以SLM法及铸造法各制作12个钴铬钼合金试件,根据在腐蚀电解液中LPS浓度(0、0.15、15、150 μg/mL)不同分为4组,每组3个试件。采用电化学阻抗谱、动电位极化测试法分析2组合金试件在不同浓度脂多糖(LPS)中的腐蚀行为。结果在单纯人工唾液中,SLM合金和铸造合金的腐蚀参数无统计学上的差异(P>0.05)。当LPS浓度为150 μg/ mL时,SLM合金和铸造合金的电阻(R;)均显著下降且自腐蚀电流密度(I;)显著增大,但SLM合金的R;值大于铸造合金且I;值较小(P<0.05)。结论 LPS对SLM法和铸造法制作的钴铬钼合金的腐蚀行为均有不利影响,但对SLM法制作的合金的腐蚀影响小于铸造法制得的合金。

关键词：选择性激光熔化技术细菌脂多糖腐蚀行为钴铬钼合金

细菌脂多糖及高迁移率族蛋白1对小鼠巨噬细胞M1/M2极化分型的影响

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实用医学杂志 2018年第6期34卷 929-932页

作者：黄翔雨申晓青 ZHOU Zheng 徐平平南方医科大学口腔医学院广州510280 南方医科大学珠江医院口腔科广州510280 底特律大学牙学院底特律48208

目的探讨细菌脂多糖(LPS)及信号转导通路中的下游分子高迁移率族蛋白1(HMGB1)对小鼠巨噬细胞M1/M2极化分型的作用。方法分别用LPS、HMGB1刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,Q-PCR法检测各组巨噬细胞极化基因的表达情况。结果在LPS刺激下M1巨... 详细信息

目的探讨细菌脂多糖(LPS)及信号转导通路中的下游分子高迁移率族蛋白1(HMGB1)对小鼠巨噬细胞M1/M2极化分型的作用。方法分别用LPS、HMGB1刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,Q-PCR法检测各组巨噬细胞极化基因的表达情况。结果在LPS刺激下M1巨噬细胞极化基因NOS2、IL-6、TNF-α表达水平明显增高(P0.05),巨噬细胞往M1型分化。在HMGB1刺激下M1巨噬细胞极化基因NOS2、TNF-α和M2巨噬细胞极化基因RELM-α表达水平均明显增高(P<0.01)。结论 LPS使小鼠巨噬细胞往M1亚型分化促进炎症的发生发展;HMGB1作为LPS的一个下游分子,在使小鼠巨噬细胞往M1亚型分化的同时也能使其往M2方向分化,提示其中存在一个负反馈调节炎症的机制,避免机体组织受到无限制破坏。

关键词：高迁移率族蛋白1 巨噬细胞 M1 M2 细菌脂多糖

前胡汤对细菌脂多糖诱发大鼠急性气道炎症和痰液分泌的改善作用

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时珍国医国药 2023年第7期34卷 1594-1598页

作者：陈帆朱琳颜延凤南京中医药大学江苏南京210023 南京市中西医结合医院江苏南京210014

目的考察前胡汤对细菌脂多糖(LPS)诱导大鼠急性气道炎症和痰液分泌的影响及相关机制。方法大鼠采用气管注射LPS(300μg/500μl)建立模型,随机分为模型、急支糖浆、氨溴索口服液及前胡汤高、低剂量组(20、10ml/kg)。LPS注射前0.5h及造模... 详细信息

目的考察前胡汤对细菌脂多糖(LPS)诱导大鼠急性气道炎症和痰液分泌的影响及相关机制。方法大鼠采用气管注射LPS(300μg/500μl)建立模型,随机分为模型、急支糖浆、氨溴索口服液及前胡汤高、低剂量组(20、10ml/kg)。LPS注射前0.5h及造模后25h、49h、73h分别灌胃给药1次。末次给药2h后解剖取材,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞分类计数、血清和BALF中炎症因子水平、肺组织病理学、肺组织黏蛋白(MUC5AC)水平及杯状细胞分化相关信号分子的表达。结果前胡汤可明显减少模型大鼠BALF中的白细胞数量且回复巨噬细胞、淋巴细胞等比例,显著降低血清和BALF中IL-4、5、9、13和TNF-α等炎症因子水平。肺组织病理学显示前胡汤明显改善大鼠肺泡结构和减轻炎细胞浸润。前胡汤可显著减少模型大鼠肺匀浆和BALF中MUC5AC黏蛋白水平,明显下调肺组织EGFR和STAT6的mRNA和蛋白表达,对SPDEF和NOTCH2表达水平作用不明显。结论前胡汤对LPS所致大鼠气道炎症及黏液分泌具有良好的改善作用,其抑制气道分泌作用与EGFR/STAT6信号通路介导的气道杯状细胞分化有关。

关键词：前胡汤细菌脂多糖 EGFR/STAT6信号通路杯状细胞分化

细菌脂多糖对牙周膜干细胞的矿化分化作用的影响

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医学研究生学报 2018年第6期31卷 573-577页

作者：郭婷曹罡李芷陈伟冷旭刘秉尧徐金科毛钊南京大学医学院附属口腔医院牙体牙髓病科南京医学博士210008 南京大学医学院附属金陵医院(南京军区南京总医院)口腔科南京210002

目的牙周组织工程技术可引导牙周组织再生,对于治疗牙周病有良好的应用前景,但临床应用并不理想。文中通过体外模拟牙周炎症环境,观测牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、分化及矿化活性的变化,探寻目前牙周组织工程技术临床疗效不佳的原因。方... 详细信息

目的牙周组织工程技术可引导牙周组织再生,对于治疗牙周病有良好的应用前景,但临床应用并不理想。文中通过体外模拟牙周炎症环境,观测牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、分化及矿化活性的变化,探寻目前牙周组织工程技术临床疗效不佳的原因。方法取正畸拔除的年轻恒牙牙周组织,原代培养并分离筛选出牙周膜干细胞。取生长状态良好的第3代PDLSCs,分别接种于氟磷灰石(FA)-聚己内酯(PCL)纳米纤维三维支架(FA-PCL)和聚己内酯(PCL)纳米纤维三维支架。再将细胞随机分为A^F组。A组:加入终浓度为10 ng/m L的牙龈卟啉单胞菌脂多糖(PG-LPS)+FA-PCL组;B组:加入终浓度为10 ng/m L的PG-LPS+PCL组;C组:加入终浓度10μg/m L的PG-LPS+FA-PCL组;D组:加入终浓度10μg/m L的PG-LPS+PCL组;E组:纯FA-PCL组;F组:纯PCL组。观察细胞增殖、分化、矿化活性的变化。结果细胞接种于支架后黏附生长良好。接种后7 d,A、B组较E、F组细胞增殖显著增高;而C、D组较E组和F组细胞增殖显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。在E组表面生长的PDLSCs已大量表达碱性磷酸酶和矿化相关基因runx2和spp1,显著高于其他各组,差异均有统计学意义(P<0.05);且A、C组明显高于B、D组,A组明显高于C组。接种后28 d时,茜素红及Von Kossa染色提示E组表达量远高于其他各组,而A、C组染色重于B、D组,A组重于C组。结论炎性环境不仅影响PDLSCs的增殖,而且会抑制PDLSCs分化和矿化。改性的FA-PCL支架可减轻PG-LPS产生的细胞毒性作用。

关键词：牙周组织再生细菌脂多糖牙周膜干细胞矿化分化

细菌脂多糖和地塞米松应激对肉仔鸡肠黏膜功能的影响

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细菌脂多糖和地塞米松应激对肉仔鸡肠黏膜功能的影响

作者：张芬鹊山西农业大学

学位级别：硕士

本试验旨在研究细菌脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和地塞米松(Dexamethasone,DEX)应激对肉仔鸡生长性能、饲粮养分代谢率、器官和肠道发育、肠黏膜相关基因相对表达量和盲肠菌群的影响。选取1d健康的AA (Arbor Acre)肉仔鸡128只,随... 详细信息

本试验旨在研究细菌脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和地塞米松(Dexamethasone,DEX)应激对肉仔鸡生长性能、饲粮养分代谢率、器官和肠道发育、肠黏膜相关基因相对表达量和盲肠菌群的影响。选取1d健康的AA (Arbor Acre)肉仔鸡128只,随机分为4个处理,每个处理4个重复,每个重复8只,分别为无免疫组(NV组)、常规免疫组(CV组)、免疫抑制组(DEX组)和免疫亢进组(LPS组)。DEX组和LPS组分别于15d、17d、19d和30 d、32 d、34 d肌肉注射25 mg/kg BW/d的DEX和50μg/kgBW/d的LPS, NV组和CV组于相应日龄注射等体积的生理盐水。分别于20 d、28 d、35 d和42 d从各重复中随机屠宰1只试验鸡。采集法氏囊、脾脏、胸腺、肝脏和胰腺,测定器官指数;采集小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),测定肠黏膜组织形态学,用实时荧光定量PCR测定小肠黏膜中TNF-α、TLR-4、ZO-2和MUC2基因的相对表达量;35 d和42 d完整采集一侧盲肠用于菌群培养计数。结果表明：(1)LPS和DEX应激显著降低肉仔鸡ADFI和ADG (P0.05);(2)LPS和DEX应激对饲粮中OM表观代谢率无显著差异(P>0.0),而显著降低肉仔鸡后期饲粮中的DM、CP、Ca和P的表观代谢率(P0.05);(5)LPS和DEX应激显著上调20 d、28 d、35 d、42 d肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠黏膜中TNF-α和TLR-4 mRNA相对表达量(P<0.05),显著下调MUC2和ZO-2 mRNA的相对表达量(P<0.05);(6)LPS和DEX应激显著增加35 d和42 d肉仔鸡盲肠中肠杆菌的数量,显著降低35 d盲肠乳酸菌和双歧杆菌的数量,显著降低35 d和42 d盲肠定植抗力B/E(双歧杆菌数/肠杆菌数)值(P<0.05)综上所述,LPS和DEX应激能通过影响肠黏膜形态结构、改变肠道菌群而导致肠黏膜屏障功能受损,从而使肉仔鸡ADFI和ADG降低,后期饲粮中的DM、CP、Ca和P的表观代谢率下降。

关键词：肉仔鸡细菌脂多糖地塞米松肠黏膜基因表达盲肠菌群