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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 13-19页

作者：黄继文肖长峰杨长锁朱丽慧上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300

细菌胞外囊泡(BEVs)是一类由细菌分泌的可携带和转运各种物质的纳米级颗粒,在母源细菌与宿主互作中发挥重要作用。研究发现,BEVs可携带母源细菌源抗原成分参与免疫反应信号通路,实现对宿主的免疫调节作用,为疫苗开发提供了新思路;肠道中... 详细信息

细菌胞外囊泡(BEVs)是一类由细菌分泌的可携带和转运各种物质的纳米级颗粒,在母源细菌与宿主互作中发挥重要作用。研究发现,BEVs可携带母源细菌源抗原成分参与免疫反应信号通路,实现对宿主的免疫调节作用,为疫苗开发提供了新思路;肠道中的BEVs可刺激黏蛋白产生,增强肠道屏障效应、降低肠道炎症,既能作为修复肠炎患者肠道屏障功能的潜在药物,也可作为评估肠道损伤情况的标志物;BEVs还可通过调节糖和脂质代谢的信号通路调节宿主代谢。反过来,宿主也能影响细菌及其BEVs的分泌。本文综述了BEVs的组成及其在宿主免疫调节、肠道屏障功能和代谢过程中作用机制,以期为BEVs在临床和生产应用中提供参考。

关键词：细菌胞外囊泡宿主互作机制

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枯草芽孢杆菌胞外囊泡的分离及其对巨噬细胞免疫功能的影响

枯草芽孢杆菌胞外囊泡的分离及其对巨噬细胞免疫功能的影响

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作者：苏源西北农林科技大学

学位级别：硕士

细菌胞外囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是在细菌生长过程中从细胞膜分泌到细胞外空间的具有脂质双层结构的纳米级囊泡,它含有细菌细胞膜蛋白,脂质和核酸等多种生物活性分子,在细胞间传递信号,具有多种生理功能。如:介导细菌-宿主... 详细信息

细菌胞外囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是在细菌生长过程中从细胞膜分泌到细胞外空间的具有脂质双层结构的纳米级囊泡,它含有细菌细胞膜蛋白,脂质和核酸等多种生物活性分子,在细胞间传递信号,具有多种生理功能。如:介导细菌-宿主相互作用,呈递细菌抗原,调节宿主免疫系统功能。随着对OMV生物学特性和功能研究的不断深入,一些共生细菌和益生菌是否能通过分泌OMVs途径诱导宿主免疫系统的发育已引起学术界的广泛关注。本试验分离纯化枯草芽孢杆菌168菌株(*** 168)细胞外囊泡,以小鼠巨噬细胞为模型,研究*** 168细胞外囊泡(BS-OMV)对巨噬细胞活力的影响。并且构建绿色荧光蛋白重组B subtilis 168,检测细胞外囊泡携带重组蛋白的能力。主要试验结果如下:(1)首先采用差速离心法从*** 168培养液上清中富集BS-OMVs,随后采用密度梯度离心法进行纯化得到纯化BS-OMVs。扫描电镜检测结果显示:BS-OMVs的形态大小不一,视野清晰且无杂质,呈圆形或椭圆形,直径平均约为100 nm左右,范围在50-200 nm之内,符合细菌OMVs颗粒粒径的要求;纳米粒径分析仪检测结果表明MODE曲线线条平缓流利,说明获得的BS-OMVs中含有的其他杂质较少,纯度好,粒径峰值是85 nm,粒径范围为50-200 nm之间,与SEM观察到的细粒径大小值基本吻合。蛋白定量结果显示:1×10 particles/mL的BS-OMVs的蛋白含量为5.1μg/mL。(2)以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为体外模型,研究6组不同浓度的BS-OMVs(分别为0、1、2、4、8和16 ug/mL)对细胞存活率、胞内相关酶活及分泌促炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)和抗炎性细胞因子(IL-10和TGF-β)的影响。与对照组PBS相比,OMV1、OMV2组的细胞存活率、胞外LDH和细胞内SOD活性没有显著差异,胞内ACP、LDH和iNOS活性显著升高(P胞因子(TNF-α和IL-6)分泌量提高为原来的2-5和3-5倍,OMV4组的细胞存活率,胞外LDH和细胞内SOD活性没有显著差异,胞内ACP、LDH和iNOS活性最高(P胞因子(TNF-α和IL-6)分泌量提高为原来的2-5和3-5倍,抗炎性细胞因子(IL-10和TGF-β)的分泌量显著高于其他组。OMV8、OMV16组的细胞存活率、细胞内LDH和SOD活性显著降低,促炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)分泌量提高为原来的9-15倍和10-17倍。(3)将携带含有荧光基因的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒YGJ32,转化枯草芽孢杆菌168菌株,从重组枯草芽孢杆菌中分离纯化出胞外囊泡,在荧光显微镜下观察重组的枯草芽孢杆菌胞外囊泡,发现其携带荧光。综上,适量BS-OMVs可通过提高巨噬细胞免疫相关酶活,调节细胞因子分泌量以增强其免疫功能。

关键词：枯草芽孢杆菌细菌胞外囊泡巨噬细胞存活率免疫功能

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牙周菌群的胞外囊泡在牙周炎进程中的作用及机制研究

牙周菌群的胞外囊泡在牙周炎进程中的作用及机制研究

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作者：施璐瑶重庆医科大学

学位级别：硕士

目的探究人口腔牙周菌群产生的胞外囊泡在牙周炎发展过程中的作用和分子机制。方法1.收集牙周炎患者和健康对照者的龈沟液(gingival crevicμLar fluid,GCF)分别进行细菌有氧和厌氧培养,实验分组:牙周炎患者厌氧菌组(Anaerobic EV in pe... 详细信息

目的探究人口腔牙周菌群产生的胞外囊泡在牙周炎发展过程中的作用和分子机制。方法1.收集牙周炎患者和健康对照者的龈沟液(gingival crevicμLar fluid,GCF)分别进行细菌有氧和厌氧培养,实验分组:牙周炎患者厌氧菌组(Anaerobic EV in periodontitis patients,P-An-EV)和需氧菌组(Aerobic EV in periodontitis patients,P-Ae-EV),正常人厌氧菌组(Anaerobic EV in normal subjects,N-An-EV)和需氧菌组(Aerobic EV in normal subjects,N-Ae-EV),采用超速离心法提取细菌胞外囊泡后,透射电镜、NTA粒径分析和考马斯亮蓝染色对其大小、形态及外膜蛋白进行初步差异分析。2.采用CCK8实验和流式细胞技术检测胞外囊泡对牙龈上皮Ca9-22细胞增殖和凋亡的影响,检测牙龈上皮细胞跨膜电阻值、葡聚糖渗透率,以探究不同胞外囊泡对牙龈上皮屏障的影响,最后用Western blot、免疫荧光染色验证胞外囊泡对上皮细胞紧密连接蛋白的影响。3.采用丝线结扎法建立小鼠牙周炎模型,结扎10天后,去除丝线,继续牙龈注射不同类型的胞外囊泡7天,Western blot、q PCR检测牙龈组织中紧密连接蛋白的表达,HE染色和q PCR评估牙龈炎症情况,TRAP染色和Micro-CT评估牙槽骨损伤的程度,验证胞外囊泡对小鼠牙周炎进程的影响。采用16S测序评估胞外囊泡处理对小鼠口腔菌群的影响4.采用多粘菌素B(Polymyxin B,PMB)中和胞外囊泡的LPS后处理牙龈上皮细胞,通过跨膜电阻值、FD4渗透率、Western blot、q PCR和免疫荧光染色验证胞外囊泡携带的LPS在牙龈上皮屏障损伤中的作用。5.通过牙龈注射胞外囊泡模拟牙周致病菌胞外囊泡在体内的散播,活体成像观察胞外囊泡到达深层组织和器官的时间进程,牙周炎与肠道疾病的相关性结果1.透射电镜和NTA粒径分析显示P-An-EV比N-An-EV粒径大,而P-Ae-EV和N-Ae-EV粒径大小无显著差异,但考马斯亮蓝染色显示各组的蛋白组分存在差异。***、FD4、Western blot和IF结果提示仅P-An-EV可以破坏牙龈上皮屏障并降低紧密连接蛋白的表达,其余各组均无明显作用。3.小鼠体内实验结果显示:与空白组和N-An-EV组比较,P-An-EV显著降低牙龈组织中紧密连接蛋白的表达,诱导口腔菌群失调,加重牙龈炎症和牙槽骨的丢失。*** blot、IF等结果显示PMB中和P-An-EV携带的LPS以后,P-An-EV对上皮屏障的破坏下降,表明P-An-EV携带的LPS在牙周炎进程中发挥了重要作用。5.活体成像结果显示牙周细菌胞外囊泡很容易从口腔进入肠道。进一步采用P-An-EV处理肠上皮细胞后发现紧密连接蛋白表达降低,提示进入肠道的P-An-EV可能对肠道上皮屏障产生一定的影响。结论P-An-EV破坏上皮屏障和细胞间紧密连接,诱导口腔菌群失调,加重牙龈炎症和牙槽骨吸收,促进牙周炎的发生发展。

关键词：牙周炎牙周菌群细菌胞外囊泡牙龈上皮屏障

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口腔菌群及其胞外囊泡与系统性疾病关系的研究进展

引用

口腔生物医学 2022年第1期13卷 54-57,62页

作者：杨建花王文哲何小宁李蓓空军军医大学第三附属医院组织工程中心军事口腔医学国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病临床医学研究中心陕西西安710032 空军军医大学第三附属医院口腔组织病理学教研室陕西西安710032

口腔菌群失调可能诱发多种口腔疾病,还与人体系统性疾病的发生发展关系密切,而口腔细菌胞外囊泡(BEV)也在疾病发生中发挥重要作用。本文对口腔菌群及其BEV与系统性疾病之间的关系进行综述,为系统性疾病的早期预防、诊断以及临床治疗提... 详细信息

口腔菌群失调可能诱发多种口腔疾病,还与人体系统性疾病的发生发展关系密切,而口腔细菌胞外囊泡(BEV)也在疾病发生中发挥重要作用。本文对口腔菌群及其BEV与系统性疾病之间的关系进行综述,为系统性疾病的早期预防、诊断以及临床治疗提供新思路。

关键词：口腔菌群细菌胞外囊泡系统性疾病炎症性肠病类风性关节炎

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