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miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞黏附介导耐药中的作用

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临床与实验病理学杂志 2021年第11期37卷 1284-1290页

作者：缪小兵张邢松陈卓琳尹海兵江苏省南通市肿瘤医院/南通大学附属肿瘤医院病理科南通226361

目的探讨miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞黏附介导耐药(cell adhesion mediated-drug resistance,CAM-DR)中的作用。方法采用qPCR法分析人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中miR-185的表达。应用Western blot法检测人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中PYK2和pPYK2(Tyr402)的表达状态。在人胚肾HEK-293T细胞中利用荧光素酶报告基因实验分析miR-185是否可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验分析miR-185和PYK2对CAM-DR的影响。结果qPCR检测发现,OCI-Ly8与纤连蛋白(fibronectin,FN)黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.17±0.07)vs(1.01±0.11)(t=9.05,P细胞与FN黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.35±0.15)vs(1.01±0.15)(t=4.50,P=0.011);提示OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可下调miR-185的表达。Western blot法检测发现,OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在悬浮及FN黏附培养状态下,敲低miR-185可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在HEK-293T细胞中过表达miR-185后,3′非翻译区(untranslated region,UTR)空载体组与野生型PTK2B 3′UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.49±0.04)(t=9.54,P细胞黏附培养状态下shCtrl(对照慢病毒)+Doxo(多柔比星)组与sh-miR-185(miR-185下调慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(39.43±3.94)%vs(26.93±6.25)%(t=2.93,P=0.043);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下shCtrl+Doxo组与sh-miR-185+Doxo组细胞死亡比例:(43.67±9.66)%vs(16.10±3.42)%(t=4.66,P=0.009)。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下Ctrl(对照慢病毒)+Doxo组与PYK2(PYK2过表达慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(37.70±7.64)%vs(20.07±7.59)%(t=2.84,P=0.047);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下Ctrl+Doxo组与PYK2+Doxo组细胞死亡比例:(34.00±5.46)%vs(14.37±3.46)%(t=5.26,P=0.006)。细胞黏附介导的miR-185下调和PYK2表达增加,可促进CAM-DR。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(25.03±3.30)%vs(39.37±5.06)%(t=4.11,P=0.015);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(27.50±6.52)%vs(47.53±9.43)%(t=3.03,P=0.039);PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR表型。结论DLBCL细胞与FN黏附培养可下调miR-185表达,并上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平;在DLBCL中miR-185可靶向抑制PYK2,细胞黏附介导的miR-185下调可能通过诱导PYK2表达增加促进CAM-DR;PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR。

关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤 miR-185 PYK2 细胞黏附介导的耐药

STAT1在多发性骨髓瘤增殖及细胞黏附介导耐药中的作用

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临床与实验病理学杂志 2019年第12期35卷 1432-1436页

作者：吴雅珣何松钱丽萍徐小红江苏省南通市肿瘤医院病理科南通226361 江苏省南通市肿瘤医院护理部南通226361 江苏省南通市肿瘤医院肿瘤内科南通226361

目的分析信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对多发性骨髓瘤增殖及细胞黏附介导的耐药(cell adhesion-mediated drug resistance,CAM-DR)影响。方法H929及MM.1S细胞感染STAT1过表达慢病毒(Lv-STAT1)或对照慢病毒(Lv-Ctrl),CCK-8法分析过表达STAT1对H929及MM.1S细胞增殖的影响;CCK-8实验、台盼蓝拒染实验分析过表达STAT1对CAM-DR的影响;Western blot分析过表达STAT1对IRF2、BCL-2、Bax、Cleaved Caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,过表达STAT1可显著增强H929及MM.1S细胞的增殖能力(H929细胞48 h:t=5.78,P=0.004;H929细胞72 h:t=4.97,P=0.008;MM.1S细胞48 h:t=3.27,P=0.03;MM.1S细胞72 h:t=5.01,P=0.007)。与对照组相比,过表达STAT1可显著降低H929及MM.1S细胞对多柔比星的敏感性。与对照组相比,过表达STAT1可显著降低悬浮及黏附培养状态下多柔比星诱导的细胞死亡(H929悬浮:t=8.43,P=0.001;H929黏附:t=4.63,P=0.009;MM.1S悬浮:t=3.94,P=0.017;MM.1S黏附:t=3.91,P=0.017)。过表达STAT1可增强H929以及MM.1S细胞中IRF2、BCL-2的蛋白表达水平,并抑制Bax、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结论STAT1异常活化可促进多发性骨髓瘤细胞的增殖和CAM-DR,其可能通过激活STAT1-IRF2信号通路发挥作用。

关键词：多发性骨髓瘤信号转导与转录激活因子1 增殖细胞黏附介导的耐药

白血病骨髓基质细胞黏附对DNR在Jurkat细胞内蓄积及分布的影响

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重庆医学 2005年第9期34卷 1318-1320页

作者：王吉刚陈幸华李忠俊彭贤贵孔佩艳刘林刘红杨镇洲第三军医大学新桥医院血液科重庆400037

目的初步探讨细胞黏附介导耐药模型中DNR在Jurkat细胞内的蓄积浓度及分布特征。方法分离、培养骨髓基质细胞,Jurkat细胞与60Co照射的基质细胞层黏附培养,构建细胞黏附介导耐药模型,0.5μmol/L DNR作用24h,FITC-AnnexinV/PI标记后流式细... 详细信息

目的初步探讨细胞黏附介导耐药模型中DNR在Jurkat细胞内的蓄积浓度及分布特征。方法分离、培养骨髓基质细胞,Jurkat细胞与60Co照射的基质细胞层黏附培养,构建细胞黏附介导耐药模型,0.5μmol/L DNR作用24h,FITC-AnnexinV/PI标记后流式细胞仪定量Jurkat细胞的凋亡率及DNR在Jurkat细胞内蓄积浓度,荧光显微镜观察其荧光信号在Jurkat细胞内的分布。结果白血病基质细胞黏附组、正常基质细胞黏附组Jurkat细胞凋亡率分别为(6.05±0.54)%、(8.48±0.86)%,与悬浮对照组(25.74±6.15)%比较均相差非常显著(P细胞组与正常基质细胞组间相差显著(P细胞黏附并未降低Jurkat细胞内DNR的蓄积浓度,其红色荧光信号在Jurkat细胞内仍呈均匀、弥漫性分布。结论白血病骨髓基质细胞黏附能介导Jurkat细胞耐药,但其耐药机制可能独立于药物泵出增多致细胞内药物蓄积浓度降低这一经典耐药机制。

关键词：骨髓基质细胞细胞黏附介导的耐药多药耐药