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细胞酸化在癫痫终止中的可能作用机制

国际药学研究杂志 2017年第9期44卷 823-827页

作者：王志国潘毅广州中医药大学基础医学院广州519088

癫痫尤其是癫痫持续状态(SE),是一种严重危害人类健康的常见疾病。目前对癫痫发作和维持机制研究较多,但对癫痫如何终止却知之甚少。20世纪初已发现适度的细胞酸化可减缓或抑制癫痫患者的惊厥样发作。近年来许多研究证实,细胞酸化引起... 详细信息

癫痫尤其是癫痫持续状态(SE),是一种严重危害人类健康的常见疾病。目前对癫痫发作和维持机制研究较多,但对癫痫如何终止却知之甚少。20世纪初已发现适度的细胞酸化可减缓或抑制癫痫患者的惊厥样发作。近年来许多研究证实,细胞酸化引起癫痫发作终止的机制与抑制性和兴奋性神经递质失衡、酸敏感性离子通道开放等机制密切相关。因此,与之相关的靶向药物和治疗手段将成为探索癫痫治疗的发展方向之一。

关键词：细胞酸化癫痫终止机制

双甲基氨氯吡咪抑制人肺癌细胞株Na^+/H^+交换泵-1活性诱导肿瘤细胞酸化和凋亡

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第三军医大学学报 1998年第6期20卷 476-479页

作者：吴国明历为良黄桂君钱桂生第三军医大学附属新桥医院呼吸内科研究所解放军412医院呼吸内科

目的：研究Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵－１（ＮＨＥ－１）在肺癌细胞增殖／凋亡调控中的作用。方法：采用荧光探针法检则ＮＨＥ－１抑制剂双甲基氨氯吡咪（ＤＭＡ）对人肺巨细胞癌高转移株（ＰＬＡ－８０１Ｄ）细胞的酸化作用；以活细胞计数法... 详细信息

目的：研究Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵－１（ＮＨＥ－１）在肺癌细胞增殖／凋亡调控中的作用。方法：采用荧光探针法检则ＮＨＥ－１抑制剂双甲基氨氯吡咪（ＤＭＡ）对人肺巨细胞癌高转移株（ＰＬＡ－８０１Ｄ）细胞的酸化作用；以活细胞计数法检测ＤＭＡ对ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞增殖生长的抑制作用；采用原位细胞凋亡检测法观察ＤＭＡ诱导ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的凋亡。结果：经２５μｍｏｌ／Ｌ以上ＤＭＡ处理２４ｈ或５０μｍｏｌ／Ｌ处理８ｈ以上即能酸化ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞，其细胞内ｐＨ（ｐＨｉ）显著降低，并诱导了ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的凋亡，肿瘤细胞的增殖生长也显著受抑。结论：ＮＨＥ－１在肺癌细胞增殖／凋亡调控中起重要作用。

关键词： NHE-1 细胞酸化细胞凋亡肺肿瘤 DMA

1.细胞酸化逆转MSC、CD34+脐血细胞耐药的研究 ***1基因3’-端报告载体的构建

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1.细胞酸化逆转MSC、CD34+脐血细胞耐药的研究 ***1基因3’-端报...

作者：王若君北京协和医学院

学位级别：硕士

背景：肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance, MDR)是由一种药物诱发,引起对其它多种不同结构的药物同时产生交叉耐药,导致一些联合化疗方案的失败。多药耐药产生的机制多种多样,主要包括减少细胞内药物蓄积、抑制细胞凋亡以及增强... 详细信息

背景：肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance, MDR)是由一种药物诱发,引起对其它多种不同结构的药物同时产生交叉耐药,导致一些联合化疗方案的失败。多药耐药产生的机制多种多样,主要包括减少细胞内药物蓄积、抑制细胞凋亡以及增强DNA修复等多方面,各种机制往往交叉存在。最近有很多研究证实,无论何种机制存在,细胞内pH (intracellular pH, pHi)增高是耐药细胞株所具有的共同改变。已有研究表明,细胞内酸化降低细胞pHi后,能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能,从而增加细胞对罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)的累积,逆转细胞耐药。P-gp是由MDR1基因编码的,ATP依赖性的跨膜外流泵,它可将细胞内化疗药物排出细胞,降低胞内化疗药物的蓄积浓度进而使肿瘤细胞逃避药物带来的毒害,从而导致肿瘤细胞耐药。有临床的研究显示,许多白血病病人肿瘤细胞的耐药与MDR1基因的表达没有显著相关性,但在某些低表达P-gp的肿瘤细胞内的Rh123却有显著的变化。目前在不表达或低表达MDR1基因且分化程度低的细胞中,利用细胞酸化改变细胞pHi,是否会改变细胞对罗丹明123的累积尚未见报道。目的：本研究通过改变肿瘤细胞系HL-60、间充质干细胞以及CD34+脐血细胞pHi,探讨三种细胞在不同pHi下其细胞内Rh123累积的变化,为明确二者关系提供实验依据,并且为逆转肿瘤多药耐药提供新的方法。方法：在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中,探讨利用细胞酸化改变细胞pHi,其罗丹明123的累积变化,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法。应用高钾缓冲溶液和钠氢交换蛋白1(NHE1)的特异性抑制剂酸化细胞,改变细胞内pH值;采用MTT法观察高钾缓冲溶液和NHE1的特异性抑制剂诱导的细胞内酸化对细胞活力的影响;应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用实时定量PCR技术检测细胞酸化前和酸化后MDR1基因在mRNA水平的表达;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及CD34+脐血细胞内Rh123累积的影响。结果：半定量PCR和实时定量PCR检测结果显示,HL-60、MSC及CD34+脐血细胞的MDR1基因在mRNA水平上未见明显表达MDR1基因,正常条件下,三种细胞pHi值之间没有显著差异。细胞酸化3小时对HL-60、MSC及CD34+脐血细胞的活力无明显影响;在相同pHi的条件下,HL-60、MSC及CD34+脐血细胞内Rh123(Rhodamine 123, Rh 123)的累积与对照相比有显著差别;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。结论：在HL-60、MSC及CD34+脐血细胞这三种不表达或低表达MDR1的细胞内,Rh123的累积呈现pHi值负相关效应;并且,细胞分化程度越低,细胞内Rh123的累积越少。上述结果从另一方面说明,细胞pHi的增高可能有助于肿瘤细胞对抗化疗药物的杀伤作用而促进耐药的发生与发展,并且对于分化程度低的肿瘤干细胞来说,对抗化疗药物的杀伤作用可能更强。

关键词：细胞酸化细胞内pH值多药耐药

氨氯吡咪诱导白血病K-562细胞酸化及凋亡研究

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新乡医学院学报 2010年第1期27卷 27-29页

作者：涂明辉邹典定何秉燕许敏湖北省襄樊市第一人民医院儿科湖北襄樊441000 武汉大学中南医院儿科湖北武汉430071

目的研究氨氯吡咪诱导白血病细胞株K-562细胞酸化及凋亡的作用。方法采用荧光探针法检测氨氯吡咪对人白血病细胞株K-562细胞的酸化作用;采用流式细胞仪观察氨氯吡咪对K-562细胞周期的影响及诱导细胞凋亡的情况。结果与0 h相比,100μmol... 详细信息

目的研究氨氯吡咪诱导白血病细胞株K-562细胞酸化及凋亡的作用。方法采用荧光探针法检测氨氯吡咪对人白血病细胞株K-562细胞的酸化作用;采用流式细胞仪观察氨氯吡咪对K-562细胞周期的影响及诱导细胞凋亡的情况。结果与0 h相比,100μmol·L^(-1)氨氯吡咪处理8 h即能明显酸化K-562细胞,细胞内pH明显降低(P细胞24 h后G_1期细胞增加差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各浓度氨氯吡咪处理K-562细胞24 h后G_1期细胞增加(P细胞降低(P细胞也有所增加(P细胞处理24 h后细胞凋亡率明显增加(P细胞处理8、24、48 h凋亡细胞比率均明显增加(P酸化K.562细胞,使细胞内pH显著降低,并诱导K-562细胞凋亡,肿瘤细胞的增殖生长也显著受到抑制,在白血病治疗中可能具有一定的应用前景。

关键词： K-562细胞氨氯吡咪细胞酸化凋亡

细胞酸化对K562／A02耐药细胞株中P-糖蛋白的影响

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中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 568-573页

作者：芦颖李庆华马丽李彬袁文肃茹永新王建祥庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探讨细胞酸化对K562/A02细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法。利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定K562及K562/A02细胞内pH值(intracellularp H,pHi);采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/A02细胞中P-gp功能的影响;分别采用Western blot及实时定量RT-PCR技术检测P-gp的蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化。结果表明:细胞酸化3小时对K562及K562/A02细胞的活力影响较小。在K562/A02细胞中,P-gp的功能随pHi的降低而减弱,细胞酸化明显增加了细胞对罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)的累积,并抑制了P-gp介导的Rh123外排。细胞酸化还分别在蛋白水平和mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达,并且这种抑制具有pHi及时间的依赖性。结论:细胞酸化能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能。

关键词：细胞酸化细胞内pH值 P一糖蛋白多药耐药

细胞内酸化逆转HL-60、MSC和脐血CD34＋细胞耐药的研究

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 666-670页

作者：王若君常国强李庆华王立洪金薇娜蔺亚妮李华文庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水... 详细信息

本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水平的表达;利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞内Rh123累积的影响。结果表明:细胞酸化3小时对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞的活力无明显影响,细胞酸化能明显改变细胞对Rh123的累积;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。结论 :细胞酸化能逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞的耐药。

关键词：细胞酸化多药耐药 HL-60细胞 MSC细胞 CD34+

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氨脉冲酸化蟾蜍膀胱膜上皮细胞的研究

五邑大学学报（自然科学版） 2002年第3期16卷 38-41页

作者：熊玉涛五邑大学科研处广东江门529020

用pH荧光探剂2,7-二环(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光黄(BCECF)研究氨脉冲对蟾蜍膀胱上皮细胞的酸化效果,测量细胞内pH(pHi)值的变化. 当用25mmol NH4Cl溶液作用于膀胱膜浆液面(S面)时,pHi值负增长0.15,细胞被酸化;而作用于粘液面(M面)时不... 详细信息

用pH荧光探剂2,7-二环(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光黄(BCECF)研究氨脉冲对蟾蜍膀胱上皮细胞的酸化效果,测量细胞内pH(pHi)值的变化. 当用25mmol NH4Cl溶液作用于膀胱膜浆液面(S面)时,pHi值负增长0.15,细胞被酸化;而作用于粘液面(M面)时不能酸化细胞. 将50molBa2+加到S面,细胞的酸化被阻止. 这说明+4NH通过上皮细胞底侧膜的K+通道进入细胞使pHi降低. 用季胺离子(TMA+)代替Na+,能加大酸化幅度. 1 mmol amiloride能使pHi回升速度和幅度都大大降低,这表明位于上皮细胞顶膜的Na+/H+交换参与了pHi调节.

关键词：氨脉冲酸化蟾蜍膀胱膜上皮细胞 pHi调节 Na^+/H^+交换细胞酸化细胞膜

Cariporide降低K562/DOX细胞株表达P-糖蛋白而逆转耐药的影响

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中国药学杂志 2010年第10期45卷 739-743页

作者：李庆华芦颖马丽李彬袁文肃茹永新王建祥庞天翔中国医学科学院-北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨cariporide对耐药细胞株K562/DOX中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drugresistance,MDR)提供新方法。方法应用cariporide对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定野生型细胞系K562及耐药细胞株K562/DOX细胞内pH值及细胞酸化对K562和K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响。采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/DOX细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果 Cariporide处理3h对K562及K562/DOX细胞的活力影响较小。在K562/DOX细胞中,P-gp的外排药物能力随细胞内pH值的降低而减弱,cariporide明显增加了细胞对罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)和阿霉素的累积。细胞酸化还在mRNA水平抑制了K562/DOX细胞中P-gp的表达。结论 Cariporide能够抑制K562/DOX耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。

关键词：卡立泊来德细胞酸化细胞内pH值 P-糖蛋白多药耐药

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酸敏感的离子通道研究

中华生物医学工程杂志 2010年第1期16卷 79-82页

作者：李丽济宁医学院日照校区生理学教研室山东省日照市276826

组织细胞酸化是机体生理及病理条件下的常见现象。剧烈运动时，骨骼肌无氧糖酵解增强，乳酸积聚，细胞外液pH值降低；组织损伤、缺氧、癫痫、感染等状态下也常伴有细胞外液pH值的降低。机体如何感受细胞外液pH值的变化来进一步调整其活... 详细信息

组织细胞酸化是机体生理及病理条件下的常见现象。剧烈运动时，骨骼肌无氧糖酵解增强，乳酸积聚，细胞外液pH值降低；组织损伤、缺氧、癫痫、感染等状态下也常伴有细胞外液pH值的降低。机体如何感受细胞外液pH值的变化来进一步调整其活动，一直是此领域研究的难解之谜。

关键词：细胞酸化离子通道细胞外液组织损伤 pH值病理条件剧烈运动糖酵解