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兔耳前边缘静脉的类内皮细胞扫描电镜结构

解剖学报 2006年第2期37卷 208-210页

作者：陈华勇柏树令王军朱小兵刘月华中国医科大学组织工程学教研室中国医科大学第二电镜室

目的观测新发现的兔耳前边缘静脉类内皮细胞扫描电镜结构。方法取日本大耳白兔耳前边缘静脉,常规制备扫描电镜样本,对新发现的类内皮细胞结构做扫描电镜观察。结果在兔耳前边缘静脉内皮细胞与基膜之间存在类似内皮细胞样结构,分布于血... 详细信息

目的观测新发现的兔耳前边缘静脉类内皮细胞扫描电镜结构。方法取日本大耳白兔耳前边缘静脉,常规制备扫描电镜样本,对新发现的类内皮细胞结构做扫描电镜观察。结果在兔耳前边缘静脉内皮细胞与基膜之间存在类似内皮细胞样结构,分布于血管干和属支开口处。每个类内皮细胞呈椭圆形或树叶状,最大长径(8.32±1.04)μm,最大宽径为(5.79±0.68)μm,长径/宽径比值为1.45±0.22,其长轴与血管纵轴呈平行排列。细胞之间以线状结构相连成“串珠”样,且线状结构将细胞压成凹陷或其末端嵌入细胞内;相邻两个细胞间的线长(6.41±2.45)μm。结论兔耳前边缘静脉内膜含有类内皮细胞结构;以线状结构相连也是细胞间连接方式之一。

关键词：耳边缘静脉内皮细胞细胞连接扫描电镜术兔耳

饲粮中二甲酸钾对幼草鱼生产性能、消化吸收能力和肠道屏障功能的影响

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饲粮中二甲酸钾对幼草鱼生产性能、消化吸收能力和肠道屏障功能的...

作者：薛雪四川农业大学

学位级别：硕士

二甲酸钾由甲酸钾和甲酸通过氢键连接形成,具有抑菌功能,是一种绿色生长促进剂。有研究表明,饲粮中添加二甲酸钾可提高杂食和肉食性鱼类的生产性能。鱼类的生长与其对营养物质的消化吸收密切相关,而肠道是消化吸收的主要场所,肠道屏障... 详细信息

二甲酸钾由甲酸钾和甲酸通过氢键连接形成,具有抑菌功能,是一种绿色生长促进剂。有研究表明,饲粮中添加二甲酸钾可提高杂食和肉食性鱼类的生产性能。鱼类的生长与其对营养物质的消化吸收密切相关,而肠道是消化吸收的主要场所,肠道屏障结构直接影响肠道的消化吸收功能。因此,本试验研究了饲粮中添加不同水平的二甲酸钾对幼草鱼(Ctenopharyngodon idella)生产性能、消化吸收能力、肠道物理屏障和微生物组成的影响,并以相关指标为标识确定了幼草鱼饲粮中二甲酸钾的最适添加量。试验选用1620尾健康幼草鱼(5.43±0.01g),随机分成6个处理,每个处理6个重复,每个重复45尾鱼,分别饲喂含0.0、1.5、3.0、4.5、6.0和7.5 g/kg二甲酸钾的饲粮70天。主要研究结果如下:1、饲粮添加适宜水平的二甲酸钾显著提高了幼草鱼的末重、增重率、特定生长率和采食量(P0.05)。2、饲粮中添加适宜水平的二甲酸钾显著提高幼草鱼肠道的消化吸收能力:(1)提高了肠重、肠长、肠体指数、中肠皱襞高度和肠道杯状细胞数量(P0.05),降低了肠黏膜通透性;(2)降低了ROS、MDA和PC含量,提高了GSH含量和GPx、CAT酶活力(P连接蛋白ZO-1、Occludin、claudin(-b、-c、-f、-11)的基因表达,下调了孔形成紧密连接蛋白claudin-12和claudin-15a的基因表达,并提高了ZO-1、Occludin和claudin-3的蛋白表达(P细胞间的紧密连接;(4)上调了粘附连接中E-cadherin、Nectin、β-catenin、α-catenin和Afadin及桥粒芯蛋白DSG2的基因表达(P细胞间的锚定连接作用;(5)上调了缝隙连接蛋白GJA1a、GJA1b、Panx1a、Panx2的基因表达(P连接;(6)上调了相关信号分子Rho A、ROCK、MLCK、NMII和p38 MAPK的基因表达,上调了MLCK的蛋白表达(P细胞的紧密连接、黏附连接、桥粒和缝隙连接改善肠道物理屏障;通过二甲酸钾的抑菌特性优化肠道微生物结构。分别根据增重率、肠道Na/K-ATP酶活力、ROS和D-乳酸含量,确定幼草鱼(5.73-102.64 g)饲粮中二甲酸钾的最适添加量为3.85、4.05、3.61、5.82 g/kg。

关键词：二甲酸钾草鱼消化吸收细胞连接肠道微生物

脑动静脉畸形部分栓塞术后巢内血管稳定性相关病理生理学的研究

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脑动静脉畸形部分栓塞术后巢内血管稳定性相关病理生理学的研究

作者：郭德华郑州大学

学位级别：硕士

研究背景及目的脑动静脉畸形(brain Arteriovenous Malformation,bAVM)是引起脑出血的主要病因之一。血管内介入栓塞治疗是治疗bAVM的重要手段,但单纯介入栓塞治愈bAVM的适应症范围较窄且操作难度高,因此很大一部分病人仅可行姑息或辅... 详细信息

研究背景及目的脑动静脉畸形(brain Arteriovenous Malformation,bAVM)是引起脑出血的主要病因之一。血管内介入栓塞治疗是治疗bAVM的重要手段,但单纯介入栓塞治愈bAVM的适应症范围较窄且操作难度高,因此很大一部分病人仅可行姑息或辅助性栓塞,后续根据病情再联合外科切除和放疗联合治疗。目前部分栓塞在降低bAVM再出血率中的作用仍存在争议,大量的临床随访研究显示单纯部分栓塞术后的bAVM患者在术后第1年破裂出血风险最高,且出血风险与部分栓塞手术次数有关;1年后bAVM破裂风险逐渐降低,而在5-7年后接受部分栓塞的bAVM病人在生存率上相较不处理的病人甚至会显著占优。这向我们暗示了部分栓塞术对于bAVM稳定性的影响可能是动态的,bAVM在部分栓塞术后可能存在一段高破裂出血风险时期,然而这种猜想国内外尚缺乏相关基础研究证实,探讨介入部分栓塞术后bAVM的病理生理学变化规律将有助于分阶段精准化的治疗病变。血管稳定性是血管状态的综合性评价,评价标准包括血管血流动力学状态,血管炎症浸润与内皮连接紧密性、血管渗漏性、血管增殖凋亡活跃性等。目前国内外公认bAVM破裂出血与血流动力学异常、病灶血管炎症浸润以及病灶血管增殖活跃密切相关,即病灶血管处于不稳定状态。因此本研究拟通过DSA影像量化血流动力学情况,并结合免疫组化、免疫荧光、TUNEL荧光等基础实验,探寻bAVM病灶在部分栓塞术后不同时间段组织与分子生物学层面血管稳定性的具体变化规律,尝试确定部分栓塞术后bAVM破裂出血的相对高风险时期,为部分栓塞在bAVM中的应用提供更准确的基础理论指导。材料与方法调取郑州大学人民医院医院神经外科2018年6月至2021年1月资深医师手术切除并送检病理的bAVM标本共45例,排除质量过差5例后,40例样本中中单纯切除16例,复合手术24例。统计患者包括年龄、S-M分级在内的基线资料,分析基线资料差异,根据基线材料情况,采用倾向性匹配从单纯切除组中选出9例作为对照组。实验组为复合手术组24例,按照部分栓塞与手术切除的时间间隔分为短期组(间隔时间28天,n=7)。首先通过HE染色观察组织大体病理特征,与先前研究对比,确定组织来源可靠性。确定所有标本可靠后,通过造影图像帧数统计明确部分栓塞干预后的血流动力学变化情况。随后,通过MMP-9/VE-cadherin多重免疫荧光检测观察栓塞术后不同时间血管炎症浸润情况与细胞连接的完整性;通过免疫组化半定量VEGF、eNOS与CD31免疫荧光计数新生血管从蛋白与组织层面共同确定部分栓塞术后bAVM组织增殖情况。同样的,通过免疫组化半定量Caspase-3与TUNEL染色计数凋亡细胞从蛋白与组织层面共同确定部分栓塞术后bAVM组织凋亡情况。对于所有计量统计资料,符合正态分布者采用单因素方差分析,不符合正态分布者采用Kruskal—Wallis检验,对于分类资料采用Fisher确切检验。结果HE染色大体病理观结果显示各组病理特征与先前研究相符。血流动力学结果显示部分栓塞后即刻大多数bAVM病灶的血流速度都发生了显著变化(P细胞连接完整性,多重免疫荧光定性显示,各组bAVM细胞间连接的完整性均较差,尤其是中期组细胞间连接缺失最明显;此外仅中期组可见全血管壁广泛炎症细胞浸润的现象,而其他各组炎症浸润少见或仅有散在炎症细胞附着于血管内皮。荧光定量分析显示中期组连接完整性缺失较其他组更加显著(P细胞(P<0.05)。结论bAVM部分栓塞术后的血管稳定性是动态变化的,在术后1～28天血管稳定性最低,而在术后最晚至85天可观察到血管稳定性的恢复。

关键词：脑动静脉畸形脑血管介入部分栓塞术血流动力学炎症细胞连接细胞增殖细胞凋亡

五子衍宗丸对TAp73基因抑制所致少弱精子症模型小鼠的防治作用及机制研究

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五子衍宗丸对TAp73基因抑制所致少弱精子症模型小鼠的防治作用及...

作者：刘红娟安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的本文旨在考察抑制TAp73基因对精子质量的影响,建立TAp73基因抑制的少弱精子症(oligoasthenospermia,OA)模型,并通过经典复方制剂五子衍宗丸(Wuzi-Yanzong-Wan,WZYZW)对TAp73基因抑制小鼠进行干预,探讨其作用机制,以期寻求治疗男性... 详细信息

目的本文旨在考察抑制TAp73基因对精子质量的影响,建立TAp73基因抑制的少弱精子症(oligoasthenospermia,OA)模型,并通过经典复方制剂五子衍宗丸(Wuzi-Yanzong-Wan,WZYZW)对TAp73基因抑制小鼠进行干预,探讨其作用机制,以期寻求治疗男性不育的新途径。方法实验一:基于TAp73基因抑制的OA小鼠模型的研究取体重为18-22 g的C57BL/6雄性小鼠20只,随机分为正常对照组和Pifithrin-α组。Pifithrin-α组连续腹腔注射Pifithrin-α(2.5mg/kg)30天,正常对照组给与等量溶剂。30天后称重法检测动物体重、脏器重量,计算脏器系数;Makler精子计数仪分析精子质量(密度、活力、活率和畸形率);流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测精子凋亡率;原位末端转移酶标记技术(Terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick-end labeling,TUNEL)检测睾丸组织GC凋亡率;酶联免疫法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清激素水平;苏木素伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色法和透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)观察睾丸组织病理改变和血睾屏障(Blood-testis barrier,BTB)、外质特化(Ectoplasmic specialization,ES)等细胞连接结构变化;实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)技术和蛋白质印迹(Western bloting,WB)法测定TAp73、Nectin-2、闭锁连接蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)表达情况实验二:五子衍宗丸对TAp73基因抑制所致少弱精子症模型小鼠的影响将60只C57BL/6雄性小鼠随机分成正常对照组、模型组、生精胶囊(Shengjing-Jiaonang,SJJN)组(1.6 g/kg)、WZYZW低、中、高剂量组(1.0、2.0、4.0 g/kg),每组10只,除正常对照组外其余各组连续腹腔注射Pifithrin-α(2.5mg/kg)30天,制备TAp73基因抑制OA模型。造模同时各组按剂量灌胃给药,正常组、模型组给予等容量蒸馏水,连续30天,末次给药后收集动物血液、睾丸、附睾组织。称重法检测动物体重、脏器重量,计算脏器系数;Makler精子计数仪分析精子质量(密度、活力、活率);FCM检测精子凋亡率;ELISA法测定血清激素水平;HE染色和TEM观察睾丸组织病理改变和BTB、ES等细胞连接结构变化;RT-PCR技术和WB方法测定TAp73、integrin-α6、N-Cadherin、Nectin-2、Occludin等细胞粘附因子表达情况。结果实验一:与正常对照组相比,Pifithrin-α组小鼠精子密度和精子活力显著降低,TAp73和Nectin-2基因表达被抑制,睾丸组织紧密连接(Tight junction,TJ)和顶端ES结构紊乱。实验二:与正常对照组相比,模型组小鼠体重、心、肝、肺、肾、睾丸等脏器系数无明显变化;附睾系数、精子质量、睾酮(Testosterone,T)水平显著下降,精子凋亡率、畸形率明显增加,睾丸出现病理性损伤,TJ和顶端ES出现严重异常;Occludin蛋白表达异常增加,TAp73、integrin-α6、N-Cadherin、Nectin-2等表达显著下降。与模型组相比,WZYZW各组能明显提高精子质量和T水平,显著降低精子畸形率及凋亡率,改善睾丸组织病理损伤及TJ和顶端ES的异常变化;明显降低Occludin蛋白表达并显著提高TAp73、integrin-α6、N-Cadherin、Nectin-2等表达。结论通过连续30天腹腔注射Pifithrin-α(2.5 mg/kg),成功制备出TAp73基因抑制的OA小鼠模型。TAp73基因抑制可导致精子发生及成熟障碍,可能是OA潜在发病机制;WZYZW通过增加TAp73基因的表达,影响细胞粘附分子,调节睾丸组织的细胞连接动态重塑,对TAp73抑制所致OA有一定的防治作用。

关键词： WZYZW OA TAp73 Nectin-2 细胞连接

细胞黏附因子在子宫腺肌病发病机制中作用的研究进展

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现代妇产科进展 2017年第7期26卷 545-547页

作者：贾晨阳汪沙李金皎段华首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心北京100006

子宫腺肌病(ADS)是严重影响育龄妇女生殖健康的难治性疾病。细胞黏附分子(CAM)是介导细胞连接的主要细胞因子,其在细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的连接黏附中发挥重要作用。ADS是一种良性疾病,但具有黏附、侵袭和转移等恶性特征。研... 详细信息

子宫腺肌病(ADS)是严重影响育龄妇女生殖健康的难治性疾病。细胞黏附分子(CAM)是介导细胞连接的主要细胞因子,其在细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的连接黏附中发挥重要作用。ADS是一种良性疾病,但具有黏附、侵袭和转移等恶性特征。研究发现,CAM在异位子宫内膜向子宫肌层侵袭迁移的过程中起着重要作用。本文对CAM在ADS发病中作用机制的研究进展进行综述。

关键词：子宫腺肌病细胞粘附因子细胞连接

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中华实验外科杂志 2018年第9期35卷 1607-1609页

作者：陆金金海建斌李凡江克华陈忠杨为民华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030

目的探讨葡萄糖诱导促进膀胱肿瘤细胞间隧道纳米管（TNTs）的形成及其机制。方法将高侵袭能力膀胱癌细胞124用Mito-Tracker标记后，与低侵袭能力膀胱癌细胞RT4混合培养24h，采用Actin-Tracker Green标记细胞骨架蛋白纤维型肌动蛋白（F-a... 详细信息

目的探讨葡萄糖诱导促进膀胱肿瘤细胞间隧道纳米管（TNTs）的形成及其机制。方法将高侵袭能力膀胱癌细胞124用Mito-Tracker标记后，与低侵袭能力膀胱癌细胞RT4混合培养24h，采用Actin-Tracker Green标记细胞骨架蛋白纤维型肌动蛋白（F-actin），观察两者之间是否形成隧道纳米管。RT4细胞和T24细胞分别培养12、24h后收集细胞培养液，采用液相色谱和质谱分析法进行代谢组学分析，筛选出两种细胞微环境中的差异因子。采用微环境中的差异因子诱导T24细胞，进一步验证差异因子是否能诱导增强124细胞形成TNTs的能力。Westernblot法检测细胞骨架调节蛋白Fyn、Rho相关激酶（ROCK）及磷酸化桩蛋白（p-paxillin）的表达水平差异。结果T24与RTg细胞之间混合培养可形成TNTs，其主要构成成分为F-肌动蛋白（F-actin）。代谢组学分析发现，葡萄糖为两细胞微环境的差异因子，能诱导促进T2d与RT4细胞之间形成TNTs（P=0．005）。T24与RT4细胞微环境之间葡萄糖浓度差异能上调细胞骨架相关蛋白Fyn、ROCK和p-paxillin的表达水平（P=0．001、0．004、0．010）。结论不同侵袭能力膀胱癌细胞微环境中葡萄糖浓度差异能促进两细胞之间TNTs的形成。提高膀胱癌细胞微环境中葡萄糖的水平，能上调细胞骨架相关蛋白Fyn／ROCK／p-paxillin信号通路的活性，是葡萄糖诱导促进膀胱肿瘤细胞之间TNTs形成潜在的机制。

关键词：隧道纳米管膀胱癌细胞连接细胞微环境

ACT1对小鼠肝移植物缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

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ACT1对小鼠肝移植物缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

作者：王月凡华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探究ACT1对小鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护功能及其相关机制。方法:1、建立供肝延时冷保存模型:(A)UW液保存组、(B)ACT1+UW组。A组供肝用UW液保存,B组供肝用ACT1联合UW液保存,设置12h、18h及24h三个观察点。观察移植物病理改变、... 详细信息

目的:探究ACT1对小鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护功能及其相关机制。方法:1、建立供肝延时冷保存模型:(A)UW液保存组、(B)ACT1+UW组。A组供肝用UW液保存,B组供肝用ACT1联合UW液保存,设置12h、18h及24h三个观察点。观察移植物病理改变、细胞凋亡情况和Cx43的表达。2、建立供肝延时冷保存原位肝移植模型:(A)对照组、(B)UW组、(C)ACT1+UW组。A组供肝取下后立即进行移植手术,UW液保存大约50min;B组和C组供肝用UW液或者ACT1联合UW液保存18h后进行移植手术。设置移植后6h和28d两个观察点。在移植术后6h,取血清及肝组织标本,评估移植物损伤、肝功能、中性粒细胞浸润、炎性因子(CD68,CD62E,TNF-α)表达水平、紧密连接形态及Cx43的表达情况;在移植术后28d,统计生存率,取血清及肝组织标本,评估移植物损伤、肝功能、胆管增生及纤维化、炎性因子(CD68,CD62E,TNF-α)表达水平、紧密连接形态及Cx43的表达情况。结果:1、在经历12h或18h冷保存后,两组供肝损伤程度无明显差异。在经历24h冷保存后,A组肝细胞广泛坏死、空泡化而B组肝细胞形态正常,A组细胞凋亡显著多于B组,A组Cx43表达显著高于B组。2、(1)术后6h:A组移植物结构正常;B组移植物结构严重受损,广泛空泡化和坏死,肝窦淤血;C组移植物有轻微水肿,肝窦无淤血。B组血清生化指标显著高于A、C两组。B组中性粒细胞浸润显著多于A、C组。B组CD68,CD62E,TNF-α表达均大幅高于A、C两组。透射电镜分析B组紧密连接结构损坏严重,A、C两组相对完整。C组Cx43表达显著强于A、B两组。(2)术后28d:三组小鼠存活率均为100%。B组移植物可见大量坏死灶、淤血,A、C组移植物结构相对正常。B组血清ALT、AST较A、C两组显著升高。B组CK19、α-SMA的表达和纤维化程度显著高于A、C两组。B组CD68,CD62E,TNF-α表达均显著高于A、C两组。透射电镜显示B组紧密连接损伤较A、C两组严重。C组Cx43表达显著高于A、B两组。结论:ACT1联合UW液保存供肝,可以通过稳定肝脏细胞连接延长供肝保存时间,改善供肝质量,从而缓解移植肝的缺血再灌注损伤及远期并发症。

关键词：器官保存缺血再灌注损伤原位肝移植细胞连接 α连接蛋白43羧基端肽1

细胞间相互作用影响iPSc来源肝细胞的成熟

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中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1344-1350页

作者：王鼎郭丽媛李伟强广州医科大学附属第三医院妇产科研究所实验部广东省生殖与遗传重点实验室广州510150 中山大学干细胞与组织工程中心教育部重点实验室广州510080

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可... 详细信息

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可获得白蛋白(albumin,ALB)阳性的成熟肝细胞,不传代法获得的细胞更接近于肝细胞形态,两组均获得甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)和ALB阳性表达的细胞;GATA6(GATA binding protein 6)和HNF4A(hepatocyte nuclear factor 4 alpha)表达水平没有显著性差异,但不传代法分化细胞的AFP和ALB表达量高于传代法,存在显著性差异。结果提示,细胞因子与细胞间、多细胞间相互作用等因素影响多能干细胞的分化,细胞间相互作用有利于肝细胞定向诱导分化过程中肝细胞的成熟。

关键词：诱导多能干细胞诱导分化细胞连接肝细胞肝细胞成熟

CRRT对SAP患者血清诱导脐静脉内皮细胞通透性的影响及机制

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CRRT对SAP患者血清诱导脐静脉内皮细胞通透性的影响及机制

作者：黄丽萍重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨连续性肾替代治疗(CRRT)对SAP患者血管内皮细胞通透性的影响及其机制。方法:分别用SAP患者CRRT治疗前、治疗6h、20h血清刺激内皮细胞5h,同时以300mmol/L H2O2刺激细胞作为阳性对照,以健康对照者血清刺激作为阴性对照。采用免... 详细信息

目的:探讨连续性肾替代治疗(CRRT)对SAP患者血管内皮细胞通透性的影响及其机制。方法:分别用SAP患者CRRT治疗前、治疗6h、20h血清刺激内皮细胞5h,同时以300mmol/L H2O2刺激细胞作为阳性对照,以健康对照者血清刺激作为阴性对照。采用免疫荧光染色、荧光分光度计及共聚焦显微镜检查检测观察内皮细胞通透性、内皮细胞紧密连接蛋白Claudin1、Occludin及粘附连接蛋白VE-cadherin表达和定位的变化。结果:SAP患者治疗前血清和H2O2一样,可明显诱导单层脐静脉内皮细胞通透性增高,CRRT治疗后其血清诱导的单层内皮细胞通透性明显降低。CRRT治疗前组内皮细胞脱落明显,而且内皮细胞间隙增大明显,而随CRRT治疗时间的推移,SAP患者血清诱导的内皮细胞脱落减少,内皮细胞间隙变小,细胞间连接蛋白表达逐渐增多。结论:SAP患者血清可诱导单层内皮细胞通透性增加。CRRT治疗可减轻单层内皮细胞通透性,增加细胞间连接蛋白,从而降低内皮细胞通透性。

关键词：连续性肾替代治疗内皮细胞通透性细胞连接