检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞转染技术在本科实验教学中的应用

实验技术与管理 2015年第8期32卷 68-69,74页

作者：王宏刚白艳玲朱玉山张金红刘方南开大学生物实验教学中心天津300071

结合本科生实验教学的特点,将细胞转染技术改造成适合本科生实验教学的内容。将含有线粒体信号肽和DsRed基因序列的载体MitoDsred转入HeLa细胞,在荧光显微镜下检测到发出红色荧光的DsRed定位于线粒体基质中。该实验可以单独开设,也可以... 详细信息

结合本科生实验教学的特点,将细胞转染技术改造成适合本科生实验教学的内容。将含有线粒体信号肽和DsRed基因序列的载体MitoDsred转入HeLa细胞,在荧光显微镜下检测到发出红色荧光的DsRed定位于线粒体基质中。该实验可以单独开设,也可以与其他实验技术组合成基础性或综合性实验开设。通过该实验可以帮助学生掌握细胞转染及蛋白亚细胞定位的相关知识,提高学生的动手能力和综合素质。

关键词：细胞转染教学改革实验教学

密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2008年第7期24卷 663-667页

作者：刘立鸿许璐李轶杰张富春马正海新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-... 详细信息

目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。

关键词：密码子优化 HPV16衣壳基因共表达真核载体细胞转染

猪Jiv90基因打靶载体的构建与细胞转染试验

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第10期39卷 1-9页

作者：李宇立张彦明程敏杨幼聪西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

【目的】构建猪Jiv90基因的同源打靶载体,并转染猪血管内皮细胞系(SUVEC),对Jiv90基因的敲除效果进行初步验证。【方法】根据NCBI中公布的Jiv90基因序列,克隆得到Jiv90基因核心区两侧的基因序列,并以此为长短臂,构建了可定点敲除Jiv90... 详细信息

【目的】构建猪Jiv90基因的同源打靶载体,并转染猪血管内皮细胞系(SUVEC),对Jiv90基因的敲除效果进行初步验证。【方法】根据NCBI中公布的Jiv90基因序列,克隆得到Jiv90基因核心区两侧的基因序列,并以此为长短臂,构建了可定点敲除Jiv90基因的打靶载体。用该载体转染SUVEC,通过新霉素(G418)和丙氧鸟苷(GANC)的筛选得到稳定的细胞株,再利用PCR检测neo基因在细胞基因组上的整合情况,最后对筛选得到的neo阳性细胞进行猪瘟病毒(CSFV)感染试验,并用实时定量PCR(Real-time PCR)检测CSFV的增殖情况。【结果】以提取所得品质良好的SUVEC全基因组DNA为模板,克隆得到了针对Jiv90基因打靶的核心区两侧基因序列,基因片段长度分别为4 522bp和1 944bp。将长短臂与打靶骨架载体pA2T相连后,构建了关于猪Jiv90基因的同源打靶载体JKS。用JKS载体转染SUVEC,通过1 500μg/mL G418和200nmol/mL GANC正负筛选,得到了稳定转染JKS载体的SUVEC。对于稳定筛选后的试验组细胞,感染CSFV并进行Real-time PCR,结果表明,正常细胞中的CSFV核酸含量是转染JKS载体细胞的3.65倍。【结论】成功扩增了针对猪Jiv90基因的同源长短臂,并构建了猪Jiv90基因的打靶载体JKS,敲除Jiv90基因细胞中的CSFV核酸片段含量显著降低,说明Jiv90基因的敲除可降低细胞中猪瘟病毒的增殖量。

关键词：猪血管内皮细胞 Jiv90基因打靶载体细胞转染猪瘟病毒

X基因突变乙型肝炎病毒表达质粒的构建及细胞转染

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2003年第8期11卷 508-509页

作者：宋玉万谟彬李闻捷李成忠陈坚第二军医大学长海医院感染科上海200433

对HBV X基因进行改造,通过插入合成DNA片段,造成X基因的缺陷,构建真核细胞表达质粒,研究X基因缺陷的HBV在肝癌细胞株的表达复制效果.

关键词： X基因突变乙型肝炎病毒表达质粒构建细胞转染

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

整合素干扰载体的构建及细胞转染试验

动物医学进展 2012年第2期33卷 21-25页

作者：李维维张彦明王刚程敏陈婷西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

应用RNA干扰方法,设计合成了整合素的2个不同干扰位点的shRNA及空白对照载体,转化*** DH5α菌株,扩大培养后提取质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞。RT-PCR方法检测显示,干扰载体在mRNA水平上的干扰效果明显。该干扰载体的构建及转染,为进... 详细信息

应用RNA干扰方法,设计合成了整合素的2个不同干扰位点的shRNA及空白对照载体,转化*** DH5α菌株,扩大培养后提取质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞。RT-PCR方法检测显示,干扰载体在mRNA水平上的干扰效果明显。该干扰载体的构建及转染,为进一步研究整合素对猪细胞增殖特性及猪瘟病毒在细胞中的增殖作用奠定了基础。

关键词：整合素干扰载体细胞转染

双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第二军医大学学报 2003年第9期24卷 979-981页

作者：宋玉万谟彬李闻捷陈坚方超平薛惠斌第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学长海医院中心实验室第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室第二军医大学东方肝胆外科研究所

目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质... 详细信息

目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区 ,再克隆入pcDNA3,构建成 pcDNA3 KN F1F2真核表达质粒 ;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株 ,进行G4 1 8筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBVDNA。结果 :(1 )成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒 pcDNA3 KN F1F2及含双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;(2 )对两质粒成功进行细胞转染后 ,测得第 3、6、1 4天细胞培养上清液中HBVDNA均高表达 ,两质粒之间差别不明显。结论 :构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌 ;

关键词：双拷贝 x基因缺失 HBVDNA 质粒构建细胞转染肝癌

阳离子磷酸胆碱聚合物负载siRNA进行细胞转染的可行性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏医药 2010年第13期36卷 1570-1573页

作者：孙莉莉张卓琦曹希传杨帆李秀华潘修成徐州医学院附属医院感染病科 221004

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物(MPC30DEA70)负载短片断干扰RNA(siRNA)进行细胞转染的可行性以及生物学效应。方法 MTT法分析MPC30DEA70对HepG2.2.15细胞的毒性;设计特异性siRNA,以MPC30DEA70负载红色荧光标记的siRNA转染HepG2.2.15... 详细信息

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物(MPC30DEA70)负载短片断干扰RNA(siRNA)进行细胞转染的可行性以及生物学效应。方法 MTT法分析MPC30DEA70对HepG2.2.15细胞的毒性;设计特异性siRNA,以MPC30DEA70负载红色荧光标记的siRNA转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察该载体携带siRNA能否进入细胞中及在该细胞中的转染效率。在此基础之上,观察对荧光素酶基因表达的抑制效应。结果在MPC30DEA70的浓度为0.5、1、3、5μl时,未发现对HepG2.2.15细胞产生明显的毒性,细胞存活率均在80%以上,并且能够携带siRNA进入细胞内,在48h的转染效率达(52.33±1.97)%,转染后能够有效地抑制荧光素酶质粒在HepG2.2.15细胞内的表达。结论 MPC30DEA70携带的siRNA在HepG2.2.15细胞中有着较高的转染效率,并发挥一定的生物效应,有望成为有效的siRNA载体。

关键词：阳离子磷酸胆碱聚合物短片断干扰RNA 细胞转染

腺病毒重组绿色荧光蛋白对培养神经干细胞转染初探

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

腺病毒重组绿色荧光蛋白对培养神经干细胞转染初探

作者：张诚新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：初步探索大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells，NSCs)作为基因靶细胞，利用携带有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的腺病毒转染NSCs的可行性。方法：分离、培养和鉴定神经干细胞后,用携带有绿色荧光蛋白的腺病... 详细信息

目的：初步探索大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells，NSCs)作为基因靶细胞，利用携带有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的腺病毒转染NSCs的可行性。方法：分离、培养和鉴定神经干细胞后,用携带有绿色荧光蛋白的腺病毒转染神经干细胞,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果：转染16h左右就开始出现稀少的微弱绿色荧光,在48h左右,绝大部分神经干细胞球被转染,呈现荧光强度不一、散在分布的现象。在第7天左右,几乎全部的细胞被转染并呈现较强的绿色荧光球。结论：携带GFP基因的腺病毒可成功转染入神经干细胞。

关键词：神经干细胞绿色荧光蛋白腺病毒细胞转染

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

影响水牛胎儿成纤维细胞转染效率的因素

中国畜牧杂志 2008年第19期44卷 16-19页

作者：崔奎青刘庆友汤刚彬谢体三石德顺广西大学动物科技学院广西南宁530005

实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40～50V/m时,细胞的死亡率处于20%～50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞... 详细信息

实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40～50V/m时,细胞的死亡率处于20%～50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞。将脂质体与DNA的比例控制在8μL:2μg,可获得较高的转染率。相同培养条件下,脂质体法比电穿孔能获得更多的转基因抗性细胞集落,转染DNA的纯度和细胞的状态也明显影响脂质体法的转染效率。

关键词：转基因细胞转染电穿孔法脂质体法