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不同剂量X射线照射对小鼠巨噬细胞表达CD80和CD86的影响

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辐射研究与辐射工艺学报 2001年第2期19卷 153-157页

作者：金顺子何淑杰刘树铮白求恩医科大学卫生部放射生物学重点实验室长春130021

采用免疫组织化学法观察了X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞及体外照射对培养的小鼠巨噬细胞株J774A .1细胞表达CD80和CD86的影响。结果表明 ;全身照射和体外照射时 2GyX射线诱导CD80表达增高均较 0 .0 75Gy为早 ,而CD86对两种剂量的反... 详细信息

采用免疫组织化学法观察了X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞及体外照射对培养的小鼠巨噬细胞株J774A .1细胞表达CD80和CD86的影响。结果表明 ;全身照射和体外照射时 2GyX射线诱导CD80表达增高均较 0 .0 75Gy为早 ,而CD86对两种剂量的反应无明显区别。剂量效应关系的研究表明 ,CD80和CD86的表达无论全身照射或体外照射时均在 0 .0 75Gy剂量点出现峰值 ,而在较大剂量照射时出现第二个峰值的剂量则全身照射高于体外照射。实验结果显示。

关键词：电离辐射小鼠巨噬细胞 J774A.1细胞 CD80 CD86 ABC 低剂量辐射免疫增强效应细胞表达 BT分子

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脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

中南大学学报（医学版） 2005年第2期30卷 140-144页

作者：孙吉平贾延劼罗芳宋建辉杨于嘉中南大学湘雅医院儿科长沙410008

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率... 详细信息

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果:限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX 1基因;克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致;质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳;细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX 1基因表达。结论:成功构建了含有PDX 1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

关键词：外源性基因细胞表达大鼠骨髓基质细胞阳离子脂质体介导真核表达载体限制性酶切分析显微镜下观察细胞免疫组化细胞免疫化学转染效率染色检测 PDX-1 重组载体表达情况目的基因序列测定基因表达种子细胞组织工程

红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白细胞介素-8与谷胱甘肽的影响

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中华医学杂志 2005年第14期85卷 976-980页

作者：何志义邹朝霞于亮钟南山冉丕鑫钟小宁广州医学院第一附属医院呼吸疾病研究所 510120 广西医科大学第一附属医院

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的... 详细信息

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响。将传代后的细胞按24、36、48h3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组。通过酶联免疫吸附实验检测细胞上清中IL8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子κB(NFκB)和激活蛋白1(AP1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)的含量;应用Western印迹检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γGCSHS)蛋白表达。结果红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE上清中IL8的含量;红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以下调H2O2(0.01mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NFkB、AP1的活性;红霉素(5μg/ml)预孵育48h抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γGCS的含量(3.46±0.41)以及γGCSHS蛋白表达、γGCSHS启动子区域AP1转录活性。结论红霉素通过下调NFκB、AP1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL8的释放,进而影响GSH及γGCS的合成调控。

关键词：过氧化氢细胞表达红霉素白细胞介素-8(IL-8) Western印迹转录因子NF-kB 抗氧化剂谷胱甘肽人支气管上皮细胞四甲基偶氮唑蓝转录因子核因子酶联免疫吸附 AP-1 H2O2诱导炎症介质半胱氨酸蛋白表达凝胶迁移率启动子区域

姜黄素对爪蟾卵母细胞表达人低密度脂蛋白受体的影响

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中国中西医结合杂志 2005年第5期25卷 432-435页

作者：范春雷沃兴德罗艳卢德赵钱颖浙江中医学院生命科学系杭州310053 杭州师范学院生物化学教研室

目的在爪蟾卵母细胞中建立人低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinreceptor,LDL- R)表达系统,并研究姜黄素降脂作用的分子机理。方法将含人LDL R的表达质粒p3 7LDL导入细胞核中,用免疫荧光、配体荧光以及免疫胶体金标记透射电镜等方... 详细信息

目的在爪蟾卵母细胞中建立人低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinreceptor,LDL- R)表达系统,并研究姜黄素降脂作用的分子机理。方法将含人LDL R的表达质粒p3 7LDL导入细胞核中,用免疫荧光、配体荧光以及免疫胶体金标记透射电镜等方法检测细胞膜上LDL- R的表达情况;用不同浓度的姜黄素对爪蟾卵母细胞人LDL- R基因的表达进行干预,并用酶联免疫吸附分析法测定LDL- R的表达量。结果人LDL -R基因在爪蟾卵母细胞膜上得到表达;姜黄素具有增强其表达的作用,且有明显的量效关系。结论姜黄素降血脂和抗动脉粥样硬化的作用途径之一可以是通过促进LDL- R基因的表达,增加细胞对低密度脂蛋白胆固醇的吸收,从而降低血清胆固醇。

关键词：低密度脂蛋白受体姜黄素细胞表达爪蟾卵母细胞酶联免疫吸附分析法低密度脂蛋白胆固醇 receptor 抗动脉粥样硬化 LDL 胶体金标记血清胆固醇表达系统分子机理降脂作用表达质粒免疫荧光表达情况透射电镜不同浓度

α_1-抗糜蛋白酶对类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)诱导细胞表达核转录因子的影响

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中华神经科杂志 2005年第2期38卷 82-86页

作者：孙永馨贾建平 Sabina Janciauskiene 首都医科大学宣武医院神经内科北京100053 S-205 02 Malm SwedenWallenbergLabPlan 2University HospitalUMAS

目的研究α_1 抗糜蛋白酶(ACT)与类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在体外形成复合物的性质,以及该复合物对神经母细胞瘤细胞(Kelly)表达核转录因子过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)和核因子κB(NFκB)的影响。方法Aβ_(1-42)与ACT溶液以10... 详细信息

目的研究α_1 抗糜蛋白酶(ACT)与类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在体外形成复合物的性质,以及该复合物对神经母细胞瘤细胞(Kelly)表达核转录因子过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)和核因子κB(NFκB)的影响。方法Aβ_(1-42)与ACT溶液以10∶1mol/L混合,用琼脂糖凝胶电泳检测2h和24h反应产物Aβ_(1-42)/ACT(2h)、Aβ_(1-42)/ACT(24h),电泳迁移率检测法(EMSA)检测Aβ_(1-42)/ACT复合物对Kelly细胞表达PPARγ和NFκB的影响。结果Aβ_(1-42)与ACT分子之间可以结合形成复合物,而且复合物的功能随反应时间的不同而不同与对照组细胞相比,Aβ_(1-42)/ACT(2h)使Kelly细胞对PPARγ和NFκB的表达分别增加158% (P细胞核转录因子,与阿尔茨海默病(AD)的病理改变相关。ACT通过与Aβ_(1-42)结合影响两种细胞因子的表达,可能是AD中神经系统炎性反应平衡失调的病理通路之一,提示对AD的发病有影响。

关键词： α1-抗糜蛋白酶类淀粉样蛋白Aβ1-42 细胞表达核转录因子阿尔茨海默病

抗凋亡基因survivin在急性白血病细胞表达及其临床意义

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中华血液学杂志 2002年第5期23卷 251-253页

作者：林茂芳孟小莉蔡真叶琇锦浙江大学医学院附属第一医院血液科杭州310003

目的　探讨急性白血病 (AL)原代细胞survivin基因表达及其与AL疗效的关系。方法　应用RT PCR方法检测 50例初发AL患者survivin基因mRNA表达。结果　AL细胞survivinmRNA阳性率为 82 .0 % (50例中 41例 )。survivinmRNA阳性表达在急性淋... 详细信息

目的　探讨急性白血病 (AL)原代细胞survivin基因表达及其与AL疗效的关系。方法　应用RT PCR方法检测 50例初发AL患者survivin基因mRNA表达。结果　AL细胞survivinmRNA阳性率为 82 .0 % (50例中 41例 )。survivinmRNA阳性表达在急性淋巴细胞白血病细胞 (89.5 % )较在急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)细胞 (75 .0 % )稍多见 ,但均高于正常对照组 (33 .3 % ) ,P值分别细胞中 ,survivinmRNA表达阴性者接受 1个疗程化疗后骨髓缓解(BMR)率 (83 .3 % )明显高于阳性者 (2 5 .0 % ,P =0 .0 2 3) ;1 3例ANLL患者接受高三尖杉酯碱和阿糖胞苷联合治疗 ,survivinmRNA阴性表达者BMR率 (1 0 0 .0 % )高于阳性表达者 (2 7.3 % ) ;survivin/ β actin >0 .6者BMR率低。结论　survivin基因在AL细胞高表达。

关键词：抗凋亡基因 survivin 急性白血病细胞表达临床意义聚合酶链反应

肿瘤坏死因子和脂多糖影响牙周膜细胞表达骨保护因子的研究

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中华口腔医学杂志 2003年第4期38卷 288-291,I005页

作者：李京平凌均棨中山大学光华口腔医学院牙周科广州510060 中山大学光华口腔医学院牙体牙髓科广州510060

目的　研究脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor α,TNF α)对牙周膜细胞增殖及分泌骨保护因子 (osteoprotegerin ,OPG)的影响。方法　培养牙周膜细胞并形成单细胞克隆 ,培养基中加入LPS和TNF α ,MT... 详细信息

目的　研究脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor α,TNF α)对牙周膜细胞增殖及分泌骨保护因子 (osteoprotegerin ,OPG)的影响。方法　培养牙周膜细胞并形成单细胞克隆 ,培养基中加入LPS和TNF α ,MTT法检测牙周膜细胞增殖水平 ,SandwitchELISA法测定培养上清液中OPG含量。结果　TNF α浓度在 1 0 μg/L以上时可增加细胞对OPG的表达量 (P 细胞增殖 (P 0 0 5) ;LPS对牙周膜细胞增殖和OPG表达均无明显影响 ,与TNF α也没有交互作用 (P >0 0 5)。结论　TNF α能刺激牙周膜细胞OPG表达水平的提高 ;

关键词：肿瘤坏死因子α 脂多糖 LPS 牙周膜细胞表达骨保护因子 TNP-α 细胞培养

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低氧诱导小鼠胎肝间质细胞表达红细胞生成素

中国临床康复 2005年第26期9卷 74-76页

作者：刘革修张洹何冬梅暨南大学医学院血液病研究所广东省广州市510632

目的:观察低氧培养条件下小鼠胎肝间质细胞中红细胞生成素的表达。方法:实验于2004-10/2005-01在暨南大学医学院血液病研究所完成。取孕14.5d小鼠胚胎肝细胞进行贴壁培养及传代,生长至次融合状态的第5代细胞在体积分数为0.95的N2和体积... 详细信息

目的:观察低氧培养条件下小鼠胎肝间质细胞中红细胞生成素的表达。方法:实验于2004-10/2005-01在暨南大学医学院血液病研究所完成。取孕14.5d小鼠胚胎肝细胞进行贴壁培养及传代,生长至次融合状态的第5代细胞在体积分数为0.95的N2和体积分数为0.05的CO2混合气条件下培养,分为培养0(对照组),2,4,8,16,32h组,在相应时间下应用半定量反转录-聚合酶链反应和Westernblot技术检测其红细胞生成素基因表达。结果:①在常氧压下培养的胎肝间质细胞中,红细胞生成素mRNA及其蛋白水平均较低。②低氧培养则可显著提高胎肝间质细胞红细胞生成素基因的mRNA及其蛋白水平。红细胞生成素mRNA在低氧培养4h时即显著增高,8h时达到高峰水平,聚合酶链反应产物红细胞生成素与β-actin信号比从对照组(4.92±2.31)%增加到(26.69±7.94)%,差异有显著性意义(P细胞生成素蛋白在低氧培养4h时显著增高,16h时达到高峰水平,Western检测红细胞生成素与β-actin信号从对照组(3.57±2.34)%增加到(19.81±6.56)%,差异有显著性意义(P细胞表达红细胞生成素,提示低氧预处理小鼠胎肝间质细胞在组织缺血损伤中的潜在治疗作用,如治疗脑缺血和心肌缺血等疾病。

关键词：细胞低氧小鼠肝/细胞学间质细胞红细胞生成素胚胎肝细胞细胞表达半定量反转录-聚合酶链反应 Western 氧诱导

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t-PA昆虫细胞表达及特性分析

实验生物学报 2000年第4期33卷 293-300页

作者：刘军波杨凯薛爱群庞义李宝健复旦大学遗传所中山大学生物防治国家重点实验室/昆虫研究所广州510275 中山大学生物工程研究中心广州510275

应用RT-PCR技术,从人黑色素瘤Bowes细胞株中扩增出人组织型纤溶酶原激活剂(tis-sue-type plasminogen activator,t-PA)cD-NA。序列分析证实,与国外的报道完全一致。将含完整阅读框架的人t-PA cDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中... 详细信息

应用RT-PCR技术,从人黑色素瘤Bowes细胞株中扩增出人组织型纤溶酶原激活剂(tis-sue-type plasminogen activator,t-PA)cD-NA。序列分析证实,与国外的报道完全一致。将含完整阅读框架的人t-PA cDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中,获得重组质粒pBac-tPA。应用脂质体共转染法,将pBac-tPA和线性化杆状病毒BacPAK6 DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞。经空斑筛选获得11株重组病毒。经PCR鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达t-PA的重组病毒BactPA3。在含胎牛血清的培养基中,t-PA表达活性在感染(MOI≈10)后72h左右达到最高,为3.04×10~3IU/ml,即相当于1.8×10~4IU/10~6细胞;在无血清培养基中,t-PA最高表达水平相差不大,但时间为感染后132h左右。经SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析,分子量为68kDa左右。与从人黑色素瘤细胞培养液中提纯的天然t-PA相比,其受纤维蛋白原激活的特性、和纤维蛋白的亲和力及在血浆中的失活速率基本相同。表达的t-PA在血液循环中的半衰期为7min。

关键词：人组织型纤溶酶原激活剂 t-PA 细胞表达