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口蹄疫病毒VP1 T、B细胞表位与大肠杆菌肠毒素融合蛋白的免疫保护性研究

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畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 388-393页

作者：庄娟尤永进陈波饶忠潘洁淮阴师范学院生物系淮阴223300 上海农业科学院畜牧兽医研究所上海201106

作者对O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1双拷贝T细胞表位(aa 21-40)、B细胞表位(aa 141-160)融合蛋白2020-2020VP1及其与肠毒素大肠杆菌肠毒素融合后蛋白2020-B-2020和2020-B-2020-STI进行了免疫分析。动物试验表明,用2020-2020VP1、2020-B-2020和2020-B-2020-STI 3种融合蛋白分别免疫动物,免疫动物血清中均可产生针对FMDV的抗体。免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明3种融合蛋白都能诱导机体产生FMDV特异性细胞及体液免疫反应。2020-B-2020和2020-B-2020-STI融合蛋白免疫雌鼠能够抵抗大肠杆菌强毒株攻击,免疫保护率如下:2020-B-2020 60%/1.5MLD,2020-B-2020-STI 100%/1.5MLD。2020-B-2020-STI免疫血清中具有STI中和抗体,且融合蛋白不具STI毒性。ELISA结果显示,2020-B-2020和2020-B-2020-STI能与霍乱毒素(cholera toxin)CTB抗体特异性结合。结果表明,2020-B-2020-STI具有开发成为口蹄疫及肠毒素大肠杆菌疫苗的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒 VP1 细胞表位肠毒素大肠杆菌 LTB STI 免疫应答

柑橘属果实中过敏原几丁质酶的表达和B细胞抗原表位的预测

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食品工业科技 2017年第12期38卷 135-139页

作者：闫慧清罗庆华黄小龙贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001

I类植物的几丁质酶(chitinase)是许多植物性食品中一种非常重要的过敏原,与乳胶-水果综合症有着密切的关系。大部分致敏性植物中的几丁质酶对人体的健康有着潜在的危害。本文以柑橘属中的过敏原几丁质酶为研究对象,通过比较柑橘属中不... 详细信息

I类植物的几丁质酶(chitinase)是许多植物性食品中一种非常重要的过敏原,与乳胶-水果综合症有着密切的关系。大部分致敏性植物中的几丁质酶对人体的健康有着潜在的危害。本文以柑橘属中的过敏原几丁质酶为研究对象,通过比较柑橘属中不同来源的果实,如琯溪蜜柚、甜橙和温州蜜柑中的几丁质酶基因表达含量,得到温州蜜柑果实的表达量最高。通过Genebank搜索得到几丁质酶的氨基酸序列,采用同源比对说明在不同的物种中可能会导致交叉过敏的现象。最后利用DNAStar软件预测得到几丁质酶的二级结构,当氨基酸的二级结构是β-转角和无规则卷曲,同时抗原指数>0、柔韧性>0、表面可及性>1和亲水性>0的氨基酸区域时,形成B细胞抗原表位的可能性较大。综合这些参数结果表明几丁质酶的B细胞抗原表位结合氨基酸序列的可能区域是在62~69、96~100、126~133、145~149、155~159、169~172、179~182、189~190、256~262,通过预测氨基酸的区域,为制备相应的抗体、培育低过敏品种等后续研究提供一定的理论依据。

关键词：柑橘过敏几丁质酶细胞表位

口蹄疫病毒VP1 T、B细胞表位与大肠杆菌肠毒素融合蛋白的免疫应答

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 964-968页

作者：庄娟淮阴师范学院生物系淮阴江苏223001

本实验比较了O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1双拷贝T细胞表位(aa21～aa40)、B细胞表位(aa141～aa160)与肠毒素大肠杆菌肠毒素融合后蛋白2020-B-2020和2020-B-2020-STI的免疫原性。动物实验表明,2种融合蛋白具有良好的免疫原性,其中2020-B-2020-... 详细信息

本实验比较了O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1双拷贝T细胞表位(aa21～aa40)、B细胞表位(aa141～aa160)与肠毒素大肠杆菌肠毒素融合后蛋白2020-B-2020和2020-B-2020-STI的免疫原性。动物实验表明,2种融合蛋白具有良好的免疫原性,其中2020-B-2020-STI免疫血清抗体水平优于2020-B-2020;免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明2种融合蛋白能诱导机体产生FMDV特异性细胞及体液免疫反应。2020-B-2020和2020-B-2020-STI融合蛋白免疫雌鼠能够抵抗大肠杆菌强毒株攻击,免疫保护率分别为:2020-B-202060%/1.5MLD,2020-B-2020-STI100%/1.5MLD;2020-B-2020-STI免疫血清中具有STI中和抗体,且融合蛋白不具STI毒性。ELISA实验结果显示,2020-B-2020和2020-B-2020-STI能与霍乱毒素CTB抗体特异性结合。实验结果表明,2020-B-2020-STI具有开发成为口蹄疫及肠毒素大肠杆菌疫苗的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒 VPI 细胞表位肠毒素大肠杆菌 LTB,STI 免疫应答

鸡抗菌肽NK-lysin的B细胞表位、剪切位点、疏水性及进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2019年第15期 86-89页

作者：杭柏林宁春妹张炜张慧辉徐彦召胡建和河南科技学院动物科技学院

为了解鸡抗菌肽NK-lysin的B细胞表位、剪切位点、疏水性、同源性及进化等内容,试验选择鸡抗菌肽NK-lysin的氨基酸序列通过网络在线软件IEDBAnalysisResource、PeptideCutter、ProtScale、BLAST、DNAStar进行分析。结果表明:鸡抗菌肽NK-l... 详细信息

为了解鸡抗菌肽NK-lysin的B细胞表位、剪切位点、疏水性、同源性及进化等内容,试验选择鸡抗菌肽NK-lysin的氨基酸序列通过网络在线软件IEDBAnalysisResource、PeptideCutter、ProtScale、BLAST、DNAStar进行分析。结果表明:鸡抗菌肽NK-lysin存在5个B细胞表位,可被20种酶和化学物质剪切,亲水性大于疏水性,与鸡颗粒溶素的同源性为100%,在进化上与珍珠鸡类皂化蛋白C最为接近。说明鸡抗菌肽NK-lysin为亲水性蛋白,具有抗原性,有很多剪切位点,与珍珠鸡类皂化蛋白C有较高的亲缘关系。

关键词：鸡抗菌肽 NK-lysin 细胞表位生物信息学进化分析

O型口蹄疫病毒VP1T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB基因融合表达产物的免疫应答

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安徽农业科学 2007年第33期35卷 10622-10623,10631页

作者：庄娟尤永进陈波饶忠潘洁淮阴师范学院生物系江苏淮安223001 上海农业科学院畜牧兽医研究所上海201106

[目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌... 详细信息

[目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌中表达出具有抗O型口蹄疫病毒与产肠毒素大肠杆菌双重作用的融合蛋白。[结果]运用基因工程技术构建了融合表达载体r2020-B-2020。转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,重组融合蛋白的分子量约为41 kD,表达量较高。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的抗FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白可以诱导机体产生有效的抗FMDV细胞及体液免疫反应。融合蛋白能够与霍乱毒素CTB抗体特异结合,免疫雌鼠能够抵抗一定强度的大肠杆菌毒株攻击。[结论]融合蛋白可以同时诱导机体产生较好的抗FMDV及ETEC免疫应答反应,具有开发成为FMDV与ETEC基因工程疫苗的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒 VP1 细胞表位产肠毒素大肠杆菌 LTB 免疫应答

B细胞表位人源化的猪ZP4在大肠杆菌中的表达与鉴定

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中国免疫学杂志 2005年第11期21卷 826-827页

作者：袁敏敏李大金周雷王明雁朱影孟毅复旦大学妇产科研究所生殖免疫室上海200011

近年来,以卵透明带为靶抗原的疫苗制备已从最初的卵透明带及其组分水平向更高层次发展.Minoru等发现用人工合成的LDPENLTL八肽B细胞表位片段与外源性T细胞表位所得嵌合肽免疫小鼠所得抗血清可有效抑制猪精卵结合试验,但对人精卵结合试... 详细信息

近年来,以卵透明带为靶抗原的疫苗制备已从最初的卵透明带及其组分水平向更高层次发展.Minoru等发现用人工合成的LDPENLTL八肽B细胞表位片段与外源性T细胞表位所得嵌合肽免疫小鼠所得抗血清可有效抑制猪精卵结合试验,但对人精卵结合试验却效果甚差.[第一段]

关键词： B细胞细胞表位人源化猪 ZP4 大肠杆菌基因表达鉴定方法疫苗

中华鲟GH蛋白二级结构和B细胞抗原表位的预测

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安徽农业科学 2009年第10期37卷 4527-4529页

作者：刘红艳杨东张繁荣余来宁江汉大学生命科学学院湖北武汉430056

[目的]对中华鲟GH蛋白的二级结构及B细胞表位进行分析和预测。[方法]以中华鲟GH蛋白的氨基酸序列为基础,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测中华鲟GH蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf... 详细信息

[目的]对中华鲟GH蛋白的二级结构及B细胞表位进行分析和预测。[方法]以中华鲟GH蛋白的氨基酸序列为基础,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测中华鲟GH蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法预测中华鲟GH蛋白的细胞表位。[结果]GH蛋白N端第37～51、88～92、97～104、133～148和187～193区段可能为α螺旋中心,在GH蛋白N端第6～17、24～35、56～57、105～107、109～110、117～119、124～126和204～208区段可能为β折叠中心,在GH蛋白分子N端第18～23、55～56、67～73、83～86、112～114、151～157和209～211区段具有较柔软的结构,这些区段有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。GH蛋白N端第19～23、51～71、84～95、128～139、164～176、189～196区段可能是B细胞的表位,在GH蛋白分子的这些区域内或附近都有柔性区域。因此这几个区段内或附近很可能是B细胞表位的优势区域。[结论]该研究结果对中华鲟GH蛋白单克隆抗体的制备,以及中华鲟分子调控机理的探讨具有一定的参考意义。

关键词：中华鲟 GH蛋白二级结构细胞表位

BALB/C小鼠核小体H2B组蛋白Th细胞表位的鉴定

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中华风湿病学杂志 2004年第1期8卷 4-7页

作者：郝进郝飞林治华钟白玉唐书谦徐云升叶庆佾第三军医大学西南医院皮肤性病科重庆400038 重庆工学院生物工程系

目的鉴定正常BALB/C小鼠核小体H2B组蛋白Th细胞表位.方法根据小鼠H2B确切氨基酸组成序列,利用计算机软件预测可能的Th细胞表位,体外固相合成,然后分别刺激BALB/C小鼠淋巴细胞,根据其中的Th细胞增生程度和白细胞介素(IL)-2分泌水平,判断... 详细信息

目的鉴定正常BALB/C小鼠核小体H2B组蛋白Th细胞表位.方法根据小鼠H2B确切氨基酸组成序列,利用计算机软件预测可能的Th细胞表位,体外固相合成,然后分别刺激BALB/C小鼠淋巴细胞,根据其中的Th细胞增生程度和白细胞介素(IL)-2分泌水平,判断实验肽是否为具有免疫活性的表位.结果共预测获得4条可能的核小体H2B组蛋白Th细胞表位,即H2B2～15、H2B14-28、H2B61～76和H2B99～113.其中H2B14-28能够明显刺激BALB/C小鼠Th淋巴细胞增生和分泌IL-2,且有明显剂量依赖关系.结论H2B14-28可能为BALB/c小鼠核小体H2B组蛋白Th细胞免疫优势表位之一.

关键词： BALB/C小鼠核小体 H2B组蛋白 Th细胞细胞表位鉴定系统性红斑狼疮

鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立及S1蛋白T细胞表位的筛选

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鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立及S1蛋白T细胞表位的...

作者：范瑾山西农业大学

学位级别：硕士

由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡传染性支气管炎(IB)是一种急性、高度接触性传染病,可引起各日龄鸡感染,是影响养禽业发展的主要疫病之一。IBV属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属,该病毒血清型众多,其基因组RNA特有的先导引物转... 详细信息

由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡传染性支气管炎(IB)是一种急性、高度接触性传染病,可引起各日龄鸡感染,是影响养禽业发展的主要疫病之一。IBV属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属,该病毒血清型众多,其基因组RNA特有的先导引物转录机制使病毒呈高度变异性,给病毒的检测及疫病的防控带来极大的困难。为了探索IBV多表型通用检测方法和表位疫苗的研制,我们开展了如下研究：一、建立一种快速、灵敏、特异的检测鸡传染性支气管炎病毒的逆转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP).针对IBV毒株保守性N蛋白在线设计4对LAMP特异性引物,提取IBV RNA作为模板,在Bst DNA聚合酶作用下恒温反应,对IBV、新城疫病毒、禽流感病毒和鸡毒支原体进行特异性分析,并与普通RT-PCR进行灵敏度比较。结果表明RT-LAMP法在30min就能够检测出IBV毒株(M41株、H52株、H120株、AustraliaT株、4/91株、QX株),特异性良好且灵敏度是普通RT-PCR的107倍,阳性反应结果呈绿色,可眼观判断。是一种快速、灵敏、特异的检测IBV的方法。二、构建IBV M、S1核酸疫苗以及原核表达M、Sl蛋白并评价其免疫效果。真核表达质粒pVAX-M和pVAX-S1转染Hela细胞,Western-bolt和IFA检测结果表明,pVAX-M和pVAX-S1都可以在体外正常表达。分别使用pVAX-M、pVAX-S1以及pET-28a-M、pET-28a-S1免疫2周龄SPF鸡。利用ELISA方法检测体液免疫应答水平,四周后攻毒,排毒情况和病理切片结果表明,p VAX-S1免疫组抗体水平显著高于其他组(P细胞表位筛选。三、筛选IBV S1蛋白功能性T细胞表位。以IBV S1蛋白氨基酸序列为模板,利用生物信息学方法预测并合成了21条肽,分别以其为刺激物,采用ELIspot法测定不同亚型S1蛋白核酸疫苗免疫SPF鸡诱导脾淋巴细胞分泌IFN-γ的能力,通过3次独立的ELIspot实验,经生物统计分析获得优势表位肽。其中有9号、10号、16号、17号4条短肽可以单独刺激IBV三种不同亚型S1核酸疫苗免疫的鸡淋巴细胞产生IFN-γ(p细胞抗原表位。为后续研制IBV通用表位疫苗奠定基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒逆转录-环介导等温扩增核酸疫苗细胞表位