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冷适应对德氏乳杆菌保加利亚亚种FL6冻干存活率及其细胞膜脂肪酸的影响

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食品科技 2015年第5期40卷 20-25页

作者：张筠孟祥晨石丹东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030 黑龙江东方学院食品学院哈尔滨150066

保加利亚乳杆菌作为发酵剂在食品工业方面被广泛应用,但是在其生产和使用过程中,会面临各种环境胁迫的影响,菌体细胞为了应对这些不利条件,形成了自己的适应机制,表现出了适应性。对德氏乳杆菌保加利亚亚种FL6(Lactobacillus delbruecck... 详细信息

保加利亚乳杆菌作为发酵剂在食品工业方面被广泛应用,但是在其生产和使用过程中,会面临各种环境胁迫的影响,菌体细胞为了应对这些不利条件,形成了自己的适应机制,表现出了适应性。对德氏乳杆菌保加利亚亚种FL6(Lactobacillus delbruecckll *** FL6)进行不同条件的冷适应,研究其在不同冷适应温度及冷适应时间下菌体冻干存活率及细胞膜脂肪酸的变化。结果表明:德氏乳杆菌保加利亚亚种FL6经过冷适应后,与对照组相比,冻干存活率有所增加,其中4℃、8 h冷适应后,菌体冻干存活率增加显著(p细胞膜中不饱和脂肪酸含量较对照组有显著增加,U/S比值最高,菌种对冻干的抵抗力增强。

关键词：保加利亚乳杆菌冷适应冻干存活率细胞膜脂肪酸

酒花对短乳杆菌49（Lactobacillus brevis 49）细胞膜脂肪酸及蛋白糖基化的影响

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酒花对短乳杆菌49（Lactobacillus brevis 49）细胞膜脂肪酸及蛋...

作者：任文静大连工业大学

学位级别：硕士

短乳杆菌是啤酒腐败菌中最常见的腐败菌之一,其腐败能力与它的酒花抗性密不可分。目前酒花抗性机制的研究从物质代谢、基因转录层面进行分析已经取得进展,但一些酒花抗性问题未能得到解决。本文以实验室从腐败啤酒中分离得到的酒花抗性... 详细信息

短乳杆菌是啤酒腐败菌中最常见的腐败菌之一,其腐败能力与它的酒花抗性密不可分。目前酒花抗性机制的研究从物质代谢、基因转录层面进行分析已经取得进展,但一些酒花抗性问题未能得到解决。本文以实验室从腐败啤酒中分离得到的酒花抗性菌株短乳杆菌49（Lactobacillus brevis 49）为研究对象,致力于研究酒花中异α酸对Lactobacillus brevis 49细胞膜脂肪酸组成及蛋白质糖基化的影响,以期为啤酒污染菌的抗酒花胁迫机制以及对啤酒腐败菌的控制提供理论依据。首先本文研究了不同酒花浓度对短乳杆菌49胞外p H、胞内ATP以及细胞膜脂肪酸的影响。酒花中异?酸对Lactobacillus brevis 49有显著的抑制作用,60ppm为Lactobacillus brevis 49最小抑制浓度（MIC）;酒花会使Lactobacillus brevis 49胞外p H值呈下降趋势,且越高浓度的酒花会导致胞外p H越高;酒花胁迫下的Lactobacillus brevis 49比无酒花胁迫胞内ATP低一个数量级。随着酒花浓度的升高,Lactobacillus brevis 49细胞膜脂肪酸碳链长度增加尤其是C20增长较为明显,平均链长也随酒花浓度的提高而提高;环状脂肪酸C19相较于对照组有显著的增加;在高酒花浓度下细胞膜脂肪酸不饱和脂肪酸以及支链脂肪酸所占比例随之增加,饱和直链脂肪酸减少;同时U/S值也随酒花浓度的升高而升高。其次本文从蛋白质组学水平上进一步探索酒花中异α酸对短乳杆菌49的影响。为了后续能够可靠的鉴定短乳杆菌49糖基化位点,便于分析酒花对其的影响,我们采用transferrin和casein分别作为N-糖基化标准蛋白和O-糖基化标准蛋白,进行了糖基化方法的研究。酶解优化得到transferrin的最适蛋白酶为胰蛋白酶,覆盖率为89%;casein的最适蛋白酶为蛋白酶E,覆盖率为98%。我们采用酰肼化学法和亲水色谱法对transferrin进行N-糖基化位点鉴定,两方法都可有效得到N-糖基化位点。此外本工作成功发展了一种适合于复杂糖基化蛋白质O-糖基化位点鉴定的方法,成功的鉴定到κ-casein 21个O-糖基化位点,其中13种还未报道,并得到了其糖链结构信息。为了更完整全面的得到Lactobacillus brevis 49糖基化蛋白的信息,我们比较得出亲水材料比酰肼材料能获得更多的短乳杆菌49胞内外糖基化位点,同时利用酰肼材料法成功鉴定到Lactobacillus brevis 49表面糖基化位点。酒花中异?酸会造成Lactobacillus brevis 49胞外以及细胞表面的糖基化蛋白、肽段及位点明显下降,对胞内糖基化修饰无较强影响。利用LFQ策略得到Lactobacillus brevis 49胞内总共147个显著差异蛋白和特异性蛋白,其中包括80个显著上调蛋白、38个显著下调蛋白以及29个特异性表达蛋白;胞外共得到27个显著性差异蛋白和特异性蛋白,其中包括7个显著上调蛋白、18个显著下调蛋白以及2个特异性表达蛋白。

关键词：啤酒腐败菌酒花抗性异α-酸细胞膜脂肪酸非标记定量糖基化蛋白质液相色谱-质谱联用

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临床血细胞膜脂肪酸谱检测方法研究

临床血细胞膜脂肪酸谱检测方法研究

作者：刘泽群北京化工大学

学位级别：硕士

测定生物体内脂肪酸含量一直是临床研究以及脂质组学研究的重点。脂肪酸在人体内存在游离态与非游离态两种形式,而且碳链长度由八个碳到二十六个碳,这其中又存在大量的顺反异构体,这都给全面检测脂肪酸含量增加了难度。血清中脂肪酸含... 详细信息

测定生物体内脂肪酸含量一直是临床研究以及脂质组学研究的重点。脂肪酸在人体内存在游离态与非游离态两种形式,而且碳链长度由八个碳到二十六个碳,这其中又存在大量的顺反异构体,这都给全面检测脂肪酸含量增加了难度。血清中脂肪酸含量被认为可以反映短期内脂肪酸代谢状况,而研究者也报道了红细胞膜上的脂肪酸含量更能反映人体内长期脂肪酸代谢状况。但白细胞膜上的脂肪酸与血小板膜上的脂肪酸含量以及代谢状况分析却未见报道。本论文从血细胞分离出发,建立了一整套检测细胞膜脂肪酸含量的方法,并对44位健康志愿者的血样进行了血细胞膜脂肪酸含量分析。具体结论如下：1、在Ficoll梯度密度离心分离法的基础上,建立了血细胞分离方法。血细胞分离效果好,通过加入羟乙基淀粉,HEPES等试剂,优化了分离步骤,解决了分离出的白细胞与血小板中红细胞污染的问题。2、比较了TG-WAX色谱柱与SP-2560色谱柱两种极性色谱柱对复杂脂肪酸甲酯组分分离能力,结果显示,利用TG-WAX色谱柱分离脂肪酸甲酯时,几种顺反异构体不能有效分离。但TG-WAX色谱柱的柱长短,当分析组分不复杂时,利用其进行检测工作可以缩短分析时间。SP-2560色谱柱对复杂脂肪酸甲酯组分的分离效果较好,满足本论文分离要求。本论文应用SP-2560色谱柱进行了一系列检测方法学验证工作,保证检测方法的准确性。同时对衍生方法也进行了准确性,温度性考察。3、对来自北京,长沙两地的健康志愿者进行脂肪酸检测分析,总结了健康27种人红细胞膜,白细胞膜,血小板膜脂肪酸含量范围。并且对比了两地健康志愿者脂肪酸含量差异,结果显示,两地志愿者的脂肪酸含量存在明显差异,说明不同地域的人在生活以及饮食习惯上存在的差异会对细胞膜脂肪酸含量带来影响。

关键词：脂肪酸脂质组学检测方法学血细胞分离细胞膜脂肪酸

阿卡波糖对高血压合并糖耐量异常患者细胞膜脂肪酸的影响

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实用心脑肺血管病杂志 2014年第11期 101-102页

作者：龙璜九江学院附属医院

目的探讨阿卡波糖对高血压合并糖耐量异常患者细胞膜脂肪酸的影响。方法收集2011年1月—2012年2月我院门诊收治的高血压患者63例,根据2点法口服葡萄糖耐量试验(OGTT试验)将患者分为单纯高血压患者33例(对照组)和高血压合并糖耐量异常患... 详细信息

目的探讨阿卡波糖对高血压合并糖耐量异常患者细胞膜脂肪酸的影响。方法收集2011年1月—2012年2月我院门诊收治的高血压患者63例,根据2点法口服葡萄糖耐量试验(OGTT试验)将患者分为单纯高血压患者33例(对照组)和高血压合并糖耐量异常患者30例(治疗组)。治疗组患者给予阿卡波糖进行治疗。检测治疗前两组患者血脂、血糖及细胞膜脂肪酸成分,血脂指标包括:TC、TG、HDL及LDL,血糖指标包括:空腹血糖(FPG)和餐后2 h血糖(2 h PG),细胞膜脂肪酸成分包括:豆蔻酸甲酯(C14∶0)、棕榈酸甲酯(C16∶0)、硬脂酸甲酯(C18∶0)、油酸甲酯(C18∶1)、亚油酸甲酯(C18∶2)、花生四烯酸甲酯(C20∶4)及总脂肪酸。治疗4周后再次检测治疗组患者细胞膜脂肪酸成分。结果治疗前两组患者TC、TG、HDL、LDL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗组患者FPG和2 h PG高于对照组(P脂肪酸水平低于对照组(P脂肪酸水平均高于治疗前,C18∶0和C20∶4水平低于治疗前(P细胞膜脂肪酸成分异于单纯高血压患者,阿卡波糖可有效改善其细胞膜脂肪酸的异常情况。

关键词：阿卡波糖高血压糖耐量异常细胞膜脂肪酸

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盐预适应对鲁氏酵母菌高盐胁迫抗性的影响

食品科学技术学报 2021年第3期39卷 73-79,128页

作者：王定康张良邹江鹏车经纬李丹金垚周荣清吴重德四川大学轻工科学与工程学院四川成都610065 泸州老窖集团有限责任公司四川泸州646000

为进一步提高鲁氏酵母菌的高盐胁迫抗性,采用预适应处理的方法,研究了盐预适应对鲁氏酵母菌(Zygosaccharomyces rouxii CGMCC 3791)高盐胁迫抗性的影响。研究结果表明,经过质量浓度为60、120、180 g/L的NaCl预适应前处理90 min后,鲁氏... 详细信息

为进一步提高鲁氏酵母菌的高盐胁迫抗性,采用预适应处理的方法,研究了盐预适应对鲁氏酵母菌(Zygosaccharomyces rouxii CGMCC 3791)高盐胁迫抗性的影响。研究结果表明,经过质量浓度为60、120、180 g/L的NaCl预适应前处理90 min后,鲁氏酵母菌在质量浓度为350 g/L的饱和NaCl胁迫条件下的存活率分别提高到处理前的2.05、2.53、1.92倍。进一步分析了120 g/L NaCl预适应前处理90 min对细胞生理特性的影响,结果表明:经过盐预适应前处理后,细胞在盐胁迫条件下的胞内pH值和Na+/K+-ATPase活力显著高于未经盐预适应处理而直接进行盐胁迫的细胞;并且细胞膜饱和脂肪酸(棕榈酸C16:0,硬脂酸C18:0)的相对含量分别减少至处理前的93%和60%,不饱和脂肪酸(棕榈油酸C16:1,油酸C18:1和亚油酸C18:2)的相对含量分别增加到处理前的2.55、1.78、1.39倍,细胞不饱和度增加到处理前的2.28倍;胞内游离丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸的含量显著提高。研究结果旨在进一步理解鲁氏酵母菌抵御高盐胁迫的耐受机制,为鲁氏酵母菌抗逆性能的提高和工业应用提供一定的理论参考。

关键词：盐预适应高盐胁迫鲁氏酵母菌细胞生理特性细胞膜脂肪酸

初始pH值对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻干燥性能的影响

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中国食品学报 2020年第12期20卷 81-89页

作者：陈境张晓宁麻丽丽鄂晶晶王俊国内蒙古农业大学食品科学与工程学院乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018

为探究不同初始培养pH值对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻干燥活性的影响,以前期优化的培养基为基础,利用单因素试验筛选初始pH值不同,生长量较高,而冻干存活率存在显著差异的组别,对其进行细胞膜脂肪酸组成及关键细胞酶活性的测定。结果显示,... 详细信息

为探究不同初始培养pH值对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻干燥活性的影响,以前期优化的培养基为基础,利用单因素试验筛选初始pH值不同,生长量较高,而冻干存活率存在显著差异的组别,对其进行细胞膜脂肪酸组成及关键细胞酶活性的测定。结果显示,在初始pH 6.8和7.4的培养条件下,发酵活菌数较高且无显著性差异,分别为9.79,9.70 lg(CFU/mL);而其冻干存活率差异显著(P细胞膜不饱和脂肪酸的含量和保持较好的酶活性等方式,维持细胞膜的完整性,减少菌株的冻干损伤,进而提升菌株的抗冷冻干燥性能。本研究结果为提高乳酸菌抗冷冻干燥性及促进我国益生菌发酵剂的工业化生产提供了一定的理论参考。

关键词：植物乳杆菌LIP-1 初始pH值细胞膜脂肪酸酶活抗冷冻干燥活性

乙酸胁迫下巴氏醋酸杆菌发酵过程中微环境水平的应答分析

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食品与发酵工业 2019年第11期45卷 14-20页

作者：史伟高玲夏小乐工业生物技术教育部重点实验室(江南大学) 江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

以 Acetobacter pasteurianus CICIM B7003及其高产突变株 A. pasteurianus CICIM B7003-02为研究对象,通过2株巴氏醋酸杆菌发酵过程中胞内微环境分析来揭示其耐酸机制。在7.5 L发酵罐中比较分批和半连续发酵过程中其发酵动力学以及和... 详细信息

以 Acetobacter pasteurianus CICIM B7003及其高产突变株 A. pasteurianus CICIM B7003-02为研究对象,通过2株巴氏醋酸杆菌发酵过程中胞内微环境分析来揭示其耐酸机制。在7.5 L发酵罐中比较分批和半连续发酵过程中其发酵动力学以及和胞内微环境变化。结果显示,分批发酵中其平均产酸速率达0.836 g/(L·h),相对亲本菌株提高29.6%。半连续发酵中酸启动时间缩短了31 h,微环境分析表明,突变株中与产酸直接相关的乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)和乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)的最高酶活分别提高27.0%和15.2%,辅酶Q 9含量提高69.5%。突变株拥有更高比例的十八碳烯酸,比亲本株高71.4%。突变株最高胞内ATP含量是亲本株2.33倍,胞内ATP与比生长速率呈正相关,胞内谷氨酸和天冬氨酸含量分别比亲本株提高10.7%和18.3%。突变株主要依靠加强乙醇呼吸链,增强ATP合成和关键氨基酸代谢等机制的协同作用提高酸胁迫抗性。

关键词：醋酸菌分批发酵半连续发酵细胞膜脂肪酸胞内微环境耐酸性

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酒酒球菌酸胁迫应答机制研究进展

食品与发酵工业 2022年第22期48卷 299-304页

作者：刘龙祥张克颖赵红玉宋炜钰滨州学院生物与环境工程学院山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心山东滨州256600 西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100

苹果酸乳酸发酵是酿造优质葡萄酒的重要过程,酒酒球菌是这一过程的主要承担者。葡萄酒中是一个高酒精度、低pH、低温、营养缺乏的多因素胁迫环境,苹果酸乳酸发酵的启动常常会延迟甚至失败,其中低pH胁迫因素最为重要。目前酒酒球菌胁迫... 详细信息

苹果酸乳酸发酵是酿造优质葡萄酒的重要过程,酒酒球菌是这一过程的主要承担者。葡萄酒中是一个高酒精度、低pH、低温、营养缺乏的多因素胁迫环境,苹果酸乳酸发酵的启动常常会延迟甚至失败,其中低pH胁迫因素最为重要。目前酒酒球菌胁迫应答机制研究逐渐受到重视,研究者提出了多种相关机制,例如膜成分和流动性、pH内外平衡、氧化应激反应、DNA和蛋白质损伤修复机制,但酸胁迫应答机制的研究还缺乏系统性。该文对酒酒球菌进行简介,就酒酒球菌酸胁迫应答机制进行综述,以期为日后有关研究提供参考。

关键词：酒酒球菌苹果酸乳酸发酵酸胁迫细胞膜脂肪酸细胞膜流动性

钙离子对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻干燥性能的影响

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食品工业科技 2021年第17期42卷 100-106页

作者：孙瑞胤王瑞雪鄂晶晶姚彩青何宗柏张巧玲陈子超马蓉泽包秋华王俊国内蒙古农业大学食品科学与工程学院乳品生物技术与工程教育部重点实验室农业农村部奶制品加工重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本文以植物乳杆菌LIP-1为研究对象,探讨在培养基中添加不同浓度的钙离子对菌株生长量及抗冷冻干燥性能的影响,在此基础上,研究了不同浓度钙离子对菌体形态、细胞壁及细胞膜结构完整性以及细胞膜脂肪酸构成的影响,以探讨钙离子影响菌株... 详细信息

本文以植物乳杆菌LIP-1为研究对象,探讨在培养基中添加不同浓度的钙离子对菌株生长量及抗冷冻干燥性能的影响,在此基础上,研究了不同浓度钙离子对菌体形态、细胞壁及细胞膜结构完整性以及细胞膜脂肪酸构成的影响,以探讨钙离子影响菌株抗冷冻干燥性能的机制。结果表明:当在MRS培养基中添加0.5 mmol/L的钙离子时,与未添加钙离子的对照组相比,菌株的生长量提升了0.717×10^(9) CFU/mL,存活率提升了21.52%(P细胞壁与细胞膜的损伤程度降低;细胞膜中不饱和脂肪酸的含量升高,U/S变大;添加钙离子还可以使菌株的常温贮藏稳定性得到提高,第8周时添加钙离子的实验组相较对照组(MRS)活菌数提升了13.65倍。该结果为培养基中添加适量的钙离子促进菌体生长以及提高菌株的抗冷冻干燥性与贮藏稳定性提供了理论参考。

关键词：植物乳杆菌LIP-1 真空冷冻干燥钙离子存活率细胞形态细胞膜脂肪酸关键酶活