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食管癌Eca109细胞的HPV16-E6基因转染条件优化

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山东医药 2016年第47期56卷 13-16页

作者：康馨丹陈卫刚阮开学张宁郑勇石河子大学医学院第一附属医院新疆石河子832000

目的确定HPV16-E6基因转染食管癌Eca109细胞的最佳转染条件。方法取体外培养的食管癌Eca109细胞,用中心复合试验设计分组,转染条件控制因素包括DNA用量、Lip2000/DNA和饥饿时间,DNA用量分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μg共5档,Lip2000/... 详细信息

目的确定HPV16-E6基因转染食管癌Eca109细胞的最佳转染条件。方法取体外培养的食管癌Eca109细胞,用中心复合试验设计分组,转染条件控制因素包括DNA用量、Lip2000/DNA和饥饿时间,DNA用量分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μg共5档,Lip2000/DNA分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μL/μg共5档,饥饿时间分0、3、7.5、12、15 h共5档,共设20个组。转染24 h后,倒置显微镜下观察各组荧光情况并拍照,用图像处理软件计算细胞转染效率;用CCK-8法测算各组细胞相对存活率。用响应曲面法绘制有交互影响的因素对细胞转染效率和相对存活率影响的响应曲面,以目的基因细胞数(转染效率×细胞存活率)最大化为原则,确定最佳转染条件。在最佳转染条件下用HPV16-E6基因转染食管癌Eca109细胞,检测细胞转染效率和相对存活率。结果随着饥饿时间延长,细胞转染效率和细胞相对存活率呈下降趋势。依据饥饿0 h的转染效率、细胞存活率响应曲面图,得出最佳转染条件为(24孔培养板):DNA用量1.35μg、Lip2000/DNA1.12μL/μg(换算成Lip2000用量为1.51μL)、细胞饥饿时间0 h;转染效率预测值可达38.68%,细胞相对存活率预测值为85.09%。在最佳转染条件下用相同方法转染,实际转染效率为39.79%,与预测值的相对误差为2.87%。结论 HPV16-E6基因转染Eca109细胞的最佳转染条件(24孔板)为:每孔DNA用量1.35μg,脂质体Lip2000用量1.51μL,不对细胞进行饥饿处理。

关键词：食管癌人乳头瘤病毒16 基因转染效率细胞相对存活率实验设计

超低温保存秦巴山区三种濒危植物组织细胞技术研究

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超低温保存秦巴山区三种濒危植物组织细胞技术研究

作者：程利红西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以秦巴山区三种濒危植物秦岭冷杉（Abies chensiensis）、连香树（Cercidiphyllum japonicum）、中国红豆杉（Taxus chinensis）的种子胚、定芽或种子为试验材料，采用单因素试验和正交试验研究了冷冻保护剂类型、冷冻保护剂处理... 详细信息

本研究以秦巴山区三种濒危植物秦岭冷杉（Abies chensiensis）、连香树（Cercidiphyllum japonicum）、中国红豆杉（Taxus chinensis）的种子胚、定芽或种子为试验材料，采用单因素试验和正交试验研究了冷冻保护剂类型、冷冻保护剂处理方式、冷冻方式、保存温度和解冻方式以及保存时间等因素对三种试验材料超低温保存后细胞活力的影响，进而确立了三种濒危植物种质资源的最佳超低温保存技术条件;采用氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法和细胞微结构分析法对保存效果进行了评价，分析了超低温保存对细胞超微结构的影响及其与细胞活力的关系，初步揭示了超低温冷冻保存对植物组织细胞活力的影响机理。研究结果表明：（1）秦岭冷杉种子胚最佳超低温保存条件是：秦岭冷杉种子胚消毒后用PVS（435%甘油+20%乙二醇+0.6mol/L蔗糖的脱氨MS液体培养基）玻璃化保护剂经250W超声冰浴处理30min，在﹣20℃条件下预冻2h，投入液氮中保存7d，37℃恒温水浴解冻30min，秦岭冷杉种子胚冻存后细胞存活率最高，达到91.73%。（2）连香树定芽细胞最优超低温保存条件是：连香树定芽消毒后，用含35%甘油、20%单乙烯乙二醇、15.0%二甲基亚砜（DMSO）和1%甘氨酸的3%蔗糖脱氨MS液体培养基作为冷冻保护剂装载于冷冻管中，于400mmHg真空常温下处理30min，再经﹣20℃预冻6h，投入液氮保存60d后，40℃恒温水浴解冻30min，连香树定芽细胞相对存活率最高达95%以上。（3）中国红豆杉种子最优超低温保存条件是：经机械去壳的中国红豆杉种子加入8%DMSO，0℃超声（250W）浸泡处理10min，于﹣20℃预冻1h后投入液氮中冷冻保存72h，37℃恒温水浴中快速解冻1h，红豆杉种子的超低温保存活力最高，TTC还原量可达为2.4697±0.0221mg/g;而PVS4更有利于红豆杉种子的超低温长期保存。（4）影响超低温保存后细胞活力的主要因素：冷冻保护剂类型、冷冻方式和保存温度，都直接影响着细胞内冰晶的形成状态，从而引起对细胞超微结构的损伤。在不同的超低温冷冻保存条件下，细胞的活力和细胞超微结构的损伤程度不同，细胞超微结构损伤程度越大，细胞活力越弱，影响细胞活力主要由冷冻过程内细胞中形成的冰晶体数目、体积和形状。

关键词：濒危植物超低温保存植物组织细胞细胞超微结构细胞相对存活率

化合物HIA-1生物活性及其对苘麻部分生化指标的影响

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植物保护学报 2009年第2期36卷 179-182页

作者：段敏王金信贺红武彭学岗彭浩山东农业大学植物保护学院泰安271018 华中师范大学化学学院农药化学研究所武汉430079

采用培养皿生物测定方法研究化合物O,O-二甲基-1-(2,4-二氯苯氧基乙酰氧基)呋喃甲基膦酸酯(试验代号HIA-1)的生物活性及其对苘麻部分生化指标的影响。结果表明,化合物HIA-1在0.05～10 mg/L处理剂量下,对高粱、稗草、黄瓜、萝卜、苘麻和... 详细信息

采用培养皿生物测定方法研究化合物O,O-二甲基-1-(2,4-二氯苯氧基乙酰氧基)呋喃甲基膦酸酯(试验代号HIA-1)的生物活性及其对苘麻部分生化指标的影响。结果表明,化合物HIA-1在0.05～10 mg/L处理剂量下,对高粱、稗草、黄瓜、萝卜、苘麻和油菜的根、芽生长有不同程度的抑制作用,其中黄瓜、萝卜、苘麻和油菜较为敏感,10 mg/L处理后,根长、芽长抑制率分别在86.2%和88.2%以上;0.01 mg/L处理后对根、芽生长有明显的促进作用。0.1 mg/L处理后,苘麻幼根细胞存活率超过100%,表现出激活作用;随着浓度升高,细胞存活率逐渐降低。1 000 mg/LHIA-1处理时,苘麻幼苗及幼根SOD活性分别约为对照的50%和30%;当浓度分别为0.1和1 mg/L时,幼苗和幼根SOD活性高于对照。10～1 000 mg/L处理时幼苗和幼根POD活性低于对照,1000 mg/L时约为对照的58%和40%;低浓度时POD活性高于对照,1 mg/L时幼苗和幼根POD活性均约为对照的130%。

关键词： HIA-1 生物活性细胞相对存活率过氧化物酶超氧化物歧化酶

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膦酸酯单钠盐对丙酮酸脱氢酶活性的影响

化学与生物工程 2005年第6期22卷 4-5,20页

作者：谭宏亮袁均林贺红武王涛教育部农药与化学生物学重点实验室华中师范大学生命科学学院华中师范大学农药化学研究所湖北武汉430079

以不同浓度(10-3～10-7g·mL-1)的O-甲基α-(2,4-二氯苯氧基乙酰氧基)甲基膦酸酯单钠盐(以下简称WT)分别在体外处理水稻幼芽和从水稻线粒体中提取的丙酮酸脱氢酶复合体,结果显示随着WT浓度的逐渐降低,其细胞相对存活率逐渐升高;随着WT... 详细信息

以不同浓度(10-3～10-7g·mL-1)的O-甲基α-(2,4-二氯苯氧基乙酰氧基)甲基膦酸酯单钠盐(以下简称WT)分别在体外处理水稻幼芽和从水稻线粒体中提取的丙酮酸脱氢酶复合体,结果显示随着WT浓度的逐渐降低,其细胞相对存活率逐渐升高;随着WT浓度的逐渐增高,对丙酮酸脱氢酶的抑制活性也逐渐增强.WT对丙酮酸脱氢酶的抑制活性的I50为29.14 μmol·L-1.由此说明化合物WT是丙酮酸脱氢酶的强抑制剂.

关键词：膦酸酯丙酮酸脱氢酶复合体抑制作用细胞相对存活率