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生命的化学 2007年第4期27卷 331-333页

作者：贾月梅河北经贸大学生物科学与工程学院石家庄050061

细胞渗透肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其跨膜能力不依赖经典的胞吞作用,被认为是一种理想的运载工具,在将蛋白质和其他分子导入活细胞的研究中有着广泛的应用前景。该文着重介绍细胞渗透肽的跨膜转运机制及其应用等。

关键词：细胞渗透肽蛋白转导域跨膜转运

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细胞渗透肽在动物医学领域的应用

动物医学进展 2010年第12期31卷 144-148页

作者：王娜张厚双中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241 延边大学农学院吉林龙井133400

随着疫苗及药物的发展,新型传递系统的研究和应用日益受到关注。细胞渗透蛋白或肽(CPPs)作为一种传递系统,具有穿过哺乳动物细胞膜的能力,且不受能量和受体的约束。细胞渗透肽已经成功地携带多肽、荧光标记蛋白、螯合剂、DNA、反义核酸... 详细信息

随着疫苗及药物的发展,新型传递系统的研究和应用日益受到关注。细胞渗透蛋白或肽(CPPs)作为一种传递系统,具有穿过哺乳动物细胞膜的能力,且不受能量和受体的约束。细胞渗透肽已经成功地携带多肽、荧光标记蛋白、螯合剂、DNA、反义核酸、脂质体等物质,实现体内外的跨膜递送,并可导入几乎所有的组织和细胞内。细胞渗透肽作为转运载体在药物传递、治疗性分子转运和疫苗增效方面都显示了重要价值,已成为国内外相关研究的一个热点。论文对细胞渗透肽的种类和在动物医学方面的应用做了综合性的概述,以此促进细胞渗透肽能在将来的动物医学方面有更广阔的应用前景。

关键词：细胞渗透肽 TAT ANTP VP22 动物医学应用

细胞渗透肽介导神经生长因子对中度创伤性颅脑损伤的治疗作用研究

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细胞渗透肽介导神经生长因子对中度创伤性颅脑损伤的治疗作用研究

作者：尤丽丽安徽医科大学

学位级别：硕士

创伤性颅脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)会导致患者认知和情绪功能障碍,严重危害其身心健康。据统计在所有TBI患者中,轻中度TBI占比高达90%,而且预计受其困扰的患者数量在未来一段时间内也会呈增长趋势。由于TBI发病机理和病程比... 详细信息

创伤性颅脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)会导致患者认知和情绪功能障碍,严重危害其身心健康。据统计在所有TBI患者中,轻中度TBI占比高达90%,而且预计受其困扰的患者数量在未来一段时间内也会呈增长趋势。由于TBI发病机理和病程比较复杂,虽有一些治疗药物包括抗炎剂、自由基清除剂、乙酰胆碱酶抑制剂等被用于缓解TBI导致的一系列损伤以及并发症状,但到目前为止尚无特异、有效治疗TBI的药物。既往研究表明神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)在中枢神经系统(Central nervous system,CNS)中具有保护受损神经元,引导和加速轴突再生,减轻神经炎症、抑制星形胶质细胞活化以及疤痕形成等多重作用,但由于血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的存在限制了NGF蛋白向脑组织渗透以及NGF蛋白空间结构改变容易导致其生物学活性降低等因素极大地制约了NGF的临床应用。目前许多研究致力于通过BBB向脑内递送多肽、蛋白类药物,其中细胞渗透肽(Cell penetrating peptide,CPP)展现出独特的优势,它作为药物递送载体具有合成简单、组织渗透性高以及与其他给药系统兼容等多种优势。CPP一般通过直接偶联或重组融合表达的方式结合药物并将其递送进入细胞以及组织内,然而一些研究表明通过将CPP与药物非共价复合递送也可实现药物的细胞摄取,这种结合方式具有简单易操作,不改变结合药物的生物活性等优势。因此本研究旨在选择能有效地促进NGF蛋白穿过细胞膜的CPP,观察其与NGF药物复合给药后对于中度TBI小鼠的治疗作用。首先,我们通过文献调研筛选CPP并利用多肽固相合成法进行多肽的合成制备。其次,在体外细胞水平进行细胞免疫荧光实验,依据包含的不同CPP分别设立NGF组、NGF/Pep-1组、NGF/Penetratin组,分析不同CPP与NGF复合后的穿膜效果以及最佳混合比例。随后,构建中度TBI小鼠模型,通过尾静脉途径给药治疗后分析各组小鼠的行为学和脑组织损伤情况变化,利用Morris水迷宫实验检测小鼠的空间记忆功能,转棒实验评估小鼠的协调运动能力;通过免疫组化染色观察小鼠脑损伤病灶周围神经细胞以及反应性星形胶质细胞的阳性含量。实验结果显示Penetratin可作为药物载体结合NGF蛋白将其递送进入细胞内,且在Penetratin与NGF的摩尔比20:1时效果最好。在体给药数据显示,对中度TBI模型小鼠进行分组治疗后发现,NGF/Penetratin组小鼠的协调运动功能、空间记忆能力以及脑组织病灶周围Neu N蛋白水平均显著高于TBI组小鼠以及NGF组小鼠,其脑组织内GFAP蛋白均显著低于TBI组小鼠以及NGF组小鼠。实验结果表明Penetratin可促进NGF进入受损脑组织内对中度TBI小鼠具有较好的治疗作用。

关键词：细胞渗透肽 Penetratin 神经生长因子中度创伤性颅脑损伤血脑屏障

竞争性阻断HuR-PARP1相互作用的细胞渗透肽的筛选及其抗炎作用研究

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竞争性阻断HuR-PARP1相互作用的细胞渗透肽的筛选及其抗炎作用研究

作者：王可东北师范大学

学位级别：硕士

真核生物的基因表达调控错综复杂,转录后水平调控在基因精确严密的表达的过程中发挥重要的作用,其中mRNA降解决定mRNA稳定性,进而影响蛋白质的表达量。部分mRNA的3’非翻译区含有ARE元件,ARE元件是一段AU富集序列。含有ARE元件的mRNA均... 详细信息

真核生物的基因表达调控错综复杂,转录后水平调控在基因精确严密的表达的过程中发挥重要的作用,其中mRNA降解决定mRNA稳定性,进而影响蛋白质的表达量。部分mRNA的3’非翻译区含有ARE元件,ARE元件是一段AU富集序列。含有ARE元件的mRNA均为容易降解的mRNA。mRNA的稳定性受到RNA结合蛋白的调控。HuR是为数不多的具有维持mRNA稳定性的蛋白,因此受到人们的广泛关注。HuR在细胞中参与许多生物学事件:mRNA前体的剪切、mRNA成熟、mRNA转运出核以及mRNA翻译和稳定性维持等。HuR作为一种核质蛋白,不同的蛋白修饰均会改变其功能。我们实验室前期工作中发现,细胞受到外界刺激时,HuR能够发生一种聚ADP核糖化(PARylation)修饰,同时HuR与许多炎症因子mRNA的ARE元件结合能力增加,炎症因子表达上调,此外,HuR发生PARylation后,HuR的出核受到促进。HuR-PARP1相互作用会导致炎症因子的表达上调,如果能特异性地阻止炎性刺激条件下HuR-PARP1的相互作用,HuR靶mRNA稳定性下降,抑制炎症因子的表达,这为炎症疾病的治疗提供新策略。在本研究中,我们找到能够特异性抑制HuR-PARP1相互作用的氨基酸序列(短肽)HNS3。利用细胞渗透肽TAT作为载体,将这段氨基酸序列(短肽)运送进入细胞。我们发现,筛选得到的细胞渗透肽TAT-HNS3不仅能够抑制HuR-PARP1相互作用,而且能够抑制HuR的PARylation。细胞渗透肽TAT-HNS3能够高效地跨膜,并且在细胞质和细胞核中均可定位。此外,这段细胞渗透肽对细胞的增殖和生存均没有影响,这为细胞渗透肽的药物开发提供了保障。基于这些实验现象,我们还发现,细胞渗透肽不仅能够抑制HuR的出核,而且能够抑制炎症因子CXCL2,TNF-α,IL-1β的表达。HuR的靶mRNA含有ARE元件,且多为炎症基因和癌基因;此外,炎症和肿瘤的发生和发展过程中,HuR在细胞内的定位发生变化。因此,我们认为细胞渗透肽TAT-HNS3有望成为一种治疗炎症疾病甚至是肿瘤的新方法。

关键词： HuR 聚ADP核糖基化细胞渗透肽 mRNA稳定性

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细胞渗透肽的种类及其应用综述

吉林畜牧兽医 2012年第12期33卷 12-15页

作者：王海洋杨静吉林农业科技学院吉林吉林市132101 吉林省牧业信息中心吉林长春130051

随着药物及疫苗的发展,新型传递系统的应用和研究日益受到关注。细胞渗透蛋白或肽(CPPs)作为一种传递系统,能够穿过哺乳动物细胞膜的能力,且不受受体和能量的约束。细胞渗透肽已经成功地携带荧光标记蛋白、多肽、DNA、螯合剂、脂质体、... 详细信息

随着药物及疫苗的发展,新型传递系统的应用和研究日益受到关注。细胞渗透蛋白或肽(CPPs)作为一种传递系统,能够穿过哺乳动物细胞膜的能力,且不受受体和能量的约束。细胞渗透肽已经成功地携带荧光标记蛋白、多肽、DNA、螯合剂、脂质体、反义核酸等物质,实现体内外的跨膜递送,并可导入几乎所有的细胞和组织。本综述对细胞渗透肽的种类和在动物医学方面的应用做了简要的概述,以此促进细胞渗透肽将来能在动物医学方面有更广阔的应用前景。

关键词：细胞渗透肽 TAT ANTP VP22 应用

细胞渗透肽TAT介导的增强摄取的靶向载药纳米粒子的制备及结合抗癌活性研究

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细胞渗透肽TAT介导的增强摄取的靶向载药纳米粒子的制备及结合抗...

特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选

中国化学会第十四届全国生物无机化学学术会议

作者：吴鸿帅陈方慧焦佳孙柏旺南京市东南大学化学化工学院

近年来,细胞渗透肽的出现大大改善了纳米载体的抗癌效果由于其增强的细胞摄取。在本工作中,近红外诱导的以TAT为基础的靶向载药纳米粒子首先通过自组装构建成球,并用于癌症的化疗、热疗以及光动力结合疗法。尽管TAT肽被PEG长链所遮蔽,但... 详细信息

近年来,细胞渗透肽的出现大大改善了纳米载体的抗癌效果由于其增强的细胞摄取。在本工作中,近红外诱导的以TAT为基础的靶向载药纳米粒子首先通过自组装构建成球,并用于癌症的化疗、热疗以及光动力结合疗法。尽管TAT肽被PEG长链所遮蔽,但TAT肽的引入明显强化了cRGD介导的靶向纳米粒子的细胞内在化效率。此外,经过近红外照射后,阿霉素不仅可以从纳米粒子中被快速释放,封装的吲哚菁绿也可以吸收近红外光产生高热和丰富的活性氧。而且,对纳米粒子的细胞生存率也采用MDA-MB-231和A549两株癌细胞进行了评估,证明了其提升的毒性和杰出的协同抗癌功效。因此,这一个智能的纳米平台在改善结合疗法效果上展现出了一定的潜力。

关键词：纳米载药近红外光细胞渗透肽结合疗法

来源： cnki会议评论

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特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选

Penetratin复合神经生长因子治疗中度创伤性颅脑损伤小鼠

中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会

作者：赵陶然董韵竹张金龙吴诗坡侯利华赵兴卉徐俊杰陈薇军事医学科学院生物工程研究所

细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发及肿瘤靶向治疗等研究领域,均具有广... 详细信息

细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发及肿瘤靶向治疗等研究领域,均具有广阔的应用前景。AML1-ETO是t(8;21)(q22;q22)染色体易位而导致的AML1基因的N端与ETO(eight twenty-one)基因C端大部分融合所产生的融合蛋白,它是急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia,AML)中最常见的癌蛋白之一。有效并特异地下调这些癌蛋白,可以达到特异地消除癌细胞的目的。这种治疗方法与常规放、化疗相比,靶点更加特异,具有更好的选择性,因此毒副作用更小。据统计,大约4%-12%的成年及12-30%的儿童急性髓性白血病患者中都能检测出AML1-ETO。目前国际上对下调AML1-ETO进行的白血病靶向治疗研究主要有两大类,一类是利用反义核酸、核酶或si RNA在核酸水平下调AML1-ETO;另一类是利用药物如冬凌草甲素在蛋白水平下调AML1-ETO,最终导致癌细胞凋亡。但这些方法在实际使用中都会面临如何提药物高靶向性、降低毒副作用的问题。因此,筛选特异性靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽作为药物载体可能是解决上述问题的一个有效方法。本项研究中,我们构建了TAT、REV、PEP-1和PTD4种渗透肽分别与绿色荧光蛋白EGFP融合蛋白的原核细胞表达质粒,以NLS-EGFP及单独的EGFP作为对照,每个蛋白带有His6标签以方便纯化,载体为p ET22b(+)。将五种质粒分别转化入大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,筛选阳性克隆诱导表达,结果发现,37℃下,5种蛋白的表达水平不够理想。而在16℃时,4种融合蛋白都能较高水平地可溶性表达。我们利用镍离子亲和层析的方法将对大量表达的产物进行纯化,最终获得了纯度达90%以上的五种蛋白。用1μM的融合蛋白或EGFP与AML1-ETO+白血病细胞Kasumi-1或SKNO-1共孵育30分钟后在荧光显微镜下观察细胞,发现带有渗透肽的融合蛋白均能以不同程度进入细胞,而单独EGFP不能进入细胞。这说明TAT、REV、PEP-1和PTD4这四种渗透肽都能介导蛋白转导入细胞中。进一步通过流式细胞术对这些细胞中荧光蛋白的转导效率进行分析中发现,TAT和REV这两种渗透肽分子的转导效率更高,均在85%以上。不同的渗透肽对于不同类型的细胞在选择性和亲和力上有较大差异。本研究表明,TAT和REV这两种渗透肽对于AML1-ETO+白血病细胞有较高的亲和力,所介导的物质转导效率较高,有希望能用于靶向递送抑制AML1-ETO表达或促进AML1-ETO降解的药物进入癌细胞,为白血病的靶向治疗与AML1-ETO在白血病发生发展中作用的机理研究提供新思路。

关键词：细胞渗透肽 AML1-ETO 白血病蛋白表达

来源： cnki会议评论

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中国比较医学杂志 2023年第8期33卷 114-121页

作者：尤丽丽付文亮裴洁俞昶乐邢微微蔡贵玲张超徐东刚安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

目的探讨penetratin介导神经生长因子(NGF)对中度创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠的治疗作用。方法首先在细胞水平利用细胞免疫荧光法评估不同细胞渗透肽(CPP)复合NGF蛋白的穿膜效果,明确最佳的复合比例。随后在构建的中度TBI小鼠模型上分析给... 详细信息

目的探讨penetratin介导神经生长因子(NGF)对中度创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠的治疗作用。方法首先在细胞水平利用细胞免疫荧光法评估不同细胞渗透肽(CPP)复合NGF蛋白的穿膜效果,明确最佳的复合比例。随后在构建的中度TBI小鼠模型上分析给药后各组小鼠的行为学变化:利用Morris水迷宫实验检测小鼠的空间记忆功能,转棒实验评估小鼠的协调运动能力。采用免疫组化染色法观察脑组织GFAP、NeuN蛋白的表达情况。结果体外细胞免疫荧光实验结果显示,NGF/penetratin组细胞内NGF蛋白含量显著高于其他组,且在penetratin与NGF的摩尔比为20∶1时荧光强度最高。动物实验结果显示,NGF/penetratin治疗组小鼠的协调运动功能、空间记忆能力以及脑组织内NeuN蛋白表达水平均显著高于TBI组与NGF组小鼠,其脑组织内GFAP蛋白表达水平显著低于TBI组以及NGF组小鼠(P<0.05)。结论Penetratin作为一种药物递送载体可促进NGF通过血脑屏障(BBB)进入受损脑组织内,对中度TBI小鼠具有较好的治疗作用。

关键词：细胞渗透肽 penetratin 神经生长因子中度创伤性颅脑损伤血脑屏障

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非侵入性透血脑屏障药物递送研究进展

军事医学 2023年第1期47卷 75-80页

作者：尤丽丽付文亮张超徐东刚安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

血脑屏障(BBB)是中枢神经系统疾病药物治疗面临的主要瓶颈,它可保护大脑不受细菌、病毒等有害物质侵害,但同时也限制了药物进入脑组织发挥药效。近年来,非侵入性穿透BBB的脑靶向药物递送技术发展迅速,并展现出巨大的应用前景。该文综述... 详细信息

血脑屏障(BBB)是中枢神经系统疾病药物治疗面临的主要瓶颈,它可保护大脑不受细菌、病毒等有害物质侵害,但同时也限制了药物进入脑组织发挥药效。近年来,非侵入性穿透BBB的脑靶向药物递送技术发展迅速,并展现出巨大的应用前景。该文综述了基于细胞渗透肽、细胞载体、特异性受体以及纳米材料等的非侵入性脑靶向药物递送系统的特点及其应用,展望了其未来发展趋势,为中枢神经类疾病药物治疗提供借鉴。

关键词：血脑屏障非侵入性脑靶向药物递送细胞渗透肽纳米材料特异性受体

转运表阿霉素的肝靶向肿瘤微环境响应的多级纳米粒的制备与评价

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转运表阿霉素的肝靶向肿瘤微环境响应的多级纳米粒的制备与评价

作者：戴佳伶青岛大学

学位级别：硕士

肿瘤靶向的纳米载体药物是治疗实体瘤的手段之一,可以提高药物在肿瘤组织和肿瘤细胞的分布。然而实体瘤由于坚实的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)以及较高的肿瘤内流体压力(interstitial fluid pressure,IFP),限制了药物向实体... 详细信息

肿瘤靶向的纳米载体药物是治疗实体瘤的手段之一,可以提高药物在肿瘤组织和肿瘤细胞的分布。然而实体瘤由于坚实的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)以及较高的肿瘤内流体压力(interstitial fluid pressure,IFP),限制了药物向实体瘤内部的渗透。为解决向实体瘤内部持续输送纳米药物的问题,本研究制备了一种肿瘤微环境响应的多级纳米载体,用以靶向递送抗肿瘤药物表柔比星,其特征为:通过自由基加成断裂链转移(RAFT)聚合反应合成两亲性三嵌段聚合物:聚乙二醇-聚(2-二异氨基甲基丙烯酸乙酯)-聚(2-胍乙基甲基丙烯酸酯)(PEDG,mPEG-PDPA-PG),其与表柔比星(Epirubicin,EPI)形成载药胶束(NPs-EPI);再以促渗透肽iRGD修饰的明胶(G-iRGD)作为载体,通过静电作用与载药胶束和透明质酸酶(Hyaluronidase,HAase)形成多级纳米粒(MGNPs)。合成的聚合物通过核磁共振、凝胶渗透色谱进行结构鉴定;利用透射电镜观察其形态;马尔文激光粒度仪观察其粒径及电位;采用酶标仪测定NPs-EPI的载药量及包封率;采用透析法考察NPs-EPI在不同p H条件下的药物释放情况。采用MTT法考察NPs-EPI和纳米递送系统NPs-EPI/HAase/G-iRGD对人肝癌细胞HepG2细胞存活率的影响;建立体外3D肿瘤球模型,利用激光共聚焦显微镜层扫肿瘤球考察HAase对于实体瘤组织渗透性的影响;采用荧光标记法Lyso Tracker-Green DND-26标记溶酶体,考察NPs-EPI在HepG细胞内的分布以及溶酶体逃逸现象;采用流式细胞技术考察HepG细胞对NPs-EPI/G以及NPs-EPI/G-iRGD的摄取效率。建立荷HepG2瘤裸鼠模型,利用冷冻切片技术考察HAase对于实体瘤组织渗透性的影响,同时利用活体成像技术考察NPs-EPI、NPs-EPI/G、NPs-EPI/G-iRGD的体内分布。核磁和凝胶渗透色谱结果表明成功合成了各目标产物;NPs-EPI呈规则的球型,其平均粒径为85.1±0.2nm,平均电位为39.9±0.6mv;载药胶束对EPI的载药量及包封率分别为4.4%和31.7%;NPs-EPI分别在pH为7.4和5.5的磷酸盐缓冲溶液中孵育72h,EPI的累积释放率分别为50%以及82%,呈现出一定的pH依赖性;MTT实验结果表明纳米递送系统NPs/HAase/G-iRGD无明显细胞毒性,细胞相容性良好;体外肿瘤球渗透性实验以及体内肿瘤冷冻切片结果表明NPs-EPI/HAase的荧光强度要明显高于NPs-EPI均说明HAase可以降解细胞外基质的透明质酸,有利于载药胶束更好的渗透进入实体瘤内部;胞内分布实验结果表明随着NPs-EPI给药时间的延长,NPs-EPI可以从溶酶体逃逸出来,发挥抗肿瘤作用;流式结果表明NPs-EPI/G-iRGD比NPs-EPI/G更容易被HepG2所摄取,表明iRGD具有一定的主动靶向作用;活体成像结果表明NPs-EPI/G-iRGD相比NPs-EPI、NPs-EPI/G更容易富集于肝脏中,并随着给药时间延长在肿瘤内有一定的富集。本研究所制备的多级纳米载体能够有效的将EPI递送到实体瘤内部,提高实体瘤低渗透性从而发挥抗肿瘤的效果。

关键词：药物递送系统肿瘤渗透性多级纳米粒透明质酸酶细胞渗透肽