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水分胁迫对芒果(Mangifera indica L.)幼叶细胞活性氧伤害的影响

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生命科学研究 2000年第1期4卷 60-64页

作者：陈由强朱锦懋叶冰莹福建师范大学生物工程学院中国福建福州350007

对芒果进行水分干旱胁迫处理 .结果表明 ,水分胁迫使芒果幼叶的相对含水量 RWC( relative water content)和叶水势 ΨT 下降 .芒果幼叶的超氧离子 O- 2.产生速率随水分胁迫处理强度加大而增加 .丙二醛 MDA( malondialdehyde)含量的变化... 详细信息

对芒果进行水分干旱胁迫处理 .结果表明 ,水分胁迫使芒果幼叶的相对含水量 RWC( relative water content)和叶水势 ΨT 下降 .芒果幼叶的超氧离子 O- 2.产生速率随水分胁迫处理强度加大而增加 .丙二醛 MDA( malondialdehyde)含量的变化趋势与 O- 2.产生速率的变化趋势相似 ,超氧歧化酶 SOD( superoxide dismutace) ,过氧化物酶 POD( peroxidase)和过氧化氢酶 CAT( catalase)的活性水平也与 O- 2.的变化相一致 ,细胞相对质膜透性加大 .说明芒果幼叶的水分胁迫损伤 ,是由 O- 2.引发的膜脂过氧化 ,致使 MDA含量增加。

关键词：水分胁迫幼叶芒果抗旱育种细胞活性氧

高丽参热水提取物对神经母细胞瘤细胞parthanatos的影响

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南方医科大学学报 2020年第9期40卷 1313-1318页

作者：郭远波张登文龙瑞春单松贵孙强蔡彬王晟广东省人民医院//广东省医学科学院麻醉科广东广州510080 广东省人民医院//广东省医学科学院科教处广东广州510080

目的探讨高丽参热水提取物预处理对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞parthanatos的影响及其机制。方法将SH-SY5Y细胞分为空白组、MNNG诱导组及高丽参热水提取物预处理组,空白组细胞不给予任何处理,MNNG诱... 详细信息

目的探讨高丽参热水提取物预处理对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞parthanatos的影响及其机制。方法将SH-SY5Y细胞分为空白组、MNNG诱导组及高丽参热水提取物预处理组,空白组细胞不给予任何处理,MNNG诱导组给与MNNG 250μmol/L刺激1 h或4 h,高丽参热水提取物预处理组在给与MNNG诱导前先给与高丽参热水提取物1 mg/mL预处理。以CCK-8和细胞流式技术检测细胞存活率,Western blot检测PAR蛋白,免疫荧光检测AIF核质分布,细胞流式技术检测细胞活性氧的表达。结果与空白组比较,SH-SY5Y细胞的存活率随着MNNG刺激的浓度和时间的增加而逐渐降低(P活性氧的表达增加,而高丽参热水提取物预处理后,活性氧的表达显著降低(P细胞可以降低活性氧的产生并降低了MNNG诱导的parthanatos的发生。

关键词：高丽参热水提取物 parthanatos 细胞活性氧多聚(ADP-核糖) 凋亡诱导因子

α-倒捻子素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

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国际眼科杂志 2015年第6期15卷 959-962页

作者：苏途方圆谢平袁松涛范雯许译丹刘庆淮南京医科大学第一附属医院眼科中国江苏省南京市210029

目的：研究α-倒捻子素对过氧化氢（H2O2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用。方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H2O2处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H2O2对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素... 详细信息

目的：研究α-倒捻子素对过氧化氢（H2O2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用。方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H2O2处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H2O2对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19,再用200μmol/L H2O2处理24h,观察细胞活性变化。流式细胞仪检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平变化,免疫印迹法（Western blot）检测NF-kB蛋白表达变化。结果：CCK8法检测结果显示：当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时,ARPE-19活性无明显变化;当浓度达到16μmol/L时,细胞活性开始下降（P〈0.05）。H2O2诱导后,当α-倒捻子素浓度在0～16μmol/L之内时,α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性。ROS结果表示：H2O2诱导后,ROS表达量增高（P〈0.05）;8和12μmol/Lα-倒捻子素预处理,均可有效清除H2O2诱导产生的ROS（P〈0.05）。Western blot结果显示：H2O2诱导后NF-kB蛋白表达增高（P〈0.05）,12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H2O2诱导后ARPE-19的NF-kB蛋白表达（P〈0.05）。结论：H2O2诱导ARPE-19细胞氧化损伤,造成细胞活性下降,ROS表达量增加,经过α-倒捻子素预处理后,可有效提高细胞活性,清除ROS,活化NF-kB。

关键词： α-倒捻子素视网膜色素上皮细胞氧化损伤细胞核因子-κB 细胞活性氧

真核表达载体GV394-Nurr1的构建及鉴定

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中国比较医学杂志 2016年第7期26卷 31-34,63页

作者：樊秀双郭军堂陈安琪潍坊医学院临床学院山东潍坊261053

目的构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394-Nurr1,检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。方法 PCR扩增人Nurr1基因,克隆至T载体,测序正确后与真核载体GV394一起,经Bam HI和Xho I双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建GV394-Nu... 详细信息

目的构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394-Nurr1,检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。方法 PCR扩增人Nurr1基因,克隆至T载体,测序正确后与真核载体GV394一起,经Bam HI和Xho I双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建GV394-Nurr1;采用脂质体将GV394-Nurr1瞬时转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,RT-PCR检测Nurr1基因mRNA水平,通过DCFH-DA染色检测Nurr1对细胞内ROS水平的影响。结果 PCR及测序证实人Nurr1基因正确克隆至真核表达载体GV394;RT-PCR显示Nurr1基因mRNA水平在瞬时转染的细胞中明显增高;DCFH-DA染色显示瞬时转染Nurr1的神经母细胞瘤细胞的细胞内的ROS水平峰值较对照组明显左移。结论成功构建人源性Nurr1真核载体,可在SH-SY5Y细胞中表达并减少细胞内ROS水平,为进一步在体外研究Nurr1的功能及其与多巴胺能神经元的保护作用的关系提供了基础。

关键词： Nurr1 真核表达载体帕金森氏病细胞活性氧

艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性研究

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艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性研究

作者：蔡虹北京中医药大学

学位级别：硕士

目的：本实验将运用国内外较为公认的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383来研究外界刺激物对机体呼吸系统的影响,通过观察艾烟冷凝物（艾烟烟气生成物）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖、细胞吞噬功能以及细胞活性氧的影响,进而探讨艾烟冷凝物对体... 详细信息

目的：本实验将运用国内外较为公认的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383来研究外界刺激物对机体呼吸系统的影响,通过观察艾烟冷凝物（艾烟烟气生成物）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖、细胞吞噬功能以及细胞活性氧的影响,进而探讨艾烟冷凝物对体外培养细胞NR8383的活性,其对NR8383细胞是否具有一定的毒性作用,从而为评价艾灸的安全性提供一定的实验依据。方法：在细胞增殖实验中,将艾烟冷凝物染毒浓度分别设计为0mg/ml、0.004mg/ml0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml、0.020mg/ml,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间分别为12h、24h、36h、48h,然后采用CCK-8方法对细胞增殖情况进行检测;吞噬功能实验中,艾烟冷凝物染毒浓度设计同上,对NR8383进行细胞染毒24h后,采用流式细胞仪检测吞噬率;活性氧实验中,艾烟冷凝物浓度分别为0mg/ml、0.008mg/ml、0.016mg/ml、0.024mg/ml、0.032mg/ml、0.040mg/ml,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间为24h,采用流式细胞仪检测细胞活性氧。结果：艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞进行染毒12h后,各实验组的细胞存活率虽都高于空白对照组,但各实验组与空白对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。染毒24h、36h后,实验组浓度为0.004mg/ml、0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml时,各组细胞存活率不仅高于空白对照组,且各实验组与空白对照组差异有统计学意义（P＜0.05）,实验组浓度为0.020mg/ml时,其存活率虽低于空白对照组,但与空白对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。染毒48h后,除浓度为0.008mg/ml的实验组外,其余各组细胞存活率与空白对照组差异有统计学意义（P＜0.05）。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒12h、24h、36h、48h后,NR8383细胞存活率随着艾烟冷凝物浓度的升高均呈现先增加后降低的趋势,艾烟冷凝物对NR8383细胞的作用存在着一定的浓度效应。且随着作用时间的延长,细胞存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低,其对NR8383细胞的作用存在着一定的时间效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而增强。除浓度为0.004mg/ml的实验组外,其他各组与空白对照组差异均有统计学意义（P＜0.005,校正卡方值）。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的活性氧随着艾烟冷凝物浓度的升高而降低。各实验组与空白对照组差异均有统计学意义（P＜0.001）。结论：1、艾烟冷凝物对NR8383细胞的增殖存在着一定的浓度效应和时间效应。在实验所设计的染毒时间上,NR8383细胞均随着艾烟冷凝物浓度的升高呈现出了先增加后降低的趋势,且随着染毒时间的不断延长,NR8383细胞的存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低。 2、艾烟冷凝物可以提高大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能,并呈现出一定的浓度效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而呈现出增强的趋势。 3、艾烟冷凝物可以降低大鼠肺泡巨噬细胞NR8384的ROS,并呈现出一定的浓度效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的ROS随着艾烟冷凝物浓度的升高而呈现出降低的趋势。

关键词：艾烟冷凝物肺泡巨噬细胞细胞增殖细胞活性氧吞噬功能

组蛋白去乙酰化酶Sirt7调控血管钙化的分子机制研究

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组蛋白去乙酰化酶Sirt7调控血管钙化的分子机制研究

作者：陈子英广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景血管钙化是慢性肾病(Chronic kidney disease,CKD)最常见的心血管并发症之一,其显著增加CKD患者心血管疾病的发生率和死亡率。血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)向成骨样细胞转化是血管钙化过程中的关键事件... 详细信息

研究背景血管钙化是慢性肾病(Chronic kidney disease,CKD)最常见的心血管并发症之一,其显著增加CKD患者心血管疾病的发生率和死亡率。血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)向成骨样细胞转化是血管钙化过程中的关键事件。CKD患者的高磷血症是血管钙化发生和进展的重要危险因素。前人及我们的研究表明,体外高磷处理可诱导VSMCs表达碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALPL)、核心结合因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP2)等成骨细胞基因,从而促进血管钙化。目前尚无有效药物可延缓或逆转血管钙化。因此,深入研究血管钙化的分子机制,发现潜在的药物靶点,对于开发针对血管钙化的新型药物,降低CKD患者心血管并发症、改善CKD患者生活质量具有十分重要的意义。Sirt7是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide NAD+)的组蛋白去乙酰化酶sirtuins家族成员之一,其底物包括组蛋白和非组蛋白。研究表明,Sirt7可通过去乙酰化修饰其底物,从而调控基因表达或蛋白质功能。前期研究发现Sirt7在心血管疾病中有重要作用。然而,Sirt7在CKD血管钙化过程中的作用和机制尚未有相关报道。研究目的本论文采用血管钙化细胞和动物模型,旨在阐明Sirt7在CKD血管钙化发生过程中的作用和机制,为开发防治血管钙化的新型药物提供一个潜在的药物靶点。研究方法(1)高磷诱导小鼠VSMCs钙化模型的建立与验证按照本实验室常规方法分离培养小鼠主动脉VSMCs。为保证VSMCs生物学特性稳定,2-4代的细胞用于后续实验。分别以正常磷(1 m M Pi)和高磷(3m M Pi)处理VSMCs 0、7和14天,诱导体外钙化。茜素红染色和钙离子定量检测磷酸钙盐沉积量。RT-q PCR检测成骨标志基因Runx2、Bmp2、Opn和Alpl的m RNA表达水平。(2)小鼠血管钙化模型的建立与验证C57BL/6雄性7周龄小鼠每天皮下注射5 X 105 IU kg-1 Vitamin D3,连续注射3天后正常喂养4天诱导血管钙化。分离主动脉,茜素红染色和钙离子定量分析观察主动脉的磷酸钙盐沉积量。RT-q PCR检测成骨标志基因Runx2、Bmp2、Opn和Alpl的m RNA表达水平。(3)Sirt7对高磷诱导VSMCs体外钙化的影响体外培养小鼠主动脉环,分别采用正常磷(1 m M Pi)和高磷(5 m M Pi)处理并同时加入10m M sirtuins抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)处理6天,茜素红染色观察磷酸钙盐沉积量。分别采用正常磷(1 m M Pi)和高磷(3 m M Pi)处理VSMCs并同时加入5、10m M NAM处理9天,茜素红染色和钙离子定量分析磷酸钙盐沉积量。VSMCs转染阴性对照si RNA或Sirt7 si RNA同时采用正常磷(1 m M Pi)和高磷(3 m M Pi)处理9天,茜素红和钙离子定量分析磷酸钙盐沉积量。RTq PCR检测成骨标志基因Runx2、Bmp2、Opn、Alpl和Osterix的m RNA表达水平。Western blot检测Runx2、Bmp2和Osterix的蛋白表达水平。(4)高通量RNA测序VSMCs分别转染对照si RNA或Sirt7 si RNA 48小时。RT-q PCR确认干扰效率,剩余样品送上海康成生物工程有限公司完成高通量RNA测序和后续生物信息学分析。(5)活性氧的检测VSMCs转染阴性对照si RNA或Sirt7 si RNA同时采用正常磷(1 m M Pi)和高磷(3 m M Pi)处理48小时后,加入H2DCFDA孵育30分钟,流式细胞仪检测活性氧水平。(6)细胞周期的检测VSMCs转染对照si RNA或Sirt7 si RNA 48小时。RNase处理细胞后使用碘化丙啶对细胞进行染色。采用流式细胞仪对G0/G1、S以及G2/M期的细胞中DNA含量进行检测。(7)细胞衰老的检测采用正常磷(1 mM Pi)和高磷(3 mM Pi)处理VSMCs同时转染对照si RNA或Sirt7 si RNA 9天。按照β-半乳糖苷酶染色(Senescenceβ-Galactosidase,SA-β-gal)试剂盒说明书对细胞进行染色,用光学显微镜拍照。研究结果茜素红染色和钙离子定量结果显示3mM Pi可成功诱导VSMCs体外钙化。成骨基因Runx2和Bmp2的m RNA表达水平在钙化的VSMCs中明显上升。茜素红染色和钙离子定量结果显示

关键词：血管钙化组蛋白去乙酰化酶Sirt7 VSMCs 细胞活性氧细胞周期细胞衰老

射频电磁辐射对雄性SD大鼠和TM3细胞睾酮分泌的影响研究

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射频电磁辐射对雄性SD大鼠和TM3细胞睾酮分泌的影响研究

作者：林艳云第四军医大学

学位级别：硕士

研究背景随着通讯事业的快速发展,移动电话等通讯设备在全世界范围内普及,人类暴露于移动电话产生的射频电磁场(Radiofrequency Field,RF)中的时间和强度也随之增加,因此射频电磁辐射是否会对人类健康产生负面影响备受世界关注。以往研... 详细信息

研究背景随着通讯事业的快速发展,移动电话等通讯设备在全世界范围内普及,人类暴露于移动电话产生的射频电磁场(Radiofrequency Field,RF)中的时间和强度也随之增加,因此射频电磁辐射是否会对人类健康产生负面影响备受世界关注。以往研究显示,射频电磁辐射可能对生殖系统、中枢神经系统和免疫系统等产生不良效应,其中生殖系统具有产生生殖细胞、分泌性激素和维持第二性征等重要功能,也是射频电磁辐射的重要靶器官,因此射频电磁辐射与生殖损伤的关系成为近年来人们研究的热点问题。但由于这些研究报道所选择的实验对象及辐照参数的不同,得到的实验结果并不相同,且缺乏对作用机制的研究探讨。因此,本文选择我国目前最常用的手机射频辐射频率1840MHz和1950MHz,分别以成年雄性SD大鼠和小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为研究对象,从组织形态结构、性激素分泌、抗氧化系统和能量代谢酶等方面入手,全面分析射频电磁辐射对雄性睾酮分泌的影响,并对其可能的作用机理作初步探讨。目的探讨射频电磁辐射对雄性SD大鼠和TM3细胞睾酮分泌的影响及相关作用机制,为进一步了解射频电磁辐射对生殖系统产生的生物效应,提供新的理论依据和数据支持。方法一、动物实验:成年雄性SD大鼠24只,按体重随机分为辐照组和假辐照组,选用频率为1840兆赫兹(MHz)、输出功率170瓦(W)、睾丸比吸收率(Specific Absorption Rate,SAR)为3W/kg的射频电磁辐射,对辐照组SD大鼠进行全身照射,每天照射30min,连续照射5d,分别于照后即刻和照后第7d处死大鼠,采集心脏血和取睾丸组织,用于观察以下指标:1.组织形态结构:用HE染色法观察SD大鼠睾丸组织形态结构的变化;2.性激素分泌:应用放射免疫法分析SD大鼠血清睾酮(T)、促性腺激素释放激素(Gn RH)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的水平;3.抗氧化能力:采用比色法检测SD大鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的变化;4.能量代谢酶:采用比色法检测睾丸组织中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和Ca-Mg-ATPase酶的活性变化。二、细胞实验采用频率为1950 MHz,SAR值为3W/kg、GSM talk信号的射频电磁辐射,对小鼠睾丸间质细胞系(TM3)连续辐照24h,分别于照射后0d、1d、2d、3d、4d、5d,收取假辐照组、辐照组细胞上清液和细胞,观察以下指标:1.细胞增殖:分别采用CCK-8法和克隆形成法检测细胞增殖能力;2.细胞周期和凋亡:采用流式细胞仪检测TM3细胞周期和细胞凋亡的变化;3.睾酮含量:应用ELISA法检测TM3细胞睾酮分泌功能;4.细胞活性氧:分别应用流式细胞仪和分光光度计检测TM3细胞内活性氧水平;5.抗氧化能力:用ELISA方法检测TM3细胞上清液中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化;6.睾酮分泌相关因子mRNA表达:运用Real-time PCR方法检测细胞中类固醇合成快速调节蛋白(St AR)、细胞色数P450侧链裂解酶(P450scc)和雄激素受体(AR)的mRNA表达水平。结果一、动物实验:1.1840MHz电磁辐射对雄性SD大鼠睾丸形态结构的影响:1840MHz电磁辐射连续照射5d后,辐照组大鼠体重、睾丸重量和睾丸指数在照后即刻和照后第7d与假辐照组相比均没有明显差异;辐照组大鼠生精小管直径与假辐照组相比,在照后即刻和照后第7d均有缩短趋势,但差异没有统计学意义。2.1840MHz电磁辐射对雄性SD大鼠性激素分泌的影响:辐照组大鼠血清T含量在照后即刻和照后第7d时均比假辐照组降低,且在照后第7d时明显低于假辐照组,差异具有统计学意义(P氧化能力的影响:辐照组SD大鼠睾丸组织中T-AOC的活性,于照后即刻明显比假辐照组上升,差异具有统计学意义(P﹤0.05),照后第7d时辐照组T-AOC活性与假辐照组相比,差异无统计学意义;SOD的活性和MDA的含量在辐照组与假辐照组之间没有统计学差异。4.1840MHz电磁辐射对雄性SD大鼠睾丸能量代谢酶的影响:辐照组SD大鼠睾丸组织中LDH的活性与假辐照组相比,于照后即刻和照后第7d,均没有明显差异;辐照组SDH活力于照后即刻和照后第7d时均比假辐照组升高,且照后第7d时辐照组SDH活力明显高于假辐照组,差异具有统计学意义(P细胞实验1.1950MHz电磁辐射对TM

关键词：射频电磁辐射 SD大鼠小鼠睾丸间质细胞系睾酮细胞增殖能量代谢酶细胞活性氧 Real-Time PCR

PEMF通过调控细胞内活性氧水平抑制RANKL诱导的破骨细胞分化

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PEMF通过调控细胞内活性氧水平抑制RANKL诱导的破骨细胞分化

作者：皮颖南方医科大学

学位级别：硕士

背景:机体骨量的平衡由骨吸收和骨形成所维持,破骨细胞是体内唯一具有骨吸收功能的细胞,其数量和活性增加将导致骨质疏松症发生。数据统计显示骨质疏松使得老年人发生髓部骨折的机会增加50%,这给社会和家庭都带来了沉重的负担。目前对... 详细信息

背景:机体骨量的平衡由骨吸收和骨形成所维持,破骨细胞是体内唯一具有骨吸收功能的细胞,其数量和活性增加将导致骨质疏松症发生。数据统计显示骨质疏松使得老年人发生髓部骨折的机会增加50%,这给社会和家庭都带来了沉重的负担。目前对于骨质疏松主要以雌激素替代及药物治疗为主,但是副作用明显,甚至增加肿瘤发生的风险,因此寻求新的治疗方式对临床意义重大。破骨细胞分化受多条信号通路调控,经典的RANK/RANKL(Receptor Activator for Nuclear Factor-κB Ligand)信号通路是对破骨细胞分化最为重要。低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic felds,PEMF)作为新的治疗手段已经应用于骨质疏松症的局部治疗,取得了令人满意的临床效果。许多基础也研究证实PEMF能够影响破骨细胞分化,但是具体的机制未完全阐明。细胞内活性氧(ROS)是细胞线粒体电子链传递过程中相关酶促反应的副产物。近年来的研究显示,细胞内ROS的变化与破骨细胞分化成熟密切相关。有一些文献报道PEMF可降低其他细胞内ROS水平,因此我们猜想PEMF可能通过调控细胞内ROS水平抑制破骨细胞分化,为临床治疗骨质疏松症提供新的思路。目的:(1)探究PEMF是否抑制RANKL诱导的破骨细胞分化;(2)探究PEMF是否通过调控细胞内活性氧抑制RANKL诱导的破骨细胞分化;内容和方法:(1)采用CCK-8试剂盒检测PEMF对RAW264.7细胞增殖活性的影响;(2)使用RANKL作为诱导剂处理细胞4天,根据不同的实验分组分别处理细胞,TRAP染色后对比各组所诱导分化的破骨细胞数目,检测破骨细胞分化过程中标志基因及蛋白的表达水平的变化;(3)探索PEMF对细胞分化过程中ROS的影响,细胞在诱导2天后使用DCFH-DA作为ROS探针,检测不同干预条件下ROS水平的变化。(4)探究ROS与破骨细胞分化的关系,使用ROS清除剂DPI处理RANKL诱导的破骨细胞,经TRAP染色后计数破骨细胞形成数目,检测各组相关蛋白表达水平的变化,验证ROS与破骨细胞分化之间的关系。结果:我们的实验证实PEMF并不影响RAW264.7细胞的增殖活性。PEMF能抑制RANKL诱导的破骨细胞分化。与RANKL组细胞相比,PEMF+RANKL组成熟破骨细胞数目及TRAP酶活性明显降低,破骨细胞分化相关标志基因、蛋白(CTSK、TRAP、NFATc1)表达水平均显著下降,组间差异具有统计学差异。PEMF具有抗氧化性,能降低破骨细胞分化过程中细胞内ROS水平。ROS与破骨细胞分化密切相关,使用RANKL诱导破骨细胞分化后,细胞内ROS水平明显升高。但是,使用ROS清除剂DPI降低细胞内ROS水平能显著抑制RANKL诱导的破骨细胞分化。结论:1.在体外培养条件下,PEMF可抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化。2.细胞内ROS水平的变化与破骨细胞分化密切相关,降低细胞内ROS水平可显著抑制破骨分化,ROS可能成为治疗骨质疏松症的潜在靶点。3.在体外培养条件下,PEMF可能通过降低细胞内ROS水平抑制RANKL诱导的破骨细胞分化。

关键词：骨质疏松症破骨细胞分化细胞活性氧低频脉冲电磁场 RANKL信号通路

替罗非班通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路对氧糖剥夺心肌细胞的干预作用

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岭南心血管病杂志 2021年第2期27卷 209-213页

作者：李冰段宏宇李玉梅郝一鸣内蒙古包钢医院心血管内科内蒙古包头014010

目的探讨替罗非班对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)心肌细胞的干预作用,并探索其相关机制。方法H9C2细胞被分为正常组、模型组、替罗非班组、抑制剂组、替罗非班+抑制剂组。建立OGD细胞模型,以MTT曲线确定最终的实验浓度和... 详细信息

目的探讨替罗非班对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)心肌细胞的干预作用,并探索其相关机制。方法H9C2细胞被分为正常组、模型组、替罗非班组、抑制剂组、替罗非班+抑制剂组。建立OGD细胞模型,以MTT曲线确定最终的实验浓度和作用时间为替罗非班100 nmol/L,作用时间为24 h。以流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;以酶联免疫吸附试验法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)浓度;以Western Blot法检测磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylation PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化AKT(phosphorylation AKT,p-AKT)的表达。结果和模型组比较,替罗非班组、抑制剂组、替罗非班+抑制剂组的ROS和TNF-α、IL-6、ANP、BNP浓度显著降低,p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P细胞起到保护作用。

关键词：替罗非班心肌细胞磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路细胞活性氧