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微生物学免疫学进展 2004年第3期32卷 69-72页

作者：黄健郭建巍蔡美英电子科技大学生命科学与技术学院成都610054 军事医学科学院北京100850 四川大学华西医学中心免疫学教研室成都610041

细胞毒性t细胞表位是由8～10个连续的氨基酸残基构成的特殊肽段.本文对基于基序、基于结构、基于人工神经网络和隐马尔可夫模型的各类细胞毒性t细胞表位预测方法进行了综述.

关键词：细胞毒性t细胞表位预测

大鼠肝癌组织中巨噬细胞对细胞毒性t细胞浸润与凋亡的影响

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大鼠肝癌组织中巨噬细胞对细胞毒性T细胞浸润与凋亡的影响

作者：徐建复旦大学

学位级别：硕士

研究目的：血液中单核细胞进入外周组织后在不同刺激因素作用下可分化为经典激活的巨噬细胞（M1）和选择性激活的巨噬细胞（M2）。研究报道,肿瘤组织中巨噬细胞具有M2型巨噬细胞表型;原发性肝癌切除患者,其肿瘤组织中巨噬细胞浸润... 详细信息

研究目的：血液中单核细胞进入外周组织后在不同刺激因素作用下可分化为经典激活的巨噬细胞（M1）和选择性激活的巨噬细胞（M2）。研究报道,肿瘤组织中巨噬细胞具有M2型巨噬细胞表型;原发性肝癌切除患者,其肿瘤组织中巨噬细胞浸润增多提示术后预后不良;在肝癌组织中,细胞毒性t细胞浸润增多是无病生存期和总生存期改善的独立预后因素。为了进一步观察和了解肿瘤微环境中巨噬细胞对细胞毒性t细胞的影响,从而进一步明确巨噬细胞在肿瘤发生发展中所起的作用,我们设计了该实验。研究方法：构建Wistar大鼠Walker-256肝癌模型。将大鼠分为3组：A组（腹腔注射氯磷酸盐脂质体）、B组（腹腔注射PBS脂质体）、C组（腹腔注射生理盐水）。干预12天后摘取肿瘤组织,测量肿瘤大小、观察腹腔肿瘤转移及腹水情况;应用免疫组化方法检测肿瘤组织、癌周组织及癌远端组织中浸润的CD68,CD163,CD8及GranzymeB P日性细胞个数（表达CD68、CD163的细胞为巨噬细胞,表达CD8,GranzymeB的细胞为t细胞）;应用CD8与tunel双标方法检测肿瘤组织中t细胞的凋亡。研究结果： 1 A、B、C三组的肿瘤体积分别为：（0.13±0.09）cm3、（0.27±0.14）cm3、（0.41±0.36）cm3;肿瘤重量分别为：（0.16±0.14）g、（0.31±0.13）g、（0.34±0.35）g;腹腔转移阳性率分别为0%,42.86%,33.33%;腹水阳性率分别为0%,42.86%,33.33%。三组间比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。 2未进行干预的大鼠,其癌组织、癌旁肝组织及癌远端肝组织中,CD68阳性细胞个数分别为：（134.29±35.45）、（41.72±13.62）、（38.20±13.43）,癌组织分别与癌旁肝组织、癌远端肝组织比较,差异有统计学意义（p＜0.05）。CD163阳性细胞个数分别为：（47.84±1.61）、（32.55±31.23）、（31.66±17.68）;CD8阳性细胞个数分别为：（104.95±35.77）、（119.14±28.24）、（106.12±19.57）;GranzymeB阳性细胞个数分别为：（11.48±6.60）、（13.13±1.84）、（12.39±1.62）。CD163、CD8、GranzymeB阳性细胞数,三组之间差异无统计学意义（p＞0.05）。 3 A、B、C三组中,CD68阳性细胞个数分别为：（91.73±22.36）、（153.88±47.66）、（134.29±35.45）,A、B组之间比较,差异有统计学意义（p＜0.05）。CD163阳性细胞个数分别为：（34.43±9.32）、（53.33±1.45）、（47.84±1.61）,A、B组之间比较,差异有统计学意义（p＜0.05）。CD8阳性细胞个数分别为：（194.52±71.60）、（183.36±59.96）、（104.95±35.77）,A、C组之间,B、C组之间,差异均有统计学意义（p＜0.05）。Granzyme阳性细胞个数分别为（26.88±1.14）、（18.44±6.70）、（11.48±6.60）,A、C组之间比较,差异有统计学意义（p＜0.05）;其余各组间比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。 4相关分析显示,肿瘤组织中CD68与CD8阳性细胞之间呈负相关（r=-0.221,p=0.030）;CD163与GranzymeB阳性细胞之间呈负相关（r=-0.464,p=0.030）;CD163与CD8阳性细胞之间无相关性（r=0.224,p=0.316）;CD68与GranzymeB阳性细胞之间无相关性（r=0.017,p=0.939）。 5 A、B、C三组中t细胞（CD8）凋亡率分别为：（3.63±1.49）、（6.60±6.60）、（9.42±4.40）,其中,A组和C组之间,差异有统计学意义（p＜0.05）：其余各组间比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。结论： 1氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中巨噬细胞浸润明显低于PBS脂质体组和生理盐水对照组。提示,氯磷酸盐脂质体可有效清除肝癌组织中巨噬细胞。 2氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中细胞毒性t细胞浸润明显高于PBS脂质体组和生理盐水组。提示,巨噬细胞被清除后t细胞浸润增多;间接提示,巨噬细胞抑制t细胞的浸润。 3氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中细胞毒性t细胞凋亡明显低于PBS脂质体组和生理盐水组。提示,巨噬细胞被清除后t细胞凋亡减少;间接提示,巨噬细胞可促进t细胞凋亡。

关键词：肿瘤巨噬细胞细胞毒性t细胞浸润凋亡

转基因树突状细胞激活细胞毒性t细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验

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中国生物制品学杂志 2002年第4期15卷 193-196页

作者：张耀张伟京朱平军事医学科学院附属307医院肿瘤二科北京100039 北京大学第一医院血液内科北京l00034

目的探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性t细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转... 详细信息

目的探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性t细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞。转染成功的树突状细胞与外周血t淋巴细胞共培养,激活特异性CtL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-tdR掺入法观察CLLs对瘤细胞的特异性杀伤效应。结果树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血t细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义（Pt淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应。

关键词：转基因树突状细胞激活细胞毒性t细胞特异性杀伤淋巴瘤体外实验

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细胞毒性t细胞在白血病中的研究进展

国外医学（免疫学分册） 2004年第6期27卷 339-342页

作者：董静王其新张源潮青岛大学医学院附属医院急诊内科266003 山东省立医院风湿科

t细胞免疫在急性白血病的抗肿瘤免疫中起重要作用,细胞毒性t细胞(CtL)被活化至少需要两个信号,t辅助细胞的活化必须由抗原提呈细胞提呈MHCII类抗原,而后者还必须有表面的B7分子与t辅助细胞上的CD28分子相结合才能完成;急性白血病人体内... 详细信息

t细胞免疫在急性白血病的抗肿瘤免疫中起重要作用,细胞毒性t细胞(CtL)被活化至少需要两个信号,t辅助细胞的活化必须由抗原提呈细胞提呈MHCII类抗原,而后者还必须有表面的B7分子与t辅助细胞上的CD28分子相结合才能完成;急性白血病人体内可能存在可被IL-2诱导的CtL的前体细胞;CtL对白血病细胞的作用途径以MHC限制性途径为主。

关键词：细胞毒性t细胞白血病急性免疫治疗

人类免疫缺陷病毒感染细胞毒性t细胞逃逸突变的研究进展

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国际免疫学杂志 2010年第3期33卷 180-183,187页

作者：贾明明洪坤学邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京102206

人类免疫缺陷病毒（HIV）-1感染者体内活化的细胞毒性t细胞（CtL）反应不足以清除病毒，这是由于HIV。1在HLA限制的CtL压力下经常发生逃逸突变。但是，部分CtL逃逸突变会造成HIV病毒适应性的下降。近年来，人们对HIV-1感染中CtL逃逸突... 详细信息

人类免疫缺陷病毒（HIV）-1感染者体内活化的细胞毒性t细胞（CtL）反应不足以清除病毒，这是由于HIV。1在HLA限制的CtL压力下经常发生逃逸突变。但是，部分CtL逃逸突变会造成HIV病毒适应性的下降。近年来，人们对HIV-1感染中CtL逃逸突变的特征以及不同位点的逃逸突变在疾病进程中的作用进行了比较深入的研究，因而探讨CtL压力下HIV逃逸突变的规律有助于了解HIV-1自然感染中的免疫保护机制，并为开发有效的HIV疫苗提供依据。

关键词：人类免疫缺陷病毒人类白细胞抗原细胞毒性t细胞逃逸突变

结直肠癌中细胞毒性t细胞募集相关趋化因子及其与肠黏膜菌群的关系

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结直肠癌中细胞毒性T细胞募集相关趋化因子及其与肠黏膜菌群的关系

作者：陶寄江南大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是消化道中最常见的恶性肿瘤之一。肠道菌群紊乱可促进结直肠癌的发生及发展,最近报道表明肠道菌群可能影响t细胞向CRC肿瘤组织中的运输。因此,菌群的改变可能影响CRC患者的临床结局。本研究目的... 详细信息

目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是消化道中最常见的恶性肿瘤之一。肠道菌群紊乱可促进结直肠癌的发生及发展,最近报道表明肠道菌群可能影响t细胞向CRC肿瘤组织中的运输。因此,菌群的改变可能影响CRC患者的临床结局。本研究目的是评估CRC进展过程中肿瘤和邻近正常组织中主要募集细胞毒性t细胞的多种趋化因子的表达水平以及与其相关的肠黏膜菌群,并研究它们在CRC患者中的相互作用。方法:对136名CRC患者的肿瘤和配对的邻近正常组织样品进行处理,以分析主要的募集细胞毒性t细胞的趋化因子的表达水平和临床价值。(1)提取患者肠黏膜RNA,通过逆转录-实时定量聚合酶链式反应(Rt-qPCR)评估来自CRC患者配对的肿瘤和正常组织中主要募集细胞毒性t细胞的趋化因子(包括CXCL9、CXCL10、CXCL11和CCL5)的表达。(2)对患者进行随访,获得患者生存信息,通过Kaplan-Meier和Cox比例风险模型分析评估了这些趋化因子的预后意义。(3)提取肠黏膜微生物DNA,进行16S rRNA基因高通量测序后,分析101对数据质检合格的配对组织中的肠黏膜菌群特征。使用Wilcoxon符号秩检验评估肿瘤和匹配的正常组织之间的菌群成差异。使用Spearman相关性分析研究CRC肠黏膜菌群与募集细胞毒性t细胞的趋化因子之间的关联。使用PICRUSt获得菌群的功能预测。结果:(1)在136例CRC患者中,CXCL9、CXCL10和CXCL11在肿瘤中的表达高于正常组织。CXCL9在肿瘤组织中的高表达与CD8t细胞浸润的增强有关,肿瘤和正常组织中CXCL9的高表达和生存率的提高有关。(2)与正常组织相比,肿瘤组织中黏膜菌群表现出微生物多样性降低和口腔共生菌增加的特征。微生物网络分析确定了肿瘤与相邻的正常组织的黏膜相关菌群(MAM)的菌群成和结构差异。肿瘤富集的一些细菌类群Clostridium、Lachnoanaerobaculumorale、Peptostreptococcus、Fusobaterium、Oribacterium、Parvimonas和Selenomonas,在CRC黏膜相关微生物网络中具有明显的中心性(p细胞毒性t细胞募集的趋化因子和CRC患者MAM的关系表明趋化因子的表达与特定细菌类群丰度的转变相关,表明具有潜在的功能相互作用。结论:本研究发现CRC中口腔共生菌与肠道微生物之间更强的相互作用,以及MAM与肿瘤组织中主要募集细胞毒性t细胞的趋化因子之间的可变的相关性,提示CRC中趋化因子表达的调控机制可能与肠道菌群和宿主之间的相互作用相关。

关键词：结直肠癌细胞毒性t细胞趋化因子肠黏膜微生物

体外诱生PR1特异性细胞毒性t细胞的实验研究

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体外诱生PR1特异性细胞毒性T细胞的实验研究

作者：刘静扬州大学

学位级别：硕士

慢性髓细胞性白血病（Chronic myeloid leukemia, CML）是一种起源于造血干细胞的恶性增生性疾病,目前仍缺乏有效的治疗方法,复发的根源是白血病微小残余病变（minimal residue disease, MRD）。利用t细胞进行过继性免疫治疗,是治疗病... 详细信息

慢性髓细胞性白血病（Chronic myeloid leukemia, CML）是一种起源于造血干细胞的恶性增生性疾病,目前仍缺乏有效的治疗方法,复发的根源是白血病微小残余病变（minimal residue disease, MRD）。利用t细胞进行过继性免疫治疗,是治疗病毒感染性疾病和肿瘤的理想方法,但是用于治疗的t细胞的特异性、亲和性、分化水平和数量等限制了其应用,如何获得特异、高效、一定数量的t细胞是目前亟待解决的问题。采用t细胞受体（t cell receptor tCR）基因转染的方法,将特异性高亲和力tCR转移到受体的t细胞中,可以特异性杀伤受体体内的肿瘤细胞。蛋白酶3是与人中性粒细胞颗粒形成相关的分化抗原,髓性白血病患者体内原始低分化的髓系白血病细胞持续高表达蛋白酶3,提示蛋白酶3是髓性白血病相关性抗原。PR1为来自蛋白酶3的HLA-A2限制性的9肽,其序列VLQELNVtV。PR1限制性CtL细胞可杀伤髓性白血病细胞,而且其杀伤毒性与白血病细胞内蛋白酶3的表达量明显相关,但对正常骨髓细胞无毒性。本研究的目的是制备可溶性HLA-A*0201/PR1四聚体,优化PR1肽刺激产生的高亲和力t细胞条件,联合四聚体技术和流式细胞技术筛选PR1特异性高亲和力t细胞,为慢性髓细胞性白血病的过继治疗清除白血病微小残余病变奠定基础。一、可溶性HLA-A*0201/PR1四聚体的制备本室在前期工作中已成功构建重链pQE31-HLA-A2-BSP和轻链pQE31-β2m,二者均可以在M15菌株中大量表达。将诱导、洗涤包涵体获得的重链、轻链蛋白与PR1肽以一定的比例加入折叠缓冲液中进行稀释复性,形成HLA-A*0201/肽复合物单体。用HLA-I构象特异性的W6/32单抗为一抗,间接ELISA法检测复性前后HLA-A*0201/抗原肽单体。然后,将复性后单体经Sephacryl-S300柱层析纯化,利用分子筛原理收集HLA-A*0201/肽复合物单体所在峰。以BirA酶作用于融合在HLA-A*0201蛋白C端BSP中的赖氨酸残基,使HLA-A*0201/肽复合物单体生物素化,再次经Sephacryl-S300柱层析纯化。生物素化的HLA-A*0201/肽复合物单体与荧光素（phycoerythrin或allophycocyanine）标记的链霉亲和素（含4个生物素化位点）按4∶1的比例结合,形成可溶性HLA-A*0201/PR1四聚体。本实验成功地获得了可溶性HLA-A*0201/PR1四聚体,为标记抗原特异性t细胞,进一步筛选研究CML相关的PR1特异性t细胞提供重要工具。二、体外诱生PR1特异性细胞毒性t细胞的研究首先,我们制备加载PR1抗原肽的t2细胞作为刺激细胞,体外刺激人外周血淋巴细胞（PBL）,用可溶性HLA-A*0201/PR1四聚体检测PR1特异性细胞毒性t细胞,结果表明HLA-A*0201 /PR1四聚体具有PR1肽表位特异性,可以采用流式细胞分析技术体外分析或分选PR1特异性细胞毒t细胞。然后,用加载不同浓度PR1肽的t2细胞刺激HLA-A*0201阳性的正常人外周血淋巴细胞,进一步优化加载抗原量、刺激时间、刺激细胞与反应细胞比例等。实验发现当PR1肽加载浓度为0.5μmol/L和5μmol/L、刺激时间为21天、刺激细胞与反应细胞比例为1:10时,所获得的PR1特异性高亲和力CtLs比较多。用LDH释放实验对诱生PR1特异性细胞毒t细胞的功能进行初步验证,结果发现经体外诱生PBL特异性杀伤加载PR1肽t2靶细胞的能力明显增强,表明体外诱生的PR1特异性细胞毒t细胞具有特异性细胞毒杀伤能力。本实验为慢性髓细胞性白血病过继性免疫治疗奠定了基础。

关键词：慢性髓细胞性白血病 HLA 四聚体 PR1肽细胞毒性t细胞

乙型肝炎病毒特异性细胞毒性t淋巴细胞临床表达特点及其受体分子特性分析

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乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞临床表达特点及其受体分子...

作者：丁宁中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

1.研究背景与目的我国是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染的高发区域,有约50%的人口曾经感染过HBV,目前仍约9300万慢性HBV感染者。HBV可引起不同的临床结果,包括有隐匿感染、急性乙肝、慢性乙肝、肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌等... 详细信息

1.研究背景与目的我国是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染的高发区域,有约50%的人口曾经感染过HBV,目前仍约9300万慢性HBV感染者。HBV可引起不同的临床结果,包括有隐匿感染、急性乙肝、慢性乙肝、肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌等,严重危害人类健康。至今,乙型肝炎的发病机制仍未完全阐明。大量研究结果表明HBV感染的清除和病理损伤主要决定于机体的免疫应答状态,感染的病毒通过激发免疫反应间接引起肝细胞损害。在针对HBV的免疫应答反应中,特异性细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxic t lymphocytes,CtL)在清除病毒和决定疾病转归中发挥重要作用。在急性乙型肝炎患者体内存在较强的多克隆CtL反应,HBV很快能清除,而慢性乙型肝炎患者的外周血中往往CtL反应很弱或针对的病毒抗原表位单一,导致不能完全清除HBV;同时,CtL反应也与免疫病理损伤的程度和类型相关。引起这种HBV特异性CtL反应差异的机制目前尚不完全清楚,可能与机体(如炎性因子基因多态性、HLA亚型及CtL细胞本身)和病毒(如病毒变异和病毒载量)有关。CtL的特异性取决于细胞表面的t细胞受体(t cell receptor, tCR)而tCR的特性主要决定于α和β链可变(V区)区的分子组成,因此,揭示特异性CtL的tCR分子的组成特点对深入理解HBV免疫应答反应机制十分重要。本研究从分析乙型肝炎患者在疾病进展不同阶段的外周血CtL表达频率入手,进而分析乙型肝炎患者HBV抗原表位特异性CD8+t淋巴细胞tCRα和β链的取用特点,并找到可配对的α和β链基因,构建到特异性质粒中,在特定细胞中人工表达tCR分子,为进一步研究CtL的功能,帮助阐明乙型肝炎患者特异性细胞免疫应答的特点及其分子机制和乙型肝炎的免疫治疗提供帮助。 2.材料与方法 (1)研究对象为2008年1月至2010年12月在我们医院(解放军第302医院)住院的40例急性乙型肝炎患者和40例慢性乙型肝炎患者,另有15例名健康志愿者作为正常人对照。诊断标准参照2000年9月(西安)全国会议修订的《病毒性肝炎防治方案》标准,排除甲型肝炎、丙型肝炎戊型肝炎及药物、自身免疫因素等重叠引起肝功损害的因素。 (2)采集40例急性乙型肝炎患者、40例慢性乙型肝炎患者和15例正常人血样进行HLA-A2检测。HLA-A2阳性的患者及正常人(18例急性乙肝患者、18例慢性乙肝患者、6例正常人)均提取外周血单个核细胞(其中急性乙肝患者取急性期和恢复期两份血样),另选取6例HLA-A2阴性的急性乙型肝炎患者亦提取外周血单个核细胞。经CD3、CD8和HBV多肽抗原(HBsAg183-191, HBsAg335-343特异性五聚体荧光染色,分析特异性CD8t细胞频率。 (3)急性乙肝患者中18例为HLA-A2阳性,取患者血样提取基因组DNA扩增HLA-A基因座基因,通过胶回收后测序,通过DNA序列测定确定HLA-A2亚型。患者的HBV DNA载量、HBV抗原抗体5项和生化检测解放军第302医院临床检验医学中心完成。 (4)HLA-A2阳性急性乙肝患者中,取6例患者PBMC,用HBsAg335-343表位多肽诱导培养3-4周,用磁珠分选出CD8 t细胞后再用流式细胞术分选HBV特异性CD8 t细胞,经IL-2/CD3抗体/CD28抗体扩增后提取细胞mRNA,用cDNA 5’末端快速扩增技术(5’RACE)获取tCR分子α链和β链全长可变区基因片段并进行克隆和测序,每个样本的克隆测序数≥50个。通过Vector NtI等软件和IMGt/PhyloGene网站对所获序列结果进行分析。确定tCRα链、p链基因家族并比较CDR3区序列特点。 (5)确定构成tCR分子的α链、β链分子配对,应用cDNA 5’末端快速扩增技术(5’RACE)获取两个分子的5’端,cDNA 3’末端快速扩增技术(3’RACE)获取分子的3’端,然后应用OVER-LAP PCR构建全长α链、β链分子,分别导入表达质粒SAMEN CMV/SRa中,经过包装细胞包装后,取病毒上清感染Jakurt细胞,筛选出表达特异性tCR分子的细胞,为CtL功能试验做准备。 3.研究结果 (1)18例HLA-A2阳性急性乙肝患者急性期HBsAg183-191的特异性CtL频率为0.23%±0.18%,HBsAg335-343为0.49%±0.31%,较HLA-A2阳性的慢性乙肝患者发病极期上述抗原的特异性CtL频率(0.07%±0.03%和0.08%±0.04%)明显升高(PtL。 (2)HBsAg183-191的特异性CtL频率与ALt峰值无显著相关性(r=0.4506,P=0.0528),而HBsAg335-343特异性CtL频率与ALt水平呈正相关(r=

关键词：肝炎病毒乙型细胞毒性t细胞 HLA-A2抗原 t淋巴细胞受体表位

树突状细胞诱导的特异性细胞毒性t淋巴细胞抗甲状腺髓样癌的体外实验研究

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树突状细胞诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞抗甲状腺髓样癌的体外...

作者：胡丹丹天津医科大学

学位级别：硕士

目的：利用人体外周血来源的树突状细胞(dendritic cells, DCs)强大的抗原提呈能力和激活t细胞尤其是初始型t细胞的能力,探讨转染人甲状腺髓样癌细胞系总RNA的DC疫苗体外诱导特异性细胞毒性t淋巴细胞(CtL)增殖和杀伤靶细胞的效率。方... 详细信息

目的：利用人体外周血来源的树突状细胞(dendritic cells, DCs)强大的抗原提呈能力和激活t细胞尤其是初始型t细胞的能力,探讨转染人甲状腺髓样癌细胞系总RNA的DC疫苗体外诱导特异性细胞毒性t淋巴细胞(CtL)增殖和杀伤靶细胞的效率。方法：采集正常志愿者抗凝的新鲜外周血,应用淋巴细胞分离液(Ficoll)用贴壁的方法分离单个核细胞(PBMC),经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4),体外诱导培养获取未成熟DC(imDC)。从甲状腺髓样癌细胞系提取总RNA后转染DC,流式细胞仪检测转染前后DC表面CD83, CD86, CD11c, CD14及HLA-DR表型的变化;同时经重组人白细胞介素2(rhIL-2)诱导扩增t淋巴细胞,转染后的DC与自体t淋巴细胞混合,刺激t淋巴细胞得到肿瘤抗原特异的细胞毒性t淋巴细胞(CtL),流式细胞仪检测刺激前后CD3/CD4, CD3/CD8的变化。Mtt法检测致敏DC对t淋巴细胞增殖的影响和致敏DC活化的特异性CtL对甲状腺髓样癌细胞系总RNA转染的DC的体外杀伤效率。结果：提取甲状腺髓样癌细胞系总RNA,电泳显示完整未降解。体外诱导人外周血单个核细胞,流式细胞仪检测显示：未加脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)培养的DC低表达CD83, CD86, CD11c,为未成熟DC,符合转染要求;加LPS或甲状腺髓样癌细胞系总RNA培养的DC,高表达CD83, CD86, CD11c,为成熟DC,其形态典型、具备强烈刺激增殖的能力。转染后DC刺激自体t淋巴细胞5天后,CD8+的CtL比例上升(P细胞系总RNA致敏DC刺激t淋巴细胞转化为CtL后,Mtt法检测其对新转染甲状腺髓样癌细胞系总RNA的DC细胞的杀伤效应,结果表明：随着效靶比增加,其杀伤效应亦显著增加(P细胞系总RNA转染DC后,可促进其成熟,并有效刺激t淋巴细胞增殖为具有杀伤能力的抗原特异性CtL,进而发挥其杀伤癌细胞的作用,为甲状腺髓样癌RNA疫苗的体内试验提供了依据。

关键词：树突细胞 RNA疫苗甲状腺髓样癌细胞毒性t细胞生物治疗

肝癌细胞凋亡-抗HBx/抗CD3双功能抗体介导细胞毒性t细胞对靶细胞的杀伤

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中国肿瘤生物治疗杂志 1995年第4期2卷 261-262页

作者：廖勇汤钊猷刘康达叶胜龙陈洁薛群孙瑞霞上海医科大学肝癌研究所上海200032

研究发现，针对效应细胞毒性t淋巴细胞[CtL]表面受体[tCB／CD3复合物]与肿瘤相关抗原的双功能抗体能有效地介导CtL对靶肿瘤细胞的杀伤。为此，我们通过细胞融合法经流式细胞仪[FACS]无菌分选建立了抗HBx／抗CD3二次杂交瘤，应用该二次... 详细信息

研究发现，针对效应细胞毒性t淋巴细胞[CtL]表面受体[tCB／CD3复合物]与肿瘤相关抗原的双功能抗体能有效地介导CtL对靶肿瘤细胞的杀伤。为此，我们通过细胞融合法经流式细胞仪[FACS]无菌分选建立了抗HBx／抗CD3二次杂交瘤，应用该二次杂交瘤所分泌的双特性单克隆抗体[BsAb]介导CtL在LtNM4裸鼠人肝癌模型进行了实验性治疗研究。

关键词： CD3 双功能抗体抗C 介导 HB 肝癌细胞凋亡细胞毒性t细胞细胞融合表面受体靶细胞