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新西兰雌-雄兔皮肤移植模型体内细胞毒性实验

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中国组织工程研究与临床康复 2012年第5期16卷 809-812页

作者：梁伟潮蒋泽生汪燕钟利民潘明新南方医科大学附属珠江医院肝胆二科广东省广州市515282

背景:建立一种有效的评估模式来监测移植后受者免疫状态是当前的难点。目的:建立兔体内细胞毒性实验方法,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况。方法:建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,另设未作移植的雌、雄兔为对照组... 详细信息

背景:建立一种有效的评估模式来监测移植后受者免疫状态是当前的难点。目的:建立兔体内细胞毒性实验方法,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况。方法:建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,另设未作移植的雌、雄兔为对照组。取雌兔及雄兔脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羟基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色后制备1:1混合细胞悬液。雄兔输注混合细胞后分别于1,2,4,8h抽取外周血,流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:雌-雄兔皮肤移植排斥模型在皮肤移植2周后可建立,混合细胞悬液输注后在模型组和对照组外周血中的比例变化不同,雄兔输注混合细胞后1,2,4,8h的杀伤率模型组高于对照组,差异有显著性意义(P细胞毒性实验可用于免疫状态监测,可以直观地反映皮肤移植模型的体内特异性免疫环境及移植物所受的免疫攻击强度。

关键词：细胞毒性实验移植排斥免疫监测流式细胞术皮肤移植

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稀土粉尘的细胞毒性实验研究

中华劳动卫生职业病杂志 1994年第6期12卷 345-346页

作者：涂英娥扬吉增胡招娣张天园高孟清江西省劳动卫生职业病防治研究所

稀土粉尘的细胞毒性实验研究涂英娥，扬吉增，胡招娣，张天园，高孟清采用体外细胞培养技术，对重、中、轻３种类型稀土粉尘的细胞毒性进行了研究。一、材料和方法１．粉尘：选用江西省赣南３个分别生产重、中、轻稀土的稀土矿。各取原... 详细信息

稀土粉尘的细胞毒性实验研究涂英娥，扬吉增，胡招娣，张天园，高孟清采用体外细胞培养技术，对重、中、轻３种类型稀土粉尘的细胞毒性进行了研究。一、材料和方法１．粉尘：选用江西省赣南３个分别生产重、中、轻稀土的稀土矿。各取原矿和成品两类样品，原矿直接浮选，成...

关键词：稀土粉尘细胞毒性实验

纯钛种植体表面不同化学组成的TiO_2涂层细胞毒性实验研究

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中国美容医学 2011年第9期20卷 1403-1405页

作者：张丽成炜刘晓华济南市口腔医院义齿加工中心山东济南250001 济南市口腔医院修复科山东济南250001

目的:对纯钛表面不同化学组成的Ti O2涂层可能存在的潜在细胞毒性进行研究,为该材料应用于临床提供实验依据。方法:参照GB/T16886和国家医药管理局颁布的行业标准YY/T 0127的评价标准和要求,采用规定的L929细胞,经材料浸提液与细胞共培... 详细信息

目的:对纯钛表面不同化学组成的Ti O2涂层可能存在的潜在细胞毒性进行研究,为该材料应用于临床提供实验依据。方法:参照GB/T16886和国家医药管理局颁布的行业标准YY/T 0127的评价标准和要求,采用规定的L929细胞,经材料浸提液与细胞共培养方式对纯钛表面不同化学组成的Ti O2涂层进行细胞毒性测试,采用MTT比色法,测定各组1、3、5天L929细胞的相对增殖率来判别材料对细胞的毒性程度,并进行统计学分析比较。结果:各实验组与阴性对照组两两比较对L929细胞的增殖差异均无显著性意义(P>0.05);各实验组与阳性对照组进行两两比较差异有显著性意义(P细胞毒性为1级。结论:该Ti O2涂层与L929细胞相容性好,参照GB/T16886和YY/T 0127标准属于安全范围。

关键词：纯钛种植体微弧氧化细胞毒性实验

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血管内速溶支架的细胞毒性和植入实验研究

医疗卫生装备 2012年第5期33卷 4-6页

作者：郝永玉梁向党孙赓刘自豪刘诗滦宋垚垚蔡宏飞解放军总医院骨科医院北京100853 解放军252医院河北保定071000

目的:检测一种新型的血管内速溶支架的生物相容性。方法:分别对血管内速溶支架进行细胞毒性实验和皮下植入实验。细胞毒性实验:速溶支架粉末与L929细胞接触培养,倒置显微镜观察形态,采用MTT(四唑盐)比色法量化细胞毒性,并进行毒性分级... 详细信息

目的:检测一种新型的血管内速溶支架的生物相容性。方法:分别对血管内速溶支架进行细胞毒性实验和皮下植入实验。细胞毒性实验:速溶支架粉末与L929细胞接触培养,倒置显微镜观察形态,采用MTT(四唑盐)比色法量化细胞毒性,并进行毒性分级。皮下植入实验:在12只新西兰白兔右侧背部皮下植入血管内速溶支架,左侧作为空白对照,分别于植于支架后3、7、14、28 d,肉眼和镜下观察植入点炎症反应情况。结果:血管内速溶支架细胞毒性为0级。皮下植入后无炎症反应,局部组织无刺激。结论:该课题组黏合吻合血管用血管内速溶支架材料满足ISO 10993要求,具有良好的生物相容性。

关键词：血管吻合速溶支架细胞毒性实验皮下植入实验

新型脂质创面敷料透皮液和溶出液中三溴苯酚及铋元素的分析测定及其细胞毒性研究

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材料导报 2020年第S2期34卷 490-495页

作者：李蓉蓉王缘刘勇刘哲郑燕胡修元陈海波马凤森浙江工业大学药学院生物制剂与材料实验室杭州310014 振德医疗用品股份有限公司绍兴312035 浙江省医疗器械检验研究院杭州310018

本文通过体外实验(溶出、透皮)、细胞毒性实验建立脂质创面敷料的安全性评价。建立基于电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)和气相色谱质谱联用(GC-MS)测量溶出液、透皮液中新型脂质创面敷料残留物(三溴苯酚和铋)的分析方法。同时,使用四唑盐(... 详细信息

本文通过体外实验(溶出、透皮)、细胞毒性实验建立脂质创面敷料的安全性评价。建立基于电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)和气相色谱质谱联用(GC-MS)测量溶出液、透皮液中新型脂质创面敷料残留物(三溴苯酚和铋)的分析方法。同时,使用四唑盐(MTT)比色法判断新型脂质创面敷料的材料毒性。结果表明,溶出液在2天、4天、7天内三溴苯酚的单位面积溶出量分别为(6.91±1.34)μg/cm^2、(6.71±0.81)μg/cm^2、(6.41±1.40)μg/cm^2,铋的单位面积溶出量分别为(0.0086±0.0005)ng/cm^2、(0.0097±0.0018)ng/cm^2、(0.0556±0.0068)ng/cm^2。透皮液在1天、2天内三溴苯酚的单位面积透过量分别为(0.16±0.01)μg/cm^2、(1.11±0.01)μg/cm^2,铋的单位面积透过量分别为(0.0036±0.0001)ng/cm^2、(0.0117±0.0015)ng/cm^2。细胞毒性实验结果证明本实验所用的脂质创面敷料对Hacat、HSF两种细胞毒性较小,等级为0或1。本实验所用新型脂质创面敷料的残留物在溶出液和透皮液中含量较低,细胞毒性等级较低,足以说明脂质创面敷料的安全性。

关键词：脂质创面敷料电感耦合等离子体质谱(ICP-MS) 气相色谱质谱联用(GC-MS) 细胞毒性实验

白介素-2靶向5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体的制备及细胞毒性研究

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中国现代应用药学 2011年第9期28卷 842-845页

作者：陈莹吴镁春潘黎军王驰重庆医科大学药学院重庆400016

目的制备了白介素-2(IL-2)靶向5-氟尿苷棕榈酸酯(5-FURP)脂质体,并进行了体外细胞毒性,初步考察其对IL-2受体高表达的肿瘤细胞的靶向作用。方法采用逆相蒸发法制备5-FURP脂质体,通过交联剂将IL-2连接到脂质体的表面,得IL-2靶向5-FURP脂... 详细信息

目的制备了白介素-2(IL-2)靶向5-氟尿苷棕榈酸酯(5-FURP)脂质体,并进行了体外细胞毒性,初步考察其对IL-2受体高表达的肿瘤细胞的靶向作用。方法采用逆相蒸发法制备5-FURP脂质体,通过交联剂将IL-2连接到脂质体的表面,得IL-2靶向5-FURP脂质体(IL-2-5FURP-L);UV法测定包封率;用考马斯亮蓝结合法测定IL-2与脂质体的结合率;用MTT法测定脂质体对IL-2受体高表达的皮肤T细胞淋巴瘤Hut-102细胞的生长抑制作用。结果 IL-2-5-FURP-L的粒径为180 nm;药物平均包封率为91.3%;IL-2的结合率为56.0%;在pH7.4的释放介质中,脂质体具有缓释作用;MTT实验结果显示,IL-2-5-FURP-L呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞的生长,72 h细胞毒性试验表明IL-2-5-FURP-L对Hut-102的杀伤作用(IC50=1.04μg.mL-1)明显优于5-FURP-L(IC50=6.11μg.mL-1)及5-FURP(IC50=7.35μg.mL-1)。结论 IL-2修饰的载药脂质体具有明显的抑瘤作用和主动靶向作用。

关键词：白介素-2 5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体主动靶向细胞毒性实验

3D打印PLLA/HA复合组织工程骨支架及性能表征

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燕山大学学报 2022年第2期46卷 116-122页

作者：任泽宇姜宏石永芳新疆大学机械工程学院新疆乌鲁木齐830047 新疆医科大学医学工程技术学院新疆乌鲁木齐830017

为了解决羟基磷灰石(HA)骨支架降解难的问题,本研究通过在HA骨支架中加入具有良好降解性能的聚左旋乳酸(PLLA)来调节其降解速度。采用3D打印挤出成型设备制备出PLLA/HA复合多孔骨支架,探究不同PLLA质量分数下复合组织工程骨支架抗压强... 详细信息

为了解决羟基磷灰石(HA)骨支架降解难的问题,本研究通过在HA骨支架中加入具有良好降解性能的聚左旋乳酸(PLLA)来调节其降解速度。采用3D打印挤出成型设备制备出PLLA/HA复合多孔骨支架,探究不同PLLA质量分数下复合组织工程骨支架抗压强度、亲水性、降解率以及细胞毒性的变化。实验结果表明:五组不同材料配比的复合骨支架中,PLLA质量分数为50%的支架亲水性及抗压强度最好,且抗压强度大于人体松质骨最低承载要求的2.5 MPa。体外模拟降解10周后,骨支架的降解失重率随PLLA质量分数的提高而加快,降解液的pH值为7.3~7.5,呈弱碱性;体外细胞毒性实验中细胞生长良好。表明通过改变骨支架中PLLA的质量分数,能够实现对支架降解速率的调节,当骨支架中PLLA质量分数为50%时,支架降解速率最快,且机械性能和生物安全性能良好,对改性组织工程骨支架的降解性能调节研究具有借鉴意义。

关键词： 3D打印组织工程骨支架聚左旋乳酸纳米羟基磷灰石降解速率细胞毒性实验

新西兰雌—雄兔皮肤移植模型供体特异性体内细胞毒性试验方法的建立

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新西兰雌—雄兔皮肤移植模型供体特异性体内细胞毒性试验方法的建...

作者：梁伟潮南方医科大学

学位级别：硕士

[研究背景] 器官移植后必需应用免疫抑制剂防止急性排斥反应的发生,免疫抑制剂通过抑制T细胞和B细胞等靶细胞的细胞增殖、细胞因子合成而起作用。但是目前仍然无法区分移植抗原引起的免疫排斥反应和病毒细菌感染引起的免疫反应。理想的... 详细信息

[研究背景] 器官移植后必需应用免疫抑制剂防止急性排斥反应的发生,免疫抑制剂通过抑制T细胞和B细胞等靶细胞的细胞增殖、细胞因子合成而起作用。但是目前仍然无法区分移植抗原引起的免疫排斥反应和病毒细菌感染引起的免疫反应。理想的免疫抑制治疗应该在免疫抑制和保持免疫力间取得平衡,因此对于临床医生来说移植患者管理是一件很困难的事。保存受体免疫力,尽可能减小免疫抑制剂用量或诱导免疫耐受一直是移植免疫学家的主要目标,这方面虽然也取得了一些令人兴奋的成果,但是诱导耐受仍然有大量的工作要做,研究诱导免疫耐受方法,尽可能减小免疫抑制的用量,研究检测免疫耐受及免疫力的免疫学方法将是今后几年器官移植所面临的最重要的挑战。可靠的免疫状态指标可以为免疫抑制剂的使用提供依据,使抑制剂不仅可以根据排斥反应的程度或耐受情况使用,还可以根据患者的易感性规范化用药,由于长期免疫抑制剂治疗所引起的的高发病率和高死亡率,高度期望规范化用药能够实现。但是,尽管通过血液标本或移植物病理分析检测免疫功能已经可以部分了解宿主抗移植物排斥反应,包括了解浸润细胞的表型及功能,T细胞性质的改变、细胞因子及抗体的合成情况等,但是仍然没有一种可靠的特异的排斥反应检测方法。目前临床常用受体免疫状态的监测的方式仍然是临床症状评估结合移植物活检。但是,活组织病理检查对移植物和宿主均是一种损伤性检查,有其固有的局限性。现在有学者开始供体特异性体内细胞毒性试验的研究,用带有移植物复合抗原的供体细胞检测受体的免疫杀伤强度,供体细胞在受体内受到的不仅是毒性淋巴细胞的攻击,而且同时要受到抗体、补体、毒性淋巴细胞的多重攻击,因此对移植复合抗原的定量测试不但能反映特异性CTL的活性,而且能全面的反映受体对供体的特异性免疫状态。本课题设计了一种简单的方法,在新西兰白兔上开展供体特异性体内细胞毒性试验,探索兔体内细胞毒性试验方法建立的技术参数,研究体内细胞毒性试验能否检测出受体的免疫排斥状况。用CFSE标记供体脾细胞,流式细胞仪检测供体细胞在受体内遭受排斥反应过程,同时设置受体脾细胞作为内参照。标记的脾细胞悬液输注给不同的受体,输注后不同时间点采血进行流式细胞分析。我们发现外周血中标记的受体细胞能在8小时内被流式细胞仪检测得到,而不同的主要和次要组织相容性抗原的供体细胞在试验中消失与皮肤移植后排斥动力学相一致。 [目的] 建立新西兰白兔供体特异性体内细胞毒性试验方法,探索细胞毒性试验检测的技术参数、羟基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况,为供体特异性体内细胞毒性试验的临床应用提供新的依据。 [方法] 取4-6月龄清洁级雌、雄新西兰白兔各5只,雌、雄兔各根据体重排序,根据序号雌雄兔配对,雌兔为供体,雄兔为受体,于每只雌兔背部剪下约4cm×2cm的皮肤一块,于雄兔背部移植雌兔皮肤,并用3/0无创伤缝线固定皮缘,移植后2周,移植皮肤完全脱落,建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,为模型组。另取未作移植的雌、雄新西兰白兔各5只,雌、雄兔各根据体重排序,根据序号雌雄兔配对,为对照组。分别于模型组及对照组配对取雌兔及雄兔脾脏,放入Hank’s液中,200目不锈钢网研磨法制备脾细胞悬液,7.5g/L氯化铵裂解红细胞,0.01mol/L PBS稀释制备脾细胞单细胞悬液。雄性脾细胞用0.24μm CFSE染色,雌性脾细胞用高浓度6μm CFSE染色。每对雌、雄兔脾细胞悬液混合,制备1：1混合细胞悬液。细胞混合悬液稀释后,取1滴稀释液和1滴0.5%锥虫蓝溶液混合,静置3min,加至细胞计数板,倒置显微镜下观察,活细胞不着色,死细胞核成蓝色,计数活细胞和死细胞数量,活细胞比例达95%以上(细胞存活率=0.5%锥虫蓝染色阴性细胞/100个细胞/HP×100)。于模型组、对照组雄免输注细胞悬液,注射混合细胞总数为1×109个左右。雄兔输注混合细胞后分别于1,2,4,8h抽取外周血,流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,计算供体特异性细胞杀伤率(R)=1-donor cells/recipient cells×100%,比较模型组与对照组的供体特异性细胞杀伤率差异。实验数据应用SPSS13.0软件进行统计学分析,所有数据示为x±s,组间杀伤率比较用t检验,P实验动物数量分析模型组及对照组新西兰白兔各10只,每组分别5对雌、雄兔。全部进入结果分析,无脱失。 2.皮肤移植模型观察结果皮肤移植后15d,移植皮肤完全脱落,雌-雄兔皮肤移植排斥模型建立,皮肤病理证实。 3. CFSE染色混合脾细胞悬液集中在淋巴细胞所在的小细胞区,单核细胞区也有一部分阳性细胞,但是染色不均一,选用小淋巴细胞区作为检测门。CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开,在浓度相差25倍时流式图才

关键词：细胞毒性实验移植排斥免疫监测流式细胞术皮肤移植

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硫化氢荧光分子探针的构建及细胞毒性评价

硫化氢荧光分子探针的构建及细胞毒性评价

作者：陈艳梅新乡医学院

学位级别：硕士

背景过去十多年,我们对硫化氢(HS)的研究越来越重视,HS作为一种多信号分子被认为是继NO和CO之后在人体中的第三种气体信号分子,根据文献报道硫化氢在神经系统中的浓度为50-160μM,在血液中为10-100μM,这种反应性硫化物种在维持正常生... 详细信息

背景过去十多年,我们对硫化氢(HS)的研究越来越重视,HS作为一种多信号分子被认为是继NO和CO之后在人体中的第三种气体信号分子,根据文献报道硫化氢在神经系统中的浓度为50-160μM,在血液中为10-100μM,这种反应性硫化物种在维持正常生理活动中扮演着重要的角色。此外非正常水平的硫化氢将会导致各种各样的疾病,例如唐氏综合症,老年痴呆症,肝硬化和糖尿病。因此,开发一种能够快速高效检测HS的荧光分子探针,对于全面了解HS是如何作用于生理和病理的机制对我们来说是至关重要的。目的选择席夫碱和香豆素衍生物作为荧光基团合成一系列用于检测硫化氢的荧光分子探针,通过体外检测方法研究该系列分子探针与生物中重要阴离子(HS,HPO,F,AcO,Cl,Br,I)在生理环境中的相互作用,筛选出灵敏度高,选择性好,且专一性强识别HS的荧光分子探针。通过替换荧光探针的取代基,进一步探讨荧光分子探针对主客体稳定性的影响。除此之外,我们对合成的荧光分子探针进行了细胞毒性的初步评价,最终筛选出作用能力强、选择性好、毒性比较低的荧光分子探针,为体内硫化氢的检测奠定基础。方法1.荧光分子探针的构建:根据CuS沉淀原理选择了带有荧光团的香豆素以及水杨醛苯胺衍生物作为铜配合物的游离配体合成不同的探针分子,除此之外根据硫解机制对2,4-二硝基氟苯进行不同基团的取代合成了一系列探针分子,并培养出晶体结构,通过核磁,质谱,红外等方法对合成的化合物进行结构表征。2.体外硫化氢的检测:利用紫外-可见吸收光谱、荧光发射光谱等方法研究该系列分子探针与生物中重要阴离子(HS,HPO,F,AcO,Cl,Br,I)在生理环境中的相互作用,根据非线性最小二乘法曲线拟合计算主客体作用的结合常数,筛选出能够快速高效且专一性强识别HS的荧光分子探针。通过硫解原理,替换不同的取代基团,进一步探讨荧光分子探针对主客体稳定性的影响。通过检测限和干扰实验测定筛选出灵敏度强,选择性好的荧光分子探针,结合光谱数据和质谱滴定实验进一步探讨了荧光分子探针与硫化氢的作用机理。3.细胞毒性评价:探索荧光分子探针对乳腺癌细胞的特异性结合,并对其细胞毒性做出初步评价,最终筛选出灵敏度高、选择性好、毒性比较低的荧光分子探针,进一步为体内硫化氢的检测奠定基础。结果1.成功合成了荧光分子探针12个,并利用核磁,质谱以及红外等方法对合成的化合物进行结构表征。2.利用荧光发射光谱、紫外-可见吸收光谱和核磁滴定等方法筛选出7个对硫化氢选择性较高,灵敏度较强的荧光分子探针。3.对筛选出的荧光分子探针进行细胞毒性测试,结果表明该系列荧光分子探针对细胞的毒性很小。结论1.成功制备了一系列荧光分子探针,并得到了化合物j的晶体结构。2.筛选出对硫化氢结合能力强,灵敏度高的荧光分子探针a,b,h,i,通过干扰实验也表明了荧光分子探针a,b,h对硫化氢有很高的选择性。荧光分子探针i的比色识别说明了化合物i可应用于硫化氢的“裸眼”定性识别。3.荧光分子探针的毒性分析表明选择席夫碱和香豆素衍生物作为荧光基团对MCF-7细胞都有较小的毒性,以上研究可以为后期荧光分子探针的设计提供一定的理论依据。

关键词：硫化氢荧光分子探针铜配合物苯醚细胞毒性实验