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山姜素对脂多糖诱导的结肠NCM460细胞损伤及对VDR/Nrf2/HO-1通路的作用研究

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现代药物与临床 2023年第6期38卷 1289-1296页

作者：江聪杨保伟田甜海口市中医医院肛肠科海南海口570100

目的研究山姜素对脂多糖诱导的结肠NCM460细胞损伤修复及对维生素D3受体(VDR)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调节作用。方法使用脂多糖建立NCM460细胞损伤模型,分别设置对照组,山姜素低、中、高剂量组及白藜芦醇... 详细信息

目的研究山姜素对脂多糖诱导的结肠NCM460细胞损伤修复及对维生素D3受体(VDR)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调节作用。方法使用脂多糖建立NCM460细胞损伤模型,分别设置对照组,山姜素低、中、高剂量组及白藜芦醇组,山姜素低、中、高剂量组分别加入终浓度为25、50、100μmol/L的山姜素,白藜芦醇组加入终浓度为120μmol/L的白藜芦醇,继续培养72 h后,CCK-8法测定NCM460细胞增殖率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定NCM460细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-17、IL-8、IL-6、IL-1β及NCM460细胞匀浆液超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平,流式细胞术测定NCM460细胞凋亡率,使用试剂盒测定NCM460细胞线粒体膜电位水平,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定NCM460细胞VDR、Nrf2及HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blotting)测定NCM460细胞VDR、Nrf2及HO-1蛋白水平。结果与模型组比较,山姜素各剂量组及白藜芦醇组NCM460细胞增殖率、SOD水平、线粒体膜电位、VDR、Nrf2及HO-1 mRNA及蛋白水平显著升高(P细胞上清液TNF-α、IL-17、IL-8、IL-6、IL-1β水平、细胞匀浆液NO及MDA水平、NCM460细胞凋亡率显著降低(P细胞损伤后炎症因子的释放及细胞凋亡,恢复NCM460细胞氧化损伤的修复能力及线粒体膜电位改变,促进NCM460细胞增殖,其机制可能与调节VDR/Nrf2/HO-1通路有关。

关键词：山姜素细胞损伤修复维生素D3受体(VDR)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路肿瘤坏死因子白细胞介素-6

侧柏叶提取物对SOD酶活力修复作用及抗炎功效

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日用化学工业 2019年第9期49卷 585-589页

作者：唐洁杨海延李利马冬月董婷婷熊丽丹四川大学华西医院化妆品评价中心四川成都610041 四川省化妆品工程技术中心四川成都610041 四川大学华西医院皮肤科四川成都610041 上海辉文生物技术股份有限公司上海200120

为探索侧柏叶提取物对细胞损伤的修复作用及抗炎功效,采用SDS刺激HaCaT细胞和LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型。随后加入侧柏叶提取物,观察其对SDS致HaCaT细胞损伤后的SOD酶活力修复作用及对RAW264.7细胞上清中炎症因子分泌的抑制作用... 详细信息

为探索侧柏叶提取物对细胞损伤的修复作用及抗炎功效,采用SDS刺激HaCaT细胞和LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型。随后加入侧柏叶提取物,观察其对SDS致HaCaT细胞损伤后的SOD酶活力修复作用及对RAW264.7细胞上清中炎症因子分泌的抑制作用。结果表明,SDS刺激HaCaT细胞后,能够对细胞造成一定损伤,并致使细胞内SOD酶活力降低,随后加入侧柏叶提取物,其对SOD酶活力有修复作用,最高修复率为85.6%,表明侧柏叶提取物具有修复SOD酶活力功效。同时LPS诱导RAW264.7细胞,构建炎症模型成功后,随后加入侧柏叶提取物,其对RAW264.7细胞上清NO含量具有降低作用,同时,能够抑制IL-6,IL-1β和TNF-α炎症因子的释放,表明侧柏叶提取物具有抗炎功效。

关键词：侧柏叶提取物 SOD酶细胞损伤修复炎症因子抗炎

应用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠海马神经元中Purα基因可减弱神经元对DNA损伤的修复作用

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中国细胞生物学学报 2018年第5期40卷 706-716页

作者：张冰莹郭姗姗石晓光何文欣刘昆梅孙涛崔建奇宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地银川750004 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004

人转录活化因子Purα是体内重要的转录因子,在体内多个环节中都发挥着重要的作用,尤其是在神经系统中,它与神经元的发育,突触形成都有很密切的关系。该文通过构建Purα基因敲除的小鼠海马神经元细胞系来观察其在DNA损伤修复中的作用。... 详细信息

人转录活化因子Purα是体内重要的转录因子,在体内多个环节中都发挥着重要的作用,尤其是在神经系统中,它与神经元的发育,突触形成都有很密切的关系。该文通过构建Purα基因敲除的小鼠海马神经元细胞系来观察其在DNA损伤修复中的作用。根据目的基因靶向删除外显子的位置设计相应的sg RNA序列,合成相应的寡核苷酸后克隆在p Sp Cas9(BB)-2A-Puro(PX459)V2.0质粒载体相应位点上,从而构建能对Purα基因进行敲除的CRISPR/Cas9质粒,将构建好的质粒通过酶切和测序进行鉴定,将经过鉴定证实相位正确及在有sg RNA序列插入的阳性质粒转染到小鼠海马神经元(HT22)细胞中,加入嘌呤霉素进行抗性筛选,保留正常生长的细胞进行培养,从而建立能稳定地进行Purα基因敲除的细胞系。通过Real-time PCR和Western blot技术分别在转录和翻译水平上检测Purα基因的表达情况,从而来判定Purα基因的敲除效率;将所构建的Purα基因敲除的细胞用羟基脲(HU)进行处理来建立细胞DNA损伤的实验模型,通过Western blot、脉冲电场反转凝胶电泳实验及细胞毒性实验观察Purα在DNA损伤修复中的作用。实验结果证实,所插入片段相位正确。通过TA克隆测序和T7E1酶切证实所构建的质粒具有良好的CRISPR/Cas9活性,可导致基因组碱基发生突变,Real-time PCR和Western blot实验结果证实,Purα基因敲除组的Purα基因表达明显降低。Purα基因敲除后,细胞对HU引起的DNA损伤极为敏感,说明Purα在维持基因组DNA的完整性方面发挥着重要的作用,是细胞中一种不可或缺的蛋白质。该实验结果还提示,利用CRISPR/Cs9技术可以有效地对目的基因进行敲除,同时由于该质粒携带有嘌呤霉素抗性基因,利用这一特点,可以方便地建立稳定的细胞系,该细胞系可用作研究Purα基因在神经元中的生物学功能的细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9 Purα 基因敲除羟基脲细胞损伤修复

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体细胞重编程的转化医学研究

转化医学研究（电子版） 2014年第2期4卷 38-67页

作者：李艳华林杰孙长凯杨晓寒王敏刘谟震万超刘启贵尹安春殷嘉辉张兵兵周平冯斌张方乙林永忠杜建玲吕明慧郑铁铮刘思宇洪浩孟醒夏丹丹孙阳魏盼蔡楠李红晔吴爽赵慧李彧媛高长玉李巍戴冶王君德赵辉谭小新门莉莉马辉徐军胡增春王玲王宏孙品郭慧芳宋桂荣刘辉单宝帅韩璐梁琳琅王晓晨汪丹谌桂花陈建停孙香友薛君王智琦王婧张永青蔡东风张桂平栾国明王建莉范明曹雪涛大连医科大学脑疾病研究所辽宁省脑疾病重点实验室统计分析中心现代教育技术部大连116027 大连市甘井子医院大连116033 沈阳军区总医院门诊部骨外科内分泌科医务部沈阳110015 中国医学科学院医学信息研究所信息分析与情报方法研究室北京100020 大连医科大学附属一院神经内科骨外科护理部内分泌科肿瘤科耳鼻喉科大连116027 解放军大连403医院医务处心血管内科大连116000 同济大学图书馆上海200092 大连医科大学生物技术系大连116027 大连医科大学附属二院神经内科体检中心药剂科神经外科大连116023 复旦大学2012医学实验班上海200433 解放军大连210医院神经内科大连116000 沈阳格微软件有限责任公司沈阳110034 首都医科大学三博脑科医院北京100093 浙江大学免疫学研究所杭州310027 北京军事医学科学院基础医学研究所神经生理学研究室北京100850 中国医学科学院北京100073

脑血管疾病、痴呆、糖尿病、恶性肿瘤、骨退行性病等重大临床疾患的发病率、患病率、病死率和致残率居高不下,细胞保护与细胞损伤修复药物、策略和方法的转化研发、应用与推广一直停滞不前或进展过缓应是其重要原因之一。本研究通过医... 详细信息

脑血管疾病、痴呆、糖尿病、恶性肿瘤、骨退行性病等重大临床疾患的发病率、患病率、病死率和致残率居高不下,细胞保护与细胞损伤修复药物、策略和方法的转化研发、应用与推广一直停滞不前或进展过缓应是其重要原因之一。本研究通过医学、生物学、数据库构建、程序编写、软件研制、统计分析及管理工程等多个领域专业人员的通力合作,对2012年诺贝尔生理学或医学奖两位获奖者关于"成熟细胞可以被重编程而多能化"的原始研究及其被引用的大规模复杂信息数据做整体定量对比和局部关联解析,探讨体细胞重编程研究的临床应用前景和实现策略,发现两位获奖者原创性研究及其影响在时间、学科、科学和技术等多个层面与角度上差异具有统计学意义,揭示和证明了加强与加快转化医学和转化神经科学研究的时代意义、紧迫需求、重要方向、目标与路径及我国医学科研管理体系因此所面临的重要挑战。

关键词：细胞重编程细胞保护细胞损伤修复转化医学网络药理学大(量)数据解析