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长链非编码RNA GIMA通过抑制ATF4促进代谢压力下肝癌细胞的存活

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中国科学技术大学学报 2021年第2期51卷 117-128页

作者：王红罗晶晶王晨峰张光梅一德杨洋中国科学技术大学生命科学与医学部基础医学学院安徽合肥230027

肿瘤细胞通常处于营养匮乏的微环境中,细胞会产生一系列的适应性反应来维持代谢压力下的存活与增殖.然而长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在这一过程中的调控作用并不清楚.为了探究lncRNA是否参与调控代谢压力下肝癌细胞的存... 详细信息

肿瘤细胞通常处于营养匮乏的微环境中,细胞会产生一系列的适应性反应来维持代谢压力下的存活与增殖.然而长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在这一过程中的调控作用并不清楚.为了探究lncRNA是否参与调控代谢压力下肝癌细胞的存活,转录组测序鉴定出一个受葡萄糖缺乏诱导的lncRNA GIMA(glucose-deprivation induced modulator of ATF4),且GIMA的无糖上调依赖于ATF4的激活.荧光素酶实验(luciferase assay)和染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)表明GIMA是ATF4的转录靶基因.进一步研究发现,GIMA通过抑制ATF4的表达来促进葡萄糖缺乏条件下肝癌细胞的存活.以上结果暗示了GIMA可能是一个新的肝癌治疗潜在靶点.

关键词：长链非编码RNA GIMA 肝癌葡萄糖缺乏细胞存活

大气细颗粒物暴露干扰心肌细胞存活和炎性反应的主要毒性组分研究

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环境科学学报 2020年第1期40卷 306-314页

作者：薛彬丁国斌苏瑞军晋小婷李卓玉山西大学生物医学研究院太原030006 山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006 中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室北京100085 山西大学生命科学院太原030006

鉴于PM2.5组分呈现多样性和复杂性,其引起心力衰竭的主要毒性组分尚不清楚.由于采样地区、季节和污染源的不同,PM2.5不同组分的占比也会有巨大差异,但不同浓度无法比较其不同组分间的毒性差异.因此,为了揭示大气PM2.5引起心肌毒性作用... 详细信息

鉴于PM2.5组分呈现多样性和复杂性,其引起心力衰竭的主要毒性组分尚不清楚.由于采样地区、季节和污染源的不同,PM2.5不同组分的占比也会有巨大差异,但不同浓度无法比较其不同组分间的毒性差异.因此,为了揭示大气PM2.5引起心肌毒性作用的关键组分,分离复合型PM2.5的3种主要组分(有机组分、金属组分和水溶性组分),综合两种浓度暴露方式,即实际占比浓度和与复合型PM2.5相同的暴露浓度,染毒H9C2大鼠心肌细胞24 h和48 h,选择心肌细胞的细胞存活和炎症反应为主要评价指标,旨在揭示PM2.5对心肌造成毒性损伤的关键性成分.CCK-8法检测存活结果显示,不同组分在实际环境比重下,对心肌细胞存活率没有造成显著影响.相同浓度暴露下,高剂量组分(30μg·cm^-2)引起心肌细胞存活率显著降低,且有机组分毒性大于其他组分.根据细胞活力测定结果,选择低染毒浓度(10μg·cm^-2)暴露细胞,采用qRT-PCR和ELISA试剂盒检测炎症因子变化.与对照组相比,金属组暴露后,炎症因子TNF-α和IL-1β显著升高,而有机组则显著升高TNF-α的含量.结果表明,造成心肌细胞存活毒性和炎症损伤的主要PM2.5组分可能为有机组分和金属组分,而炎性反应对这两种组分的响应存在显著差异.

关键词：大气细颗粒物心肌细胞毒性组分细胞存活炎性反应

PTEN/SOCS3缺失对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞存活和轴突再生的影响

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眼科新进展 2021年第11期41卷 1016-1021页

作者：楚妙熊朝晖赵丽娜李康宁巨朝娟河北医科大学第一医院眼科河北省石家庄市050031

目的探讨磷酸酶-张力蛋白同源物(PTEN)和细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)缺失对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)存活和轴突再生的影响。方法将Thy1-YFP/PTEN^(F/F)SOCS3^(F/F)大鼠作为对照组,玻璃体内注射腺相关病毒(AAV)介导P... 详细信息

目的探讨磷酸酶-张力蛋白同源物(PTEN)和细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)缺失对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)存活和轴突再生的影响。方法将Thy1-YFP/PTEN^(F/F)SOCS3^(F/F)大鼠作为对照组,玻璃体内注射腺相关病毒(AAV)介导PTEN基因缺失的Thy1-YFP/PTEN^(F/F)大鼠为PTEN^(-/-)组;玻璃体内注射AAV介导SOCS3基因缺失的Thy1-YFP/SOCS3^(F/F)大鼠为SOCS3^(-/-)组;玻璃体内注射AAV介导PTEN基因和SOCS3基因均缺失的Thy1-YFP/PTEN^(F/F) SOCS3^(F/F)大鼠为PTEN^(-/-)SOCS3^(-/-)组,每组各20只。HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学形态,免疫荧光染色鉴定各组大鼠RGCs存活情况,流式细胞仪检测各组大鼠RGCs凋亡情况,并对比轴突再生数量;利用Western blot检测各组大鼠RGCs中GFAP和GAP-43的蛋白相对表达水平。结果对照组大鼠视网膜细胞炎症反应明显,细胞间层次结构混乱、连接差,分散性强;PTEN^(-/-)组和SOCS3^(-/-)组大鼠视网膜整体结构较规则,层次较清晰,炎症反应有所减轻;PTEN^(-/-)SOCS3^(-/-)组大鼠视网膜结构清晰,较规则,细胞之间连接紧密,炎症反应明显减轻。PTEN^(-/-)组和SOCS^(-/-)组大鼠RGCs存活率均显著高于对照组(均为P存活率均明显高于PTEN^(-/-)组和SOCS3^(-/-)组(均为P存活和轴突再生具有一定的关系,不仅能够促进RGCs的增殖,抑制其凋亡,还能够促进视神经轴突再生,同时敲减PTEN和SOCS3基因最为显著。

关键词： PTEN/SOCS3缺失视神经损伤视网膜神经节细胞细胞存活轴突再生

中性粒细胞趋化因子3可影响神经干细胞的存活和增殖

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中国组织工程研究 2020年第1期24卷 118-123页

作者：孙耐王大力张君曹金明仇福成刘惠苗李冬顾平华北理工大学附属医院河北省唐山市063000 河北医科大学第一医院神经内二科脑老化与认知神经科学实验室河北省石家庄市050031 河北医科大学第一医院细胞治疗实验室河北省石家庄市050031

背景:课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。目... 详细信息

背景:课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。目的:观察中性粒细胞趋化因子3对新生大鼠海马来源神经干细胞存活和增殖的影响。方法:体外分离培养新生SD大鼠海马神经干细胞,将培养3代的神经干细胞分为对照组和中性粒细胞趋化因子3组,通过MTS法检测细胞存活率,细胞生长曲线及活/死细胞染色观察细胞存活及增殖情况,通过免疫荧光染色法及Real-time PCR检测神经干细胞中Nestin的表达来观察神经干细胞增殖情况。结果与结论:①随着中性粒细胞趋化因子3质量浓度从1μg/L增加至20μg/L,神经干细胞存活率逐渐增加,当质量浓度为10μg/L时,神经干细胞存活率最高且细胞活力最好,再增至20μg/L时,神经干细胞存活率无显著增加;②中性粒细胞趋化因子3组Nestin染色阳性率明显高于对照组(P细胞趋化因子3组的Nestin mRNA表达量明显高于对照组(P细胞趋化因子3对海马来源神经干细胞具有促进存活和增殖的作用。

关键词：中性粒细胞趋化因子3 海马神经干细胞细胞存活细胞增殖巢蛋白

内质网膜复合亚基3调控内质网应激影响人畸胎瘤细胞的存活

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第5期37卷 673-680页

作者：高爽罗启慧李孜雨陈正礼刘文涛黄超四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室成都611130 四川农业大学预防兽医研究所成都611130

内质网膜蛋白复合物(endoplasmic reticulum membrane complex, EMC)在跨膜蛋白质的生物发生和膜整合中发挥重要作用。内质网膜复合亚基3(endoplasmic reticulum membrane complex 3,EMC3)是EMC的重要组成部分,但其在生殖细胞中发挥的... 详细信息

内质网膜蛋白复合物(endoplasmic reticulum membrane complex, EMC)在跨膜蛋白质的生物发生和膜整合中发挥重要作用。内质网膜复合亚基3(endoplasmic reticulum membrane complex 3,EMC3)是EMC的重要组成部分,但其在生殖细胞中发挥的作用未见报道。本研究通过实时荧光定量PCR法检测18周龄小鼠睾丸、肺、脾、下丘脑组织中的EMC3 mRNA表达水平差异。结果显示,小鼠睾丸中EMC3 mRNA表达水平较高。体外培养人畸胎癌细胞NCCIT,通过不同浓度衣霉素诱导细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS),应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法检测其中EMC3、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein, GRP78)、CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein, CHOP)的mRNA及其蛋白质表达水平。结果显示,相对于对照组,EMC3、GRP78、CHOP的mRNA与蛋白质水平表达极显著升高(P细胞产生内质网应激,EMC3在衣霉素诱导的内质网应激的精原细胞中,mRNA与蛋白质水平表达升高。以NCCIT细胞cDNA为模板,利用PCR法扩增EMC3基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-EMC3重组质粒,经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-EMC3重组质粒构建成功。将重组质粒和空载体分别转染至NCCIT细胞中进行表达,应用实时荧光定量PCR法与CCK8法检测细胞中GRP78、CHOP的mRNA转录水平以及细胞活力。结果显示,EMC3转染组的GRP78、CHOP的mRNA水平表达显著升高(P细胞活性极显著降低(P细胞中调控内质网应激并抑制细胞存活的发生。综上表明,过表达EMC3能够在精原细胞中调控内质网应激抑制细胞存活,EMC3可能在精原细胞的内质网应激中发挥重要作用。

关键词：内质网膜复合亚基3 内质网应激过表达细胞存活

OPTN基因的低表达对大鼠视网膜神经节细胞存活影响的研究

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中华眼科杂志 2014年第8期50卷 598-605页

作者：徐志蓉陈飞严浩深圳市南山区人民医院眼科 518052 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科

目的观察大鼠OPTN基因的低表达对视网膜神经节细胞系（RGC5）亚细胞形态结构及存活的影响.方法实验研究.设计并合成特异性针对Sprague-Dawley（SD）大鼠OPTN的3对RNA干扰片段（siRNA）,体外培养SD大鼠星型胶质细胞,取对数生长期的细... 详细信息

目的观察大鼠OPTN基因的低表达对视网膜神经节细胞系（RGC5）亚细胞形态结构及存活的影响.方法实验研究.设计并合成特异性针对Sprague-Dawley（SD）大鼠OPTN的3对RNA干扰片段（siRNA）,体外培养SD大鼠星型胶质细胞,取对数生长期的细胞做实验,分别将3对siRNA（si-OPTN-001、si-OPTN-002、si-OPTN-003）通过脂质体Lipofectemine 2000转染入星型胶质细胞,24 ～ 48 h后采用实时PCR和Western Blot检测siRNA的干扰效果,筛选出抑制效果最佳的序列;以筛选出来的siRNA序列构建绿色荧光蛋白EGFP标记的si-OPTN,并通过Lipofectemine 2000包裹转染RGC5,将RGC5分为4组：空白对照组,绿色荧光蛋白真核细胞表达载体（pEGFP）阳性对照组,si-OPTN组,脂质体阴性对照组.转染24～48 h后用细胞器特异荧光染料标记细胞内不同细胞器结构,通过共聚焦荧光显微镜来观察表达的si-OPTN在RGC5内的分布、定位及其对细胞器形态结构的影响;通过形态学观察和Hoechst33342-PI荧光染色观察si-OPTN对RGC5存活的影响.实验中不同组间的总体比较采用单因素方差分析.结果实时PCR及Western Blot的结果显示：转染si-OPTN-001、si-OPTN-002和si-OPTN-003 24 h后星型胶质细胞内OPTN的mRNA表达下降,分别为阴性对照组的（61.71±0.84）％、（48.13±0.92）％和（46.22±0.73）％,而转染si-OPTN-001、si-OPTN-002和si-OPTN-003 48 h后星型胶质细胞内OPTN的蛋白表达水平下降,分别为阴性对照组的（64.44±2.01）％、（57.78±1.97）％和（37.78±1.84）％,其中si-OPTN-003与阴性对照组相比降低显著;si-OPTN转染RGC5细胞24 h后的转染效率为（17.43±0.94）％;转染48 h后的转染效率为（20.13±1.24）％;表达的si-OPTN在细胞内基本上均匀分布于整个细胞,覆盖胞质和胞核,与阴性对照组细胞器染色情况比较,转染细胞内的肌丝蛋白、线粒体、溶酶体及高尔基体形态结构未见明显损伤性改变;Hochest33342/PI荧光染色结果显示：转染24 h,与空白对照组（0.74±0.34）％和阴性对照组（0.96±0.41）％比较,EGFP阳性对照组及si-OPTN组整组的RGC5细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义（F=5.457,P＜0.05）,但si-OPTN组转染质粒的细胞凋亡率明显低于阳性对照组,差异有统计学意义（F=6.541,P＜0.05）.随转染时间延长,在转染48 h时,阳性对照组凋亡率较24 h时下降,si-OPTN组凋亡率稍升高但无统计学意义（F=3.212,P＞0.05）,且仍低于阳性对照组.结论相较于另2对si-RNA,si-OPTN-003更能有效地抑制OPTN的表达;si-OPTN转染RGC5后均匀分布于全细胞,对细胞内的亚细胞器结构未见明显损伤性改变;通过转染si-OPTN使OPTN表达降低可能对RGC5的存活有保护作用.

关键词： RNA干扰 OPTN RGC5 亚细胞结构细胞存活

蛋白酶体β亚基4型对人肝癌SMMC7721细胞增殖存活的影响

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临床肝胆病杂志 2020年第3期36卷 592-595页

作者：陆谦程欣夏振国陈钟南通大学附属医院肝胆外科江苏南通226001 南通市通州区人民医院普外科江苏南通226300

目的旨在探讨蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)对人肝癌SMMC7721细胞增殖存活的影响及其可能的机制。方法利用特异性短发夹RNA(shRNA)技术构建干扰PSMB4表达的SMMC7721实验组细胞;运用MTT、克隆形成实验检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞... 详细信息

目的旨在探讨蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)对人肝癌SMMC7721细胞增殖存活的影响及其可能的机制。方法利用特异性短发夹RNA(shRNA)技术构建干扰PSMB4表达的SMMC7721实验组细胞;运用MTT、克隆形成实验检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western Blot检测相关蛋白的表达变化。计量资料两组间比较采用独立样本t检验。结果成功构建了干扰PSMB4表达的SMMC7721实验组细胞(shRNA1:t=22.67,P细胞OD490值显著低于对照组。克隆形成实验显示细胞集落数显著减少。流式细胞术显示实验组细胞的早期凋亡率[(5.5570±0.2589)%vs(3.8870±0.3324)%,t=3.964,P=0.0166]、晚期凋亡率[(12.6300±0.4198)%vs(5.3100±0.3062)%,t=14.080,P=0.0001]及总凋亡率[(18.1800±0.6785)%vs(9.1970±0.6313)%,t=9.967,P=0.0006]均明显高于对照组,且干扰PSMB4表达的实验组细胞中核因子-κB亚基p65蛋白表达降低(0.8015±0.0120 vs 0.2841±0.0110,t=31.830,P细胞的增殖存活能力下降。

关键词：癌,肝细胞蛋白酶体β亚基4型细胞增殖细胞存活

circ_LAS1L通过调控分泌型卷曲相关蛋白5影响心肌细胞存活的机制

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实用心脑肺血管病杂志 2024年第6期32卷 77-83页

作者：王竟靖马玉茹郭磊别自东宁夏医科大学总医院心血管内科宁夏回族自治区银川市750004 延安大学咸阳医院心血管内科陕西省咸阳市712000

目的探讨circ_LAS1L通过调控分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)影响心肌细胞存活的机制。方法本实验时间为2023年1—5月。(1)将心肌细胞H9c2随机分为对照组(不进行转染)、NC组(转染空载体)、circ_LAS1L组(转染circ_LAS1L过表达载体),然后检测... 详细信息

目的探讨circ_LAS1L通过调控分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)影响心肌细胞存活的机制。方法本实验时间为2023年1—5月。(1)将心肌细胞H9c2随机分为对照组(不进行转染)、NC组(转染空载体)、circ_LAS1L组(转染circ_LAS1L过表达载体),然后检测各组circ_LAS1L表达水平及m^(6)A修饰酶〔甲基转移酶3(METTL3)、甲基转移酶14(METTL14)、Wilms肿瘤1相关蛋白(WTAP)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)、α-酮戊二酸依赖性双加氧酶alkB同系物5(ALKBH5)〕、SFRP5 mRNA、蛋白表达水平。(2)将心肌细胞H9c2随机分为对照组、si-NC组(转染siRNA)、si-circ_LAS1L组(转染circ_LAS1L siRNA),各组检测指标同上。(3)将心肌细胞H9c2随机分为对照组、NC组、si-circ_LAS1L组、si-METTL3组(转染METTL3 siRNA)、si-circ_LAS1L+METTL3组(共转染circ_LAS1L siRNA和METTL3过表达载体),检测各组circ_LAS1L表达水平和METTL3、SFRP5 mRNA、蛋白表达水平及N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)^(+)SFRP5 mRNA表达水平、心肌细胞存活指标〔细胞存活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞凋亡率〕。结果circ_LAS1L组circ_LASIL表达水平及METTL3、METTL14、WTAP、SFRP5 mRNA、蛋白表达水平高于对照组,FTO、ALKBH5 mRNA、蛋白表达水平低于对照组(P细胞存活力低于对照组、si-circ_LAS1L+METTL3组,LDH释放率、细胞凋亡率高于对照组、si-circ_LAS1L+METTL3组(P细胞存活,且circ_LAS1L/METTL3/SFRP5轴是与心肌细胞功能密切相关的重要信号通路。

关键词：心肌细胞 RNA,环状分泌型卷曲相关蛋白5 N6-甲基腺苷细胞存活

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甘露糖抑制内质网应激促进胰岛β细胞存活

免疫学杂志 2019年第3期35卷 207-212页

作者：马姝月贾旭张梦军赵鹏宇陈晓玲王莉吴玉章陆军军医大学全军免疫学研究所重庆400038 川北医学院药理学教研室南充637007 陆军军医大学药学与检验医学系药物分析学教研室重庆400038

目的 1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是由于胰岛β细胞受自身免疫系统的破坏,而导致胰岛素缺乏和血糖升高的一种自身免疫性疾病,胰岛β细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是其发病的重要因素。甘露糖是一种葡萄糖的差... 详细信息

目的 1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是由于胰岛β细胞受自身免疫系统的破坏,而导致胰岛素缺乏和血糖升高的一种自身免疫性疾病,胰岛β细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是其发病的重要因素。甘露糖是一种葡萄糖的差向异构体,新近发现其具有减缓甚至阻断T1D进展的作用,但具体机制仍待进一步阐明。方法通过ERS诱导剂(TG/TM)处理NIT-1细胞,荧光定量PCR检测内质网应激标志物mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞生存活力,台盼蓝法鉴定细胞生死状态。结果给予适宜浓度的甘露糖预处理,可改善ERS诱导剂引起的胰岛β细胞系(NIT-1)细胞活力下降并逆转ERS诱导剂引发的BiP、ATF4及CHOP mRNA水平升高。结论甘露糖可抑制NIT-1细胞的过度ERS,进而减少凋亡,促进存活,为甘露糖用于治疗T1D提供了新的理论依据。

关键词：甘露糖内质网应激细胞存活