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高水平胰岛素对大鼠系膜细胞NF-κB活化及细胞外基质合成的影响

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基础医学与临床 2004年第2期24卷 165-168页

作者：杜晓刚甘华重庆医科大学附属第一医院肾内科重庆400016

探讨高水平胰岛素对系膜细胞NF κBp6 5活化及细胞外基质合成的影响。用高水平的胰岛素刺激系膜细胞后 ,用免疫组化染色观察系膜细胞NF κBp6 5活化 ,放免法测定系膜细胞培养上清液中Ⅳ型胶原及层粘蛋白 (LN)水平。并以无胰岛素刺激为... 详细信息

探讨高水平胰岛素对系膜细胞NF κBp6 5活化及细胞外基质合成的影响。用高水平的胰岛素刺激系膜细胞后 ,用免疫组化染色观察系膜细胞NF κBp6 5活化 ,放免法测定系膜细胞培养上清液中Ⅳ型胶原及层粘蛋白 (LN)水平。并以无胰岛素刺激为正常对照组。结果显示胰岛素刺激后 ,系膜细胞内NF κBp6 5核移位阳性率 (PR)、平均光密度 (ALD)以及上清液中Ⅳ型胶原、LN在一定浓度范围内呈剂量和时间依赖性增加 ,表明胰岛素可促进系膜细胞的NF κBp6

关键词：胰岛素大鼠系膜细胞 NF—κB活化细胞外基质合成免疫组化染色慢性肾功能不全

抑制PLC-γ1能促进人骨性关节炎软骨细胞外基质的合成

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抑制PLC-γ1能促进人骨性关节炎软骨细胞外基质的合成

作者：曾国庆福建医科大学

学位级别：硕士

目的：旨在探讨磷脂酶C-γ1（phospholipase C-γ1）在人骨性关节炎(osteoarthritis,OA)疾病发展过程中的作用。方法：本研究通过从手术废弃材料中获得正常膝关节及骨关节炎患者软骨，分离出软骨细胞，并进行细胞培养，应用蛋白免疫印... 详细信息

目的：旨在探讨磷脂酶C-γ1（phospholipase C-γ1）在人骨性关节炎(osteoarthritis,OA)疾病发展过程中的作用。方法：本研究通过从手术废弃材料中获得正常膝关节及骨关节炎患者软骨，分离出软骨细胞，并进行细胞培养，应用蛋白免疫印迹（western blotting）技术，检测正常与OA软骨细胞中plc-γ1、磷酸化plcγ1及其下游分子（sox-9、mmp13)的差异;免疫组化方法检测plcγ1在OA与正常对照组之间表达差异;加入U73122（plcγ1抑制剂），检测下游分子（sox-9mmp13Agg Col II）表达变化;设计并合成针对plcγ1的siRNA序列，转染人OA软骨细胞，干扰plcγ1的表达;最后使用DAG和IP3相应的抑制剂处理细胞，用western blotting技术检测这些信号通路蛋白的表达水平。结果：plcγ1在骨性关节炎患者的软骨组织及软骨细胞中的表达高于相应的正常对照组。Plcγ1与OA患者软骨细胞外基质合成密切相关，进一步应用U73122（plcγ1抑制剂）或者siRNA技术降低plcγ1，均能促进OA患者软骨细胞外基质的合成;并且在调节基质合成中，plcγ1下游的IP3/Ca2+/CamK信号轴强于DAG/PKCδ轴，其可通过激活mTOR/P70S6K/S6，进而参与软骨细胞外基质的合成。结论：plcγ1参与了OA患者软骨细胞外基质的合成，而且plcγ1水平的降低能够促进软骨细胞外基质合成，plcγ1可以成为骨关节炎的一种新的治疗靶点。

关键词： PLC-γ1 人骨性关节炎软骨细胞细胞外基质合成

引经药柴胡对胰腺纤维化大鼠细胞外基质合成调控增效的作用

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中国中西医结合消化杂志 2012年第10期20卷 433-437页

作者：梁晓强章学林马恩伟马国珍张静喆上海中医药大学附属龙华医院中医外科研究所上海200032 上海中医药大学附属龙华医院普外科上海200032

[目的]观察引经药柴胡对大黄丹参调控胰腺纤维化大鼠细胞外基质(ECM)合成增效的作用。[方法]50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组,每组10只。假手术组开腹后关腹,其他各组通过结扎胰胆管联合... 详细信息

[目的]观察引经药柴胡对大黄丹参调控胰腺纤维化大鼠细胞外基质(ECM)合成增效的作用。[方法]50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组,每组10只。假手术组开腹后关腹,其他各组通过结扎胰胆管联合腹腔注射雨蛙素3d建立胰腺纤维化模型;柴胡组、大黄丹参组、柴胡大黄丹参组分别于术前、后3d用对应药物灌胃(剂量分别为1.***.kg-1.d-1、3.***.kg-1.d-1、4.***.kg-1.d-1)。术后第4天取材用苏木精-伊红染色观察胰腺病理学变化,免疫组化检测胰腺α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原表达,ELISA测定血清纤维连接蛋白(FN)、层结合蛋白(LN)含量。[结果]与模型组相比,柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组均可改善胰腺病理变化,降低α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原表达,降低血清LN及FN含量,均P合成来发挥抗胰腺纤维化的作用,其中柴胡大黄丹参在降低血清FN含量方面效果最优,提示柴胡在抑制胰腺ECM合成方面对大黄丹参存在一定的增效作用。

关键词：胰腺纤维化细胞外基质合成引经药增效

TGF-β不同亚型在糖尿病小鼠心脏中的表达及作用差异研究

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TGF-β不同亚型在糖尿病小鼠心脏中的表达及作用差异研究

作者：王佳伟湖北科技学院

学位级别：硕士

目的:探讨三种不同亚型TGF-β在糖尿病小鼠心脏中的差异表达水平。方法:(1)取糖尿病小鼠心脏组织与正常小鼠心脏组织,采用Western Blot及RT-qPCR方法检测CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和m RNA表达;(2)采用Western Blot、RT-qPCR和免疫... 详细信息

目的:探讨三种不同亚型TGF-β在糖尿病小鼠心脏中的差异表达水平。方法:(1)取糖尿病小鼠心脏组织与正常小鼠心脏组织,采用Western Blot及RT-qPCR方法检测CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和m RNA表达;(2)采用Western Blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测小鼠心脏组织中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达水平;(3)30 m M HG处理MCFs,采用CCK-8法检测MCFs的细胞活力;采用Western blot及RT-qPCR法检测CollagenⅠ、Collagen Ⅲ和TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达水平;(4)不同浓度TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3处理MCFs 24 h后,采用CCK-8法检测MCFs的细胞活力,采用Western Blot及RT-qPCR法检测CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表达情况;(5)采用Western Blot法检测糖尿病小鼠心脏组织中和HG处理的MCFs中AMPK、Smad2和p38 MAPK的磷酸化水平,Smad7、MMP9的蛋白表达情况;(6)采用脂质体转染法转染si RNA至MCFs 24h后给与HG处理24h,收集细胞采用Western Blot法检测MCFs中TGF-β1、TGF-β3、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、Smad7和MMP9的蛋白表达,检测AMPK、Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平。结果:(1)糖尿病小鼠心脏组织中的CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、TGF-β1、TGF-β3的蛋白和m RNA的表达显著上调,且TGF-β3蛋白和m RNA的表达水平显著高于TGF-β1,而TGF-β2蛋白和m RNA的表达未发生变化;(2)30 m M HG处理MCFs 24 h时细胞活力最强,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、TGF-β3的表达水平均上调,且TGF-β3的表达水平高于TGF-β1,而TGF-β2的表达未发生变化;(3)采用不同浓度的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3处理MCFs细胞24 h后,5ng·m L的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3细胞活性最强,且5ng·m L的TGF-β1和TGF-β3能够显著增加CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的蛋白表达而TGF-β2未能促进CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达;(4)采用脂质体转染法转染分别或同时转染TGF-β1和TGF-β3的si RNA至MCFs中24 h后给予HG处理24 h,TGF-β1和TGF-β3的si RNA能够抑制CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达且TGF-β3的si RNA能够更有效地抑制CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达;(5)糖尿病小鼠心脏组织和HG处理的MCFs中,Smad2、p38 MAPK的磷酸化和MMP9的蛋白表达水平显著上调,AMPK的磷酸化和Smad7的蛋白表达水平显著下调;而TGF-β1和TGF-β3的si RNA能够抑制Smad2、p38 MAPK的磷酸化和MMP9的蛋白表达水平,并逆转AMPK的磷酸化和Smad7的蛋白表达水平,但TGF-β3的si RNA能够更有效的抑制Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平,TGF-β1的si RNA逆转AMPK的磷酸化水平能力强于TGF-β3。结论:(1)糖尿病小鼠心脏组织中和HG处理的MCFs中的CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1和TGF-β3表达升高,其中以TGF-β3亚型的作用最明显;(2)TGF-β1、TGF-β3均能促进CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表达,其中TGF-β3亚型的作用较TGF-β1作用更明显;(3)TGF-β1、TGF-β3对胶原合成和降解信号通路的调控存在差异,TGF-β1能够有效地抑制AMPK的磷酸化水平,而TGF-β3亚型促进Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平,抑制AMPK的磷酸化水平和Smad7的蛋白表达的作用表现得更有效。

关键词：糖尿病心肌纤维化转化生长因子β 细胞外基质合成细胞外基质降解

蛋白磷酸酶2Ac介导Smad3中间连接区去磷酸化促肾小管上皮细胞间充质转分化的研究

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肾脏病与透析肾移植杂志 2015年第3期24卷 242-248页

作者：庾楠楠李华李军肖争向玉琼赵祝叶尤燕华刘虹孙林彭佑铭刘伏友李瑛中南大学湘雅二医院肾内科长沙410011

目的:通过蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)过表达和小干扰RNA质粒转染人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)后予以转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,观察PP2Ac对细胞外基质合成、肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)和Smad3中间连接区磷酸化的影响,探讨PP2Ac促肾... 详细信息

目的:通过蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)过表达和小干扰RNA质粒转染人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)后予以转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,观察PP2Ac对细胞外基质合成、肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)和Smad3中间连接区磷酸化的影响,探讨PP2Ac促肾间质纤维化的机制。方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组和质粒转染+TGF-β1组。采用RT-PCR和Western Blot法检测PP2Ac、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E选择素(E-cadherin)表达水平。采用Western blot法检测Smad3、Smad3中间连接区p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表达情况。结果:RT-PCR和Western Blot结果均显示:PP2Ac过表达质粒转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激24h后,PP2Ac表达较TGF-β1组升高,同时FN、Col-Ⅰ和a-SMA表达明显上调,E-cadherin表达下调;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞后再予TGF-β1刺激24h,较TGF-β1组,PP2Ac表达降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达减少,E-cadherin表达增高(P细胞1h时PP2Ac和Smad3中间区磷酸化的蛋白表达均达到峰值;HK-2细胞转染PP2Ac过表达质粒再予TGF-β1刺激1h后,与单纯TGF-β1刺激组比较,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表达均下降;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激1h后,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)蛋白表达均增加(P细胞外基质的生成及EMT;PP2Ac介导肾小管上皮细胞Smad3中间连接区去磷酸化。

关键词：蛋白磷酸酶2Ac 去磷酸化细胞外基质合成 EMT Smad3 中间连接区

MMPs/TIMPs在子宫内膜异位症病机研究中的新进展

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广东医学 2007年第5期28卷 832-834页

作者：曹立幸司徒仪黄健玲广东省中医院妇科广州510120

子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）作为一种现代病，已成为育龄妇女的多发病、常见病。其发病率逐年上升，文献报道约占生育年龄妇女的10％，占妇科手术的30％左右。本病以痛经、不孕为主要症状。异位病灶所表现的细胞增生、浸润和... 详细信息

子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）作为一种现代病，已成为育龄妇女的多发病、常见病。其发病率逐年上升，文献报道约占生育年龄妇女的10％，占妇科手术的30％左右。本病以痛经、不孕为主要症状。异位病灶所表现的细胞增生、浸润和复发性，使之成为难治之症。目前本病病机尚不完全清楚，研究认为其病理过程表现为异位内膜粘附→侵袭→血管生成的“3A”程序（attachment—aggrassion-angio-genesis），阻断或抑制三者之一，即可影响病情进展。异位内膜首先通过黏附作用入侵盆腹腔腹膜或其他脏器表面，而突破细胞外基质的侵袭过程是其种植生长的必要条件。细胞外基质合成和降解失衡是EMT发生的重要环节。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）及其组织抑制因子（tissue inhibitors of matrix metalloproteinase，TIMPs）是参与细胞外基质降解和重建的主要蛋白酶系统，与异位病灶侵袭性密切相关.

关键词：子宫内膜异位症病病机 TIMPs MMPs 细胞外基质合成细胞外基质降解基质金属蛋白酶生育年龄妇女

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脊索细胞与椎间盘退变关系研究进展

中国脊柱脊髓杂志 2009年第6期19卷 470-472页

作者：马智林邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科

随着年龄的增长，椎间盘退行性变是一类患病率很高、严重影响生活质量的疾病。椎间盘组织以大量基质为主要组成结构，少量细胞散在分布于基质中。蛋白多糖和胶原是构成椎间盘基质的主要蛋白质，决定基质结构和功能的完整性，因而它们的... 详细信息

随着年龄的增长，椎间盘退行性变是一类患病率很高、严重影响生活质量的疾病。椎间盘组织以大量基质为主要组成结构，少量细胞散在分布于基质中。蛋白多糖和胶原是构成椎间盘基质的主要蛋白质，决定基质结构和功能的完整性，因而它们的损耗是椎间盘退变的重要因素。脊索细胞对细胞外基质的合成有重要作用，与椎间盘退变密切相关。笔者着重从脊索细胞的生物学特性和其促进椎间盘髓核细胞外基质合成的机制等研究进展作一综述。

关键词：细胞外基质合成椎间盘退变脊索椎间盘基质椎间盘退行性变组成结构椎间盘组织椎间盘髓核

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病理性瘢痕成纤维细胞的表型异常和发病机制

中华整形外科杂志 2007年第4期23卷 361-364页

作者：苏卫国李永林苏州大学附属第一医院烧伤整形外科苏州215006

皮肤受损后组织异常修复常导致病理性愈合肆瘢痕疙瘩和增生性瘢痕（hypertrophic scar，HTs）的发生。成纤维细胞（fibroblasts，Fb）作为一种重要的修复细胞，其生物学行为很大程度上决定了修复结局．若FB过量增殖，细胞外基质合成增... 详细信息

皮肤受损后组织异常修复常导致病理性愈合肆瘢痕疙瘩和增生性瘢痕（hypertrophic scar，HTs）的发生。成纤维细胞（fibroblasts，Fb）作为一种重要的修复细胞，其生物学行为很大程度上决定了修复结局．若FB过量增殖，细胞外基质合成增加或分解不足即可导致病理性瘢痕发生。

关键词：瘢痕成纤维细胞病理性瘢痕发病机制表型异常细胞外基质合成修复细胞增生性瘢痕生物学行为

肾素血管紧张素系统与活性维生素D3-成纤维细胞生长因子D3-Klotho在慢性肾脏病中的相互关系研究

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中华肾脏病杂志 2012年第11期28卷 906-908页

作者：李月红王梅北京大学人民医院肾内科 100044

肾素和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）通过升高肾小球内压、刺激细胞增殖及细胞外基质合成等多种途径促进慢性肾脏病的进展。阻断肾素血管紧张素系统（RAS）激活有助于慢性肾脏病的治疗，但随之而来的肾素水平反馈性增高会减弱这种作用。维生素D... 详细信息

肾素和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）通过升高肾小球内压、刺激细胞增殖及细胞外基质合成等多种途径促进慢性肾脏病的进展。阻断肾素血管紧张素系统（RAS）激活有助于慢性肾脏病的治疗，但随之而来的肾素水平反馈性增高会减弱这种作用。维生素D3（VitD3）是肾素表达的负性调节因子，是潜在的肾素抑制剂，理论上活性VitD3通过抑制肾素活性，可减轻因使用血管紧张素转换酶抑制剂引起的反馈性肾素增高，具有肾脏保护作用。

关键词：肾素血管紧张素系统慢性肾脏病成纤维细胞生长因子肾素活性维生素血管紧张素转换酶抑制剂细胞外基质合成活性VitD3