检索结果-南通市图书馆

作者：李然山东师范大学

学位级别：硕士

芽孢杆菌(Bacillus spp.)是土壤和植物微生态系统中的优势微生物种群,具有很强的抗逆能力和抗病作用,其生防机制主要包括竞争作用、拮抗作用和诱导植物抗病性等方面。其产生的细胞壁降解酶(如蛋白酶、几丁质酶、β-1.3-葡聚糖酶等)是重... 详细信息

芽孢杆菌(Bacillus spp.)是土壤和植物微生态系统中的优势微生物种群,具有很强的抗逆能力和抗病作用,其生防机制主要包括竞争作用、拮抗作用和诱导植物抗病性等方面。其产生的细胞壁降解酶(如蛋白酶、几丁质酶、β-1.3-葡聚糖酶等)是重要的拮抗物质之一。已有研究表明,几丁质酶(Chitinase)和β-1.3-葡聚糖酶(β-1.3-glucanase)在生防中的作用与真菌细胞壁结构有关。真菌细胞壁成分较复杂,除了几丁质、β-1.3-葡聚糖以外,还含有多种蛋白质。生防芽孢杆菌产生的胞外蛋白酶可能在协同几丁质酶、β-1.3-葡聚糖酶降解真菌细胞壁、拮抗病原真菌中起到重要作用。本研究首先从真菌细胞壁蛋白质含量入手,对引起山东省主要作物病害的7种病原真菌细胞壁蛋白质含量进行分析,研究了7株生防芽孢杆菌对不同病原真菌的生物防治效果与其3种主要细胞壁降解酶活力的相关性,并进一步利用紫外线(UV)、硫酸二乙酯(DES)及微波(Microwave)对一株具有广谱抗菌活性且产蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2进行诱变,以蛋白酶活力变化为筛选指标,研究突变株和出发菌株对病原真菌拮抗作用的变化及粗酶液对菌丝和孢子萌发的影响,以期探明芽孢杆菌胞外蛋白酶在生防中的地位和作用,为优良拮抗芽孢杆菌的直接利用和菌株的遗传改良提供依据。具体结果如下: 1.采用Bradford法测定真菌细胞壁蛋白质含量。结果显示:供试7种病原真菌细胞壁交联蛋白含量均高于未交联蛋白,不同病菌菌丝细胞壁中总蛋白含量存在差异,其中以棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum ***. vasinfectum)含量最高,达到7.411 mg/g;西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum ***. niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum ***. cucumerinum),小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)含量相当,其次为烟草赤星病菌(Alternaria alternata)和小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum),番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)含量较少,为2.626 mg/g。 2.生防芽孢杆菌的防治效果与菌株细胞壁降解酶活力的相关性研究,是建立芽孢杆菌菌株筛选模型和菌株改良的基础。根据供试7株生防芽孢杆菌的防效和细胞壁降解酶活力,计算相关系数。结果显示:细胞壁降解酶中影响其防效的主要因素是菌株的蛋白酶水平,同β-1.3-葡聚糖酶水平、几丁质酶水平也有一定关系。以细胞壁蛋白含量最高的棉花枯萎病菌(F. oxysporum ***. vasinfectum)为靶标时,蛋白酶水平相关系数达0.915,其余相关系数分别为β-1.3-葡聚糖酶0.811,几丁质酶0.572,对黄瓜枯萎病菌(F. oxysporum ***. cucumerinum)、小麦赤霉病菌(F. graminearum)及烟草赤星病菌(A. alternata)的研究也得到相同结论;以西瓜枯萎病菌(F. oxysporum ***. niveum)为靶标时,菌株几丁质酶水平与其生防效果相关性较好,相关系数为0.824,其余相关系数分别为蛋白酶0.623,β-1.3-葡聚糖酶0.497。 3.利用紫外线(UV)、硫酸二乙酯(DES)和微波(Microwave)对枯草芽孢杆菌B. subtilis T2进行诱变,获得了具有良好遗传稳定性的蛋白酶正负突变株。酶活力测定结果显示:与出发菌株相比,培养48 h的正突变株T2-18胞外蛋白酶活力提高108.5%,负突变株T2-2蛋白酶活力降低81.1%,而二者的几丁质酶和β-1.3-葡聚糖酶活力均无显著变化。 4.为明确芽孢杆菌胞外蛋白酶在生防作用中的地位及作用,本研究对突变株拮抗性能的变化进行了研究。结果显示:正突变株对棉花枯萎病菌(F. oxysporum ***. vasinfectum)的平板拮抗作用增强,其粗酶液可使该菌菌丝变形膨大成珠状、原生质浓缩,萌发的孢子芽管短且畸形膨大;负突变株对该菌的平板拮抗作用显著降低,粗酶液对该菌菌丝和孢子的形态无明显作用。盆栽实验显示:突变株对黄瓜枯萎病的防效存在差异,正突变株T2-18浸种处理的黄瓜苗死亡率仅为40.0%,T2处理组死亡率为54.3%,低于负突变株79.6%和对照处理组80.1%。表明提高生防芽孢杆菌胞外蛋白酶的活力可增强其拮抗病原真菌的能力。 5.将突变株在平板上连续传20代,考察其遗传稳定性。结果显示:突变株产酶能力以及对病原真菌的拮抗作用均无明显变化,表明获得的突变株具有良好的遗传稳定性,这对于其在各种生态环境中长期稳定地发挥作用具有重要意义。

关键词：细胞壁蛋白芽孢杆菌细胞壁降解酶胞外蛋白酶诱变拮抗作用

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

小麦胚芽鞘膨胀素的性质与功能分析

小麦胚芽鞘膨胀素的性质与功能分析

引用

作者：高强山东农业大学

学位级别：硕士

生长是植物最基本的生理现象。植物的生长主要涉及到细胞的伸长和细胞的分裂。关于植物细胞生长的研究,以前的工作主要集中在膨压维持方面,稳定的膨压为细胞的生长提供了持续的动力,而细胞壁限制了细胞的扩大。因此,调节细胞壁的可塑性... 详细信息

生长是植物最基本的生理现象。植物的生长主要涉及到细胞的伸长和细胞的分裂。关于植物细胞生长的研究,以前的工作主要集中在膨压维持方面,稳定的膨压为细胞的生长提供了持续的动力,而细胞壁限制了细胞的扩大。因此,调节细胞壁的可塑性,是促进植物组织生长的重要机制。膨胀素作为一种细胞壁蛋白,可以有效的提高细胞壁的可塑性,而且广泛参与植物生长发育过程。目前在许多植物中已经发现了膨胀素的存在。小麦是世界性的重要粮食作物,其生长和产量直接关系到人类食物的供应,研究小麦的生长机制对于提高小麦产量具有重要意义。目前,在小麦中已经发现了膨胀素基因的存在。本文以小麦胚芽鞘为实验材料,鉴定了小麦胚芽鞘中膨胀素的存在,对胚芽鞘膨胀素的生化性质进行了研究,并对其生理功能,特别是在小麦水分胁迫适应中的作用进行了初步分析。主要结果如下:1)利用高精度的位移传感器(LVDT)组装了植物组织伸展测定仪。实验证明此仪器的灵敏性很高,是一种测定植物组织生长的良好仪器。2)通过测定小麦胚芽鞘中膨胀素的活性,蛋白免疫印迹检测和抗体血清抑制剂法证实小麦胚芽鞘中存在膨胀素。3)采用Hepes法和SDS法分别提取小麦胚芽鞘细胞壁和细胞质中的膨胀素蛋白。发现细胞壁中提取的膨胀素蛋白的活性高,而细胞质中提取的蛋白基本没有膨胀素活性。蛋白免疫印迹检测也获得了相同的结论。说明小麦胚芽鞘膨胀素定位于细胞壁中。Hepes法提取的膨胀素蛋白的活性较高,蛋白量相对较少;而SDS法的膨胀素蛋白提取效率高,但是蛋白活性低,这可能是因为在SDS法提取过程中,SDS使膨胀素失活的原因。4)通过测定不同pH条件下小麦胚芽鞘膨胀素的重组活性和离体小麦胚芽鞘细胞壁膨胀素活性,发现小麦胚芽鞘膨胀素的最适pH值为4.0-4.5。热钝化后的小麦胚芽鞘细胞壁的伸展活性一旦被外源膨胀素所恢复,用酸性缓冲液(pH4.5)代替膨胀素提取液后,伸展活性不受影响;但若换用中性缓冲液(pH6.8),伸展活性丧失殆尽,且随缓冲液的交替更换而反复逆转;用离体小麦胚芽鞘进行实验获得了类似的结果。小麦胚芽鞘和黄瓜下胚轴膨胀素可以与其热钝化的细胞壁相互交叉重组,但这种活性具有种属特异性,即黄瓜膨胀素对自身的伸展活性高于对小麦胚芽鞘的伸展活性,同样,小麦胚芽鞘膨胀素蛋白对自身的伸展活性高于对黄瓜下胚轴的伸展活性,这可能与两种植物的膨胀素的种类和以及细胞壁对膨胀素的敏感性有关。膨胀素的活性受外源离子影响。其中,Zn2+、A13+和Ca2+(高浓度)对膨胀素的活性具有抑制作用,DTT、K+和Mg2+对膨胀素具有激活作用。5)小麦胚芽鞘细胞在胚中已经分化完成,生长过程中没有细胞分裂,只有细胞伸长生长,是研究细胞生长机制的良好模式材料。分别测定不同生长时期小麦胚芽鞘的长度和膨胀素的蛋白活性及蛋白丰度,发现膨胀素的表达与小麦胚芽鞘的生长几乎同步,说明膨胀素参与小麦胚芽鞘的生长过程。以上结果,有利于揭示植物细胞的生长机制。6)胚芽鞘是作物幼嫩子叶的保护组织,其生长状况受到周围环境的影响,膨胀素可以有效的促进植物生长并且受到环境因子的调控。因此,小麦胚芽鞘中膨胀素的功能研究有利于揭示环境对生长调控的机制。研究表明,水分胁迫诱导小麦胚芽鞘膨胀素的蛋白活性和丰度提高。分析认为,膨胀素蛋白的表达增加是小麦胚芽鞘对水分胁迫适应的方式之一。结合水分胁迫抑制胚芽鞘生长的事实,分析认为,膨胀素以外的其他因素,如膨压、细胞壁成分、活性氧等对小麦胚芽鞘生长具有抑制作用。小麦抗旱性强弱受各种因素的共同作用。7)通过比较不同光照培养条件下小麦胚芽鞘的生长情况与膨胀素蛋白活性和表达量的关系,说明膨胀素参与了光照调节植物生长过程。

关键词：膨胀素胚芽鞘细胞壁伸展细胞壁蛋白小麦

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

海分枝杆菌（Mycobacterium marinum）的分离鉴定及其抗原性研究

海分枝杆菌（Mycobacterium marinum）的分离鉴定及其抗原性研究

引用

作者：孟鹏中国海洋大学

学位级别：硕士

海分枝杆菌是一种能够同时感染水产动物及人的病原菌。目前已有许多关于海分枝杆菌对人类感染的病例报道,但是鲜见从水产动物机体分离到该病菌的报道。本实验对黑鮶各组织器官进行菌株分离,在与患者病灶分离菌比较的基础上,通过生理生... 详细信息

海分枝杆菌是一种能够同时感染水产动物及人的病原菌。目前已有许多关于海分枝杆菌对人类感染的病例报道,但是鲜见从水产动物机体分离到该病菌的报道。本实验对黑鮶各组织器官进行菌株分离,在与患者病灶分离菌比较的基础上,通过生理生化、基因序列以及反相高效液相色谱技术将其鉴定为海分枝杆菌。通过不同碳源成分的培养基培养,研究菌株对碳源的选择。用该菌株免疫大鼠制备抗血清,间接免疫荧光抗体方法检测其抗血清的特异性。提取28℃、34℃及37℃培养的菌株细胞壁蛋白,通过SDS-PAGE、Western-blot和双向电泳技术分析蛋白的结构组成及其抗原性差异。并用酚-氯仿-甲醇法、乙醇-酚水法和传统热酚水法提取菌株FZ09的脂多糖,通过高碘酸氧化免疫印迹及血清学检测等技术分析比较各方法提取的脂多糖抗原性差异。本实验为海分枝杆菌的致病成分及亚单位疫苗的研究奠定理论基础。具体方法和结果如下：本研究从黑鮶粘液、背鳍、鳃等部位分离到同一菌株FZ09,将其与海分枝杆菌R1同时进行人工感染,黑鮶感染一个月后仍然保持健康状态,所有浓度组均无发病现象,死亡率为0。分别抽取感染R1及菌株FZ09的黑鮶进行菌株再分离,均可从黑鮶粘液,背鳍等部位分离到原感染菌。经形态学观察、生理生化特性、HSP65基因测序及反相高效液相色谱技术(HPLC)分析,菌株FZ09生理生化特性与海分枝杆菌R1相同。抗酸染色为阳性,小黄花菜状、没有鞭毛,有分枝趋势,直径1-10μm;见光产生黄色素,系统发育树表明FZ09确与M. marinum(AJ307636)和*** (MMU55831)聚为一个分支的置信度较高,为85%。综合上述特征及分枝菌酸图谱显示菌株FZ09为海分枝杆菌。表明菌株FZ09与肉芽肿病患者病灶处分离的菌株属同一菌株,同时说明这种携带海分枝杆菌感染而不发病死亡的硬棘水产动物可能通过刺伤而间接感染软棘鱼类和人,海分枝杆菌起源于水产动物。分别用Na2CO3、Tween80、Tween20取代培养基中的碳源成分—甘油,培养海分枝杆菌FZ09四周,菌落生长结果显示：与Na2CO3、Tween80、Tween20相比,甘油仍然是最好的碳源成分,可以促进海分枝杆菌生长旺盛。Tween80在快速鉴定分枝杆菌菌种方面具有一定的优势,海分枝杆菌对于有机碳源的选择与结核分枝杆菌存在区别。用菌株FZ09的全菌免疫大鼠,发现FZ09能有效地刺激大鼠产生免疫应答反应,产生抗血清。酶联免疫吸附法(ELISA)测得血清抗体效价为6400。免疫荧光抗体技术(IFAT)检测表明该血清与菌株FZ09发生特异性结合,与结核分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌发生交叉反应,与非分枝杆菌属细菌则没有交叉。提取28℃、34℃及37℃培养的菌株FZ09的细胞壁蛋白,通过SDS-PAGE、Western-blot及双向电泳技术分析其主要组成结构,结果表明,在28℃、34℃培养条件下,该海分枝杆菌的细胞壁蛋白条带分布相同,主要有：97 kDa、84 kDa、56 kDa、50 kDa、45 kDa、35 kDa、28 kDa、23 kDa、19 kDa、11 kDa。而其中仅有45 kDa蛋白条带具有良好的抗原性,蛋白等电点分布于pH4.5-5.5之间。37℃培养时的蛋白条带明显减少,缺少的主要条带有23 kDa、19 kD和11 kDa,并且没有抗原免疫蛋白带,等电点分布区域相应减少。说明37℃时,菌株可能改变细胞结构,失去了抗原性。45 kDa蛋白可能与海分枝杆菌FZ09的抗原特异性和致病性有关,并有可能作为制备海分枝杆菌亚单位疫苗的候选材料。分别用酚-氯仿-甲醇法、乙醇-酚水法和传统热酚水法提取菌株FZ09的脂多糖(LPS),通过SDS-PAGE和高碘酸氧化免疫印迹法分析比较三种方法所提LPS的组成和抗原性差异,并通过高碘酸氧化ELISA检测血清与抗体结合的敏感性。结果表明乙醇-酚水法提取的LPS含量和纯度最高,LPS的抗原性保持较好。三种方法提取的LPS条带分布范围基本相同,主要条带分子量分别为14、16和23 kd。鼠抗海分枝杆菌血清主要与LPS的核心多糖部分相结合,并且形成块状结构。用温和高碘酸处理后,核心多糖不再被识别,并且导致ELISA吸光度值急剧下降。此外,进行血清学检测时发现：海分枝杆菌对腹腔注射组的昆明鼠具有感染能力,其肝脏出现肉芽肿;以细菌脂多糖作为反应底物的敏感度要明显高于细菌全菌,而且各感染组都表现为明显的阳性结果：其次,昆明鼠各感染组的值要显著高于大鼠各组。

关键词：黑鮶海分枝杆菌 HSP65基因细胞壁蛋白蛋白等电点 LPS 抗原性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物扩展蛋白研究进展评述

植物扩展蛋白研究进展评述

引用

中国植物病理学会2021年学术年会

作者：陈道李畅王颖韩成贵中国农业大学植物病理学系农业农村部作物有害生物监测与绿色防控重点实验室

植物扩展蛋白是位于植物细胞壁的疏松蛋白,是一类细胞壁蛋白,在植物生长发育中起重要作用,如根毛生长、种子大小、萌发、叶片生长和响应非生物胁迫等。成熟植物扩展蛋白的分子量在25～30 kDa,相当于250～300个氨基酸。植物扩展蛋白家族... 详细信息

植物扩展蛋白是位于植物细胞壁的疏松蛋白,是一类细胞壁蛋白,在植物生长发育中起重要作用,如根毛生长、种子大小、萌发、叶片生长和响应非生物胁迫等。成熟植物扩展蛋白的分子量在25～30 kDa,相当于250～300个氨基酸。植物扩展蛋白家族根据系统发育进化树分析分为EXPA、EXPB、EXLA和EXLB四个亚科,每个亚科成员基因结构、基序组成和顺式元件相似。植物扩展蛋白基因具有两个保守结构域:DBPP结构域和花粉过敏原结构域,两个结构域分别含有一些保守的极性残基和芳香氨基酸。到目前为止,扩展蛋白基因的全基因组分析已在多个物种中得到报道,如拟南芥含有31个,烟草有52个,二穗短柄草有38个,水稻有40个,玉米有88个,甘蔗有92个,大豆有75个,等等。在水稻之中,OsEXPB2参与水稻根系结构且促进根系生长。过表达BdEXPA27可提高拟南芥种子的发芽率、改变种子大小、增加根长和根毛数等。二穗短柄草之中扩展基因参与其生长发育和非生物胁迫响应。拟南芥中,AtEXPA2对盐和渗透胁迫有响应;过表达拟南芥AtEXLA2降低了下胚轴的细胞壁强度;AtEXPA7和AtEXPA18在根毛中特异表达,在根毛的伸长中发挥重要作用;过表达TaEXPA2可以提高转基因烟草耐盐能力和耐干旱能力,以及转基因拟南芥的抗氧化能力。大豆之中,大豆GmEXLB1的过表达改变大豆根系结构从而改善其对磷的吸收。通常植物体内扩展蛋白的表达有利于其抵抗非生物胁迫因子,对于扩展蛋白在响应生物胁迫的方面报道较少。研究发现在抗白叶枯病的水稻之中,扩展蛋白如EXPA1、EXPA5和EXPB7等表达水平极低,分析表明诱导扩展蛋白的表达,使水稻细胞壁更疏松,为病菌的侵入提供了有利条件,相反阻滞水稻之中扩展蛋白的表达,可加强细胞壁的堡垒作用,因此增加植物的抗病能力。扩展蛋白在响应生物胁迫的机制研究还有待深入研究。

关键词：植物扩展蛋白扩展蛋白基因细胞壁蛋白蛋白功能

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

GroEL1在分枝杆菌O-甘露糖基化蛋白表达和分泌中的作用

GroEL1在分枝杆菌O-甘露糖基化蛋白表达和分泌中的作用

引用

2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：贾丽秋张飞黄玉坤辛毅马郁芳大连医科大学生物化学教研室大连医科大学生物技术系

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,大多数结核病例呈现慢性感染状态。结核分枝杆菌细胞壁组成的复杂性是其感染宿主和免疫逃避的物质基础。蛋白质组学结果显示,分枝杆菌中存在许多... 详细信息

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,大多数结核病例呈现慢性感染状态。结核分枝杆菌细胞壁组成的复杂性是其感染宿主和免疫逃避的物质基础。蛋白质组学结果显示,分枝杆菌中存在许多甘露糖基化蛋白质,其中一些蛋白质是细胞壁蛋白。我们的前期研究结果显示,用耻垢分枝杆菌(Mcobacterium smegmatis)异源表达结核分枝杆菌细胞壁蛋白Rv1096时,Rv1096蛋白发生甘露糖基化,并且分子伴侣GroEL1与其发生互作。用PMT(polyprenol-phosphate-mannose-protein mannosyl-transferase)基因敲除菌株△M5447表达Rv1096蛋白时,Rv1096蛋白不发生糖基化,表明Rv1096蛋白是O-甘露糖基化蛋白。与G和G细菌不同的是分枝杆菌有两种GroEL分子:GroEL1和GroEL2,已知GroEL2和分子伴侣GroES形成GroEL2-GroES复合体并参与胞内蛋白质的折叠,而GroEL1的功能尚不清楚。我们推测GroEL1通过蛋白质互作参与O-甘露糖基化蛋白Rv1096的分泌及其在细胞壁上的定位。在本研究中,我们已利用DNA同源重组方法构建了groEL1基因敲除菌株△groEL1,同时我们也构建了GroEL1高表达菌株Msm/groEL1。我们将把表达Rv1096及其O-糖基化位点突变体Rv1096m电转化到不同菌株,通过差速离心技术和Western blot(凝集素ConA)分析,阐明GroEL1在O-甘露糖基化蛋白表达和分泌中的作用。

关键词：分枝杆菌细胞壁蛋白 O-甘露糖基化 GroEL1

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

小麦胚芽鞘膨胀素的性质与功能分析

小麦胚芽鞘膨胀素的性质与功能分析

引用

2007中国植物生理学会全国学术会议

作者：高强李峰赵美荣邢士超王玮山东农业大学生命科学学院山东农业大学生命科学学院山东农业大学生命科学学院山东农业大学生命科学学院山东农业大学生命科学学院

＜正＞生长是植物细胞最基本的生理现象。稳定的膨压为细胞的生长提供了持续的动力,而细胞壁限制了细胞的扩大。细胞壁蛋白膨胀素可以有效的提高细胞壁的可塑性。本文在研制了膨胀素检测仪器的基础上,以小麦胚芽鞘为实验材料,对小麦膨... 详细信息

＜正＞生长是植物细胞最基本的生理现象。稳定的膨压为细胞的生长提供了持续的动力,而细胞壁限制了细胞的扩大。细胞壁蛋白膨胀素可以有效的提高细胞壁的可塑性。本文在研制了膨胀素检测仪器的基础上,以小麦胚芽鞘为实验材料,对小麦膨胀素活性的 pH 反应、离子反应特性进行了分析,从蛋白活性和蛋白丰度水平对小麦膨胀素的水分胁迫、光暗反应特性进行了初步研究。主要结果如下：

关键词：膨胀素胚芽鞘细胞壁伸展细胞壁蛋白小麦

来源： cnki会议评论