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植物细胞壁蛋白与木质纤维素酶解

化学进展 2007年第7期19卷 1153-1158页

作者：韩业君陈洪章中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100080

木质纤维素是生产生物能源和材料的重要原料。木质纤维素具有高度复杂的结构,其酶解效率除了受自身的凝聚态结构影响外,还受到细胞壁自身组分的影响。本文综述了植物细胞壁中主要蛋白的特征及其与木质纤维素酶解的关系。从植物自身细胞... 详细信息

木质纤维素是生产生物能源和材料的重要原料。木质纤维素具有高度复杂的结构,其酶解效率除了受自身的凝聚态结构影响外,还受到细胞壁自身组分的影响。本文综述了植物细胞壁中主要蛋白的特征及其与木质纤维素酶解的关系。从植物自身细胞壁蛋白活性出发来研究木质纤维素的酶解,为研究其酶解机制和高效酶解方法提供了新思路。

关键词：木质纤维素纤维素酶细胞壁蛋白酶解协同作用

2型猪链球菌细胞壁蛋白SSU1664的表达、纯化及活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第7期27卷 757-759页

作者：律清宇陈哲郑玉玲郝淮杰姜永强吕淑霞沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:从猪链球菌05ZY中扩增SSU1664基因,在大肠杆菌中表达并评价其重组蛋白的活性。方法:根据05ZY基因组序列设计引物,PCR扩增SSU1664基因,构建表达载体,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA法鉴定其免疫原性。结果:SSU... 详细信息

目的:从猪链球菌05ZY中扩增SSU1664基因,在大肠杆菌中表达并评价其重组蛋白的活性。方法:根据05ZY基因组序列设计引物,PCR扩增SSU1664基因,构建表达载体,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA法鉴定其免疫原性。结果:SSU1664基因能够在大肠杆菌中可溶性表达,Western blot显示其能与猪链球菌菌体免疫后的大鼠血清反应,ELISA检测显示在人感染猪链球菌患者血清中针对SSU1664蛋白的IgM含量显著性升高。结论:SSU1664蛋白具有较高的免疫原性,可作为潜在的猪链球菌疫苗候选分子和猪链球菌早期感染诊断的标志物。

关键词：猪链球菌细胞壁蛋白疫苗

黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因克隆与原核表达

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基因组学与应用生物学 2016年第11期35卷 3054-3059页

作者：周静赵雪夏雪王赟蒙富雪黄江涛郭婷曾柱胡祖权贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州医科大学医药生物技术工程研究中心贵州医科大学生物与工程学院贵阳550004

根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的c DNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到p GEX-6p-1和p ET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG... 详细信息

根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的c DNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到p GEX-6p-1和p ET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG诱导表达后超声波破碎提取可溶性蛋白,SDS-PAGE电泳和Western杂交检测表达产物,结果表明GST-AFLMP1和AFLMP1-His融合蛋白能够在大肠杆菌中大量可溶性表达,可分别作为制备AFLMP1特异抗体的免疫抗原和筛选抗原。

关键词：黄曲霉细胞壁蛋白基因克隆可溶性表达

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黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳体系的建立

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2013年第9期41卷 91-97,104页

作者：林梓浩李玉红董从娟陈鹏西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系，为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种“长春密刺”幼苗叶片为材料，比较2种不同提取介质（CaClz和LiCl溶液）对细胞壁蛋白的提取效果，对... 详细信息

【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系，为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种“长春密刺”幼苗叶片为材料，比较2种不同提取介质（CaClz和LiCl溶液）对细胞壁蛋白的提取效果，对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0．2mol／LCaCl。和3moI／LLiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白，选用17cmpH3～10NLIPG胶条和裂解液1I（7mol／L尿素、2mol／L硫脲、40g／LCHAPS、10g／LDTT和1mmol／LPMSF），上样量800μg，按聚焦程序I（20℃水化14h，100V30min，250V30min，500V30min，1000V1h，线性升压5h至10000V，10000V聚焦6．5h）聚焦后进行双向电泳分离和考马斯亮蓝G-250染色，可获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适合于黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学分析的双向电泳体系。

关键词：黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳条件优化

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不同菌龄酿酒酵母细胞壁蛋白差异性分析

食品与发酵工业 2012年第4期38卷 116-119页

作者：成建国董亮付莹莹张利郭继强赵长新大连工业大学生物工程学院辽宁省发酵工程重点实验室

以酿酒酵母为研究对象,比较了完整细胞提取法、稀碱缓冲液提取法及溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶法等三种酵母菌细胞壁蛋白提取方法,分析了不同菌龄酵母细胞壁差异性蛋白。结果表明:溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶液水解纯化好细胞壁提取蛋白... 详细信息

以酿酒酵母为研究对象,比较了完整细胞提取法、稀碱缓冲液提取法及溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶法等三种酵母菌细胞壁蛋白提取方法,分析了不同菌龄酵母细胞壁差异性蛋白。结果表明:溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶液水解纯化好细胞壁提取蛋白的方法具有所得胞壁蛋白条带较多,且纯度较高的优点,确定了此方法为提取酵母细胞壁蛋白的最佳提取方法。同时,通过SDS-PAGE电泳分析发现,不同菌龄酵母细胞壁蛋白存在着较大的差异性,并确定了分子质量在36 ku、17 ku和12 ku为不同酵母代数细胞壁的3个主要差异性蛋白,其中36 ku、17 ku处条带蛋白随着菌龄的增加酵母细胞壁蛋白表达量逐渐减少,而12 ku处条带蛋白随着菌龄的增加酵母细胞壁蛋白表达量逐渐增加。

关键词：酿酒酵母细胞壁蛋白 SDS-PAGE电泳分析

抗须癣毛癣菌细胞壁蛋白的卵黄抗体制备和鉴定

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中国免疫学杂志 2017年第9期33卷 1350-1354页

作者：胡青青赵肃清贺攀焦洛莹广东工业大学轻工化工学院广州510006

目的:提取须癣毛癣菌的细胞壁蛋白作为免疫原制备特异性卵黄抗体,并鉴定其生物活性,为卵黄抗体在预防与治疗皮肤癣疾病的应用奠定基础。方法:本研究采用冷碱抽提的方法提取须癣毛癣菌的细胞壁蛋白,并用其免疫健康的产蛋母鸡。采用聚乙... 详细信息

目的:提取须癣毛癣菌的细胞壁蛋白作为免疫原制备特异性卵黄抗体,并鉴定其生物活性,为卵黄抗体在预防与治疗皮肤癣疾病的应用奠定基础。方法:本研究采用冷碱抽提的方法提取须癣毛癣菌的细胞壁蛋白,并用其免疫健康的产蛋母鸡。采用聚乙二醇两步沉淀法及饱和硫酸铵盐析提纯卵黄抗体;用Bradford法检测卵黄抗体中蛋白含量;SDS-PAGE凝胶电泳分析测定卵黄抗体的纯度以及相对分子质量;ELISA检测纯化的卵黄抗体的效价;Western blot分析特异性卵黄抗体的免疫反应性。结果:提取的卵黄抗体中蛋白纯度达到87.27%。由细胞壁蛋白制备的特异性卵黄抗体在初免20 d后效价开始升高,到45天达到最高值(1∶32 000)。Western blot结果显示由细胞壁蛋白制备的卵黄抗体能与其良好的特异性结合,具有较好的免疫反应性。结论:本实验提取的须癣毛癣菌细胞壁蛋白作为免疫原可以制备出特异性较强的卵黄抗体,为须癣毛癣菌感染的皮肤疾病提供了治疗新思路。

关键词：须癣毛癣菌细胞壁蛋白卵黄抗体

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宁夏枸杞果实细胞壁蛋白适宜提取方法研究

南方农业学报 2021年第9期52卷 2534-2542页

作者：张琛杨建军王晨马洁杨涓刘根红郑蕊郑国琦宁夏大学生命科学学院银川750021 宁夏回族自治区农村经济经营管理站银川750002

【目的】探索适合宁夏枸杞果实细胞壁蛋白提取方法,为后续进行宁夏枸杞蛋白质组学研究提供技术支持。【方法】以宁夏枸杞果实为试验材料,采用六步洗脱法去除胞浆蛋白,然后通过定量和电泳比较氯化钙提取法、氯化锂提取法、氯化钙加氯化... 详细信息

【目的】探索适合宁夏枸杞果实细胞壁蛋白提取方法,为后续进行宁夏枸杞蛋白质组学研究提供技术支持。【方法】以宁夏枸杞果实为试验材料,采用六步洗脱法去除胞浆蛋白,然后通过定量和电泳比较氯化钙提取法、氯化锂提取法、氯化钙加氯化锂结合提取法和苯酚提取法对细胞壁蛋白的提取效果,通过双向电泳与液相色谱对所得细胞壁蛋白进行验证。【结果】六步洗脱法可较好地除去胞浆蛋白与其他干扰物质,4种方法对宁夏枸杞果实细胞壁蛋白的提取效果排序为:氯化钙提取法(272μg/g)>苯酚提取法(261μg/g)>氯化钙加氯化锂结合提取法(217μg/g)>氯化锂提取法(176μg/g)。裂解液I[7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、30 g/L 3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)、50 g/L二硫苏糖醇(DTT)]溶解蛋白质效果更优,蛋白质定量浓度更高、电泳条带更多、更清晰。氯化钙提取所得蛋白质样品双向电泳结果较好,蛋白质点数较多、清晰度和分辨率较高;通过液相色谱可看出氯化钙提取的细胞壁蛋白肽段种类多,且大部分相对丰度较高,并含有低丰度蛋白质。所测蛋白质分类中有细胞壁定位的蛋白质。【结论】氯化钙单独提取蛋白质样品的方法是宁夏枸杞果实细胞壁蛋白提取最优方法,所得蛋白质样品已达到进行蛋白质组学研究的标准。

关键词：宁夏枸杞细胞壁蛋白提取方法

鸭源粪肠球菌细胞壁蛋白的SDS-PAGE分析

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黑龙江畜牧兽医 2008年第4期 72-73页

作者：韩梅红谷长勤长江大学动物科学学院湖北荆州434025 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

禽类的肠球菌病是由各种肠球菌感染引起的禽类的一种急性或慢性传染病.本研究采用SDSPAGE技术分析4株鸭源粪肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的细胞壁蛋白,比较各菌株细胞壁蛋白的异同,旨在揭示同种不同株粪肠球菌的细胞壁蛋白有... 详细信息

禽类的肠球菌病是由各种肠球菌感染引起的禽类的一种急性或慢性传染病.本研究采用SDSPAGE技术分析4株鸭源粪肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的细胞壁蛋白,比较各菌株细胞壁蛋白的异同,旨在揭示同种不同株粪肠球菌的细胞壁蛋白有何共性,以及它们之间存在的差异.这不仅为禽类肠球菌病的病原学研究提供理论依据,而且为该病的流行病学调查、快速检测技术以及免疫预防等方面的临床研究提供十分重要的参考资料.

关键词： SDS-PAGE分析细胞壁蛋白粪肠球菌鸭源慢性传染病技术分析球菌病分离株

低磷调控大豆根系细胞壁蛋白的鉴定及GmPAP1-like的功能初探

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低磷调控大豆根系细胞壁蛋白的鉴定及GmPAP1-like的功能初探

作者：林雁华南农业大学

学位级别：硕士

磷是植物生长发育所必需的大量矿质营养元素之一。然而无机磷容易被土壤中的有机物或其它阳离子所固定,导致磷有效性低成为限制农业生产的重要原因之一。植物长期进化过程中形成了一系列的适应性机制,其中改变根系形态构型及增加根系分... 详细信息

磷是植物生长发育所必需的大量矿质营养元素之一。然而无机磷容易被土壤中的有机物或其它阳离子所固定,导致磷有效性低成为限制农业生产的重要原因之一。植物长期进化过程中形成了一系列的适应性机制,其中改变根系形态构型及增加根系分泌物是植物适应低磷胁迫的重要机制。在植物根系中,细胞壁是植物细胞与根际环境直接接触的组分,许多信号的接收和传导都依赖于细胞壁上蛋白的活性。然而,目前细胞壁蛋白如何响应低磷胁迫尚未清楚。因此,本文通过iTRAQ蛋白组学分析,解析大豆根部细胞壁蛋白在适应低磷环境中所起到的可能作用。进一步对细胞壁蛋白,GmPAP1-like,进行了亚细胞定位和表达模式等性质分析,初步解析了该蛋白在大豆有机磷利用中的重要功能。研究的主要结果如下:1.水培处理结果显示,磷的有效性影响了大豆的生长和根系酸性磷酸酶的活性。与正常磷水平相比,低磷处理降低了大豆地上部生物量以及大豆植株的全磷含量。但大豆根部的生物量和主根长均不受磷有效性的影响。在低磷条件下,大豆根部的总根长、根表面积,侧根长和根系内外源酸性磷酸酶活性均显著增加。2.通过iTRAQ蛋白组学分析,鉴定到受低磷调控的60个细胞壁蛋白。其中,受低磷胁迫上调的细胞壁蛋白共有31个,受低磷下调的细胞壁蛋白29个,这些细胞壁蛋白主要参与了碳代谢、氧化还原、信号转导等途径;定量qRT-PCR分析发现,上调蛋白和下调蛋白所对应的编码基因中,分别有70%和30%的表达水平与其蛋白累积水平变化相一致。3.选取低磷上调表达的紫色酸性磷酸酶类似蛋白（GmPAP1-like）做进一步性质和功能分析。表达模式分析显示大豆GmPAP1-like受低磷显著上调;其受磷有效性调控的表达模式在不同磷效率的大豆品种间无显著差异。菜豆毛根转化亚细胞定位结果进一步证明GmPAP1-like是定位于细胞壁;此外,与空载相比,在大豆毛根中超量表达GmPAP1-like,可以提高大豆毛根的酸性磷酸酶活性。综上所述,本研究利用iTRAQ蛋白组学分析,鉴定到60个低磷胁迫条件下差异累积的细胞壁蛋白。同时,对大豆细胞壁蛋白GmPAP1-like的亚细胞定位和表达模式等性质进行了分析,初步解析了该基因在植物适应低磷胁迫中的可能功能。本研究的结果将为培育适应低磷胁迫的大豆品种提供理论基础。

关键词：低磷胁迫大豆细胞壁蛋白紫色酸性磷酸酶 GmPAP1-like