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盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响

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中国中药杂志 2021年第1期46卷 155-161页

作者：杨玉王亚东王艳徐志庆吴大强汪天明邵菁汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观... 详细信息

探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观察白念珠菌丝形态;透射电镜观察白念珠菌丝细胞壁结构;流式细胞术检测白念珠菌细胞壁β-葡聚糖暴露程度;qRT-PCR法检测白念珠菌丝特异性基因ECE1及β-葡聚糖合酶调控基因FKS1和FKS2的表达。结果显示,盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株的MIC为64~128μg·mL^(-1);512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱干预下能抑制白念珠菌落生长,64~512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制菌丝代谢,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制白念珠菌丝活力,256~512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制形态转化,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能明显损伤细胞壁结构,128~512μg·mL^(-1)盐酸小檗能促进细胞壁β-葡聚糖暴露,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能下调白念珠菌丝特异性基因ECE12.72倍及β-葡聚糖合成酶调控基因FKS1与FKS2分别3.49,3.26倍。研究表明,一定浓度的盐酸小檗碱可能通过下调白念珠菌丝特异性基因及β-葡聚糖合成酶相关基因的表达,从而破坏白念珠菌细胞壁的结构并促使β-葡聚糖暴露,进而影响整个细胞壁的完整性。

关键词：盐酸小檗碱白念珠菌菌丝 β-葡聚糖细胞壁完整性

YLR358C对酿酒酵母细胞壁完整性的调控

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昆明医科大学学报 2022年第7期43卷 33-37页

作者：张瑜李梦妍王捍英郭艳芳马加庆王卫群昆明医科大学基础医学院云南昆明650500 昆明医科大学科技成果孵化中心云南昆明650500

目的观察酿酒酵母YLR358C缺失对细胞壁完整性的调控作用。方法通过点板实验观察YLR358CΔ酵母的生长情况;Calcofluor White(CFW)染色及透射电镜分析YLR358C对酵母细胞壁的影响;转录组分析及qRT-PCR检测YLR358C调控的信号通路。结果在含... 详细信息

目的观察酿酒酵母YLR358C缺失对细胞壁完整性的调控作用。方法通过点板实验观察YLR358CΔ酵母的生长情况;Calcofluor White(CFW)染色及透射电镜分析YLR358C对酵母细胞壁的影响;转录组分析及qRT-PCR检测YLR358C调控的信号通路。结果在含有不同浓度的细胞壁干扰剂CFW、刚果红(CR)和十二烷基硫酸钠(SDS)的培养基上,YLR358C敲除酿酒酵母的生长受到明显抑制。CFW染色显示YLR358CΔ酵母细胞壁几丁质下调,透射电镜也观察到细胞壁厚度变薄。转录组测序和分析表明,YLR358C基因可能参与CWI信号通路的调控。qRT-PCR检测发现YLR358C敲除后WSC3、SWI4和HSP12有差异表达(P细胞壁的完整性,在发酵工程中具有一定的应用潜力。

关键词：酿酒酵母细胞壁完整性 YLR358C 转录组分析

盐酸小檗碱对β-葡聚糖刺激下巨噬细胞NLRP3炎症小体及菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响

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盐酸小檗碱对β-葡聚糖刺激下巨噬细胞NLRP3炎症小体及菌丝相白念...

作者：杨玉安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察盐酸小檗碱对白念珠菌β-葡聚糖刺激下巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路及其调控的NLRP3炎症小体的作用,探讨盐酸小檗碱对白念珠菌感染固有免疫的调控机制;同时观察盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。方法:在采... 详细信息

目的:通过观察盐酸小檗碱对白念珠菌β-葡聚糖刺激下巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路及其调控的NLRP3炎症小体的作用,探讨盐酸小檗碱对白念珠菌感染固有免疫的调控机制;同时观察盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。方法:在采用丙二醇甲醚醋酸酯(Propylene glycol methyl ether acetate,PMA)(100ng/ml)处理人单核细胞白血病细胞(THP-1)后,依据细胞形态学和流式细胞术鉴定和分析PMA诱导产生的巨噬细胞形态和生物学特性。采用CCK-8法检测盐酸小檗碱对诱导产生的巨噬细胞的细胞毒性,确定其合理的浓度范围。采用不用剂量的白念珠菌感染巨噬细胞,确定合适的感染剂量,通过倒置显微镜观察白念珠菌不同感染剂量对巨噬细胞形态的影响。在采用合适剂量的盐酸小檗碱处理白念珠菌感染的巨噬细胞后,通过ELISA检测IL-1β、IL-18表达水平和Western Blot检测TLR4、My D88、NF-κB、NLRP3、ASC、Pro-caspase1、Cleaved Caspase1蛋白的表达。微量液基稀释法检测MIC;spot assay检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌落形成的影响;XTT实验和荧光染色检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝活力的影响;扫描电镜分析盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝形态的影响;透射电镜观察盐酸小檗碱干预后白念珠菌SC5314菌丝细胞壁的变化;流式细胞术检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝细胞壁β-葡聚糖的影响;q RT-PCR检测盐酸小檗碱对白念珠菌丝特异性基因及白念珠菌β-葡聚糖合酶调控基因表达的影响。结果:形态学鉴定和流式细胞术分析表明,PMA可有效地诱导单核细胞分化为巨噬细胞。通过CCK8实验,我们确定盐酸小檗碱对巨噬细胞较合适的浓度区间为4-16μg/ml,并以16μg/ml作为后续研究中的药物干预剂量。白念珠菌最合适感染剂量为1.5×10CFU/ml。进一步分析表明,白念珠菌感染可显著地诱导巨噬细胞TLR4/NF-κB及NLRP3炎症小体通路中相关炎症因子IL-1β、IL-18及TLR4、NF-κB、NLRP3、Cleaved Caspase1表达增加,而当采用16μg/ml的盐酸小檗碱干预后,这些炎症因子的表达则显著地下降。但值得注意的是,盐酸小檗碱并未诱导白念珠菌感染后巨噬细胞中My D88、ASC、Pro-caspase1等分子明显的改变。盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株均显示了较好的抑菌效果,MIC为64-128μg/ml。spot assay、XTT和荧光染色结果表明随着盐酸小檗碱浓度的增加,白念珠菌标准株的活力则逐渐降低。透射电镜检测结果也表明盐酸小檗碱可致白念珠菌细胞壁损伤。流式细胞术分析显示,当盐酸小檗碱浓度增加时,β-葡聚糖荧光强度则逐渐增强。q RT-PCR结果进一步表明,盐酸小檗碱可显著下调菌丝特异性基因以及与β-葡聚糖合酶调控基因。结论:盐酸小檗碱可下调NLRP3炎症小体的表达,并且与TLR4/NF-κB通路相关。盐酸小檗碱可下调白念珠菌β-葡聚糖合成酶相关基因,并使β-葡聚糖暴露,破坏白念珠菌细胞壁的结构,影响其细胞壁的完整性。

关键词：盐酸小檗碱白念珠菌巨噬细胞 TLR4/NF-κB通路 NLRP3炎症小体 β-葡聚糖细胞壁完整性

黑豆细胞壁完整性与曲奇饼干理化品质及淀粉消化特性的相关性研究

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黑豆细胞壁完整性与曲奇饼干理化品质及淀粉消化特性的相关性研究

作者：郭世龙沈阳师范大学

学位级别：硕士

本研究以黑豆为原料,利用粉碎机得到不同粒径的黑豆粉,通过粒径分析、光学显微镜、电导率(CE)和碘蓝值(BVI)对细胞壁的完整性进行评价,通过X-射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、差式扫描量热仪(DSC)等的测定手段,研究细胞壁... 详细信息

本研究以黑豆为原料,利用粉碎机得到不同粒径的黑豆粉,通过粒径分析、光学显微镜、电导率(CE)和碘蓝值(BVI)对细胞壁的完整性进行评价,通过X-射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、差式扫描量热仪(DSC)等的测定手段,研究细胞壁完整性对淀粉结构、热力学特性和功能特性的影响;采用蒸煮方式对黑豆粉进行处理,并对其细胞壁完整性进行评价,进一步研究细胞壁完整性对淀粉结构和热力学特性的影响;同时将熟黑豆粉与小麦粉等比例复配,分析熟黑豆粉对混合粉功能特性和黏度特性(RVA)的影响。建立细胞壁完整性与曲奇饼干理化品质和消化特性的相关性。主要结果如下:1.随着黑豆粉粒径的减小,比表面积增大,表面平均直径和体积平均直径减小,溶出的淀粉、蛋白质和离子随之增多,大颗粒聚集体形态和致密堆积结构逐渐削弱为小颗粒聚集体,富含较多的破碎细胞,表现出更大的电导率和碘蓝值。粗级分黑豆粉富含较多的完整细胞,而细胞壁和比表面积有限制内部物质吸水、吸油、溶胀、溶解和糊化的作用。因此,粗级分黑豆粉有更大的结晶度,更小的持水性、持油性、溶胀力和溶解度,更大的起始、峰值、结束糊化温度和焓变值。2.熟黑豆粉的细胞壁完整性、结晶结构和热力学特性发现:细胞呈椭圆或长条状,单个细胞轮廓清晰可见,由粗到极细级分逐渐失去致密结构,细胞内淀粉发生一定的糊化,富含完整细胞的数量逐渐减少,溶出的淀粉、蛋白质和离子增多,电导率值和碘蓝值随之增大。由于蒸煮处理使得细胞壁孔隙发生改变,熟黑豆粉的电导率值和碘蓝值整体大于生黑豆粉;细胞壁屏障抑制了内部淀粉的糊化,致使粗级分熟黑豆粉的淀粉表现出更大的结晶度,但DSC未检测出糊化峰。3.混合粉的功能特性和黏度特性发现:随着粒径的减小,持水性、持油性、溶胀力和溶解度随之增长,各项黏度参数均随之增大,糊化温度随之降低。说明添加熟黑豆粉改变了混合粉的功能特性和黏度特性,而细胞壁限制了内部淀粉的吸水和二次糊化,阻碍了小麦粉的溶胀。因此,糊化温度由高到低下降。饼干的理化品质和消化特性分析发现:粗和中级分饼干容易被消费者喜爱和接受。粗级分饼干富含的完整细胞较多,溶出的淀粉和蛋白质较少,发生的美拉德反应有利于改变颜色,褐变指数最小,亮度较白。硬度和断裂力受颗粒大小和蛋白质含量影响,粗级分有更小的硬度。持水性越大的饼干,烘烤损失率越小。粗和中级分延展系数低于对照组,而细和极细级分的延展系数高于对照组。关于淀粉的消化特性,富含完整细胞的饼干有更低的消化率,RDS的含量更低,RS的含量更高,预测血糖指数更小,即使与富含破碎细胞的饼干相比也是如此。这一结果表明,细胞壁完整性在复杂基质食品中能有效地减少淀粉水解。另外,比表面积、功能特性和结晶度也会影响淀粉水解。综合上述结果可知,添加粗和中级分混合粉制作的饼干理化品质较好,更接近于对照组,表现出更高的营养价值。

关键词：粉碎蒸煮处理黑豆细胞壁完整性品质体外消化性

Tor1在调节灵芝生长、细胞壁完整性和灵芝三萜生物合成中的作用

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Tor1在调节灵芝生长、细胞壁完整性和灵芝三萜生物合成中的作用

作者：陈冬冬南京农业大学

学位级别：硕士

灵芝(Ganoderma lucidum)是著名的食药用真菌,具有抗癌、抗病毒、抗衰老等功效,在中国具有广泛悠久的应用历史。近年来,分离和纯化灵芝的药理活性成分越来越受到关注。而灵芝三萜作为灵芝的主要活性成分,对它的研究已经成为热点。随着... 详细信息

灵芝(Ganoderma lucidum)是著名的食药用真菌,具有抗癌、抗病毒、抗衰老等功效,在中国具有广泛悠久的应用历史。近年来,分离和纯化灵芝的药理活性成分越来越受到关注。而灵芝三萜作为灵芝的主要活性成分,对它的研究已经成为热点。随着灵芝基因组测序完成和遗传学手段的建立,灵芝已经成为研究生长发育与次级代谢的一个潜在的模式担子菌。TOR(target of rapamycin)是一种进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在调节生长和代谢以及响应环境胁迫过程具有重要的作用。雷帕霉素(Rapamycin)作为TOR的特异性抑制剂,能够与胞内的FKBP12(FK506 binding protein 12)结合形成一个复合物,进而与TOR结合抑制TOR的活力。通过对灵芝tor1基因沉默或Rapamycin处理,灵芝生长受到抑制,菌丝分叉间距变长,细胞壁成分发生了变化,次级代谢产物灵芝三萜含量显著下降。本研究发现Slt2-MAPK参与Tor1调控灵芝细胞壁组分。抑制TOR信号,会导致灵芝对细胞壁损伤剂CFW和CR不敏感,提高细胞壁β-1,3-葡聚糖和几丁质含量,此外通过电子显微镜观察到细胞壁厚度增加。由于Slt2-MAPK在调节细胞壁完整性方面具有重要的作用,我们通过Western Blot检测Slt2-MAPK的磷酸化水平,发现当TOR信号受到抑制时Slt2-MAPK磷酸化水平上升。为了更进一步验证Tor1引起细胞壁组分的变化是不是通过Slt2-MAPK,我们使用Rapamycin处理Slt2-MAPK沉默转化子,结果显示Rapamycin处理Slt2-MAPK沉默转化子使得细胞壁β-1,3-葡聚糖和几丁质含量显著低于Rapamycin处理WT菌株。这些结果表明Slt2-MAPK参与Tor1对于灵芝细胞壁成分的调控。由于TOR在调节细胞代谢过程中起着重要的作用,进一步考察了 Tor1对灵芝次级代谢产物灵芝三萜合成的影响。结果表明当使用Rapamycin处理或tor1基因沉默导致灵芝三萜含量显著下降。由于TOR能够感受胞内ATP的变化,检测发现当抑制灵芝Tor1的时候,会导致胞内ATP含量显著下降。有趣的是外源添加ATP可以回补由于抑制TOR信号所导致的灵芝三萜的下降。这些结果表明Tor1通过胞内ATP的变化调控灵芝三萜的合成。而在灵芝中,Tor1调控ATP含量变化的机制有待进一步的研究。

关键词：灵芝 TOR 细胞壁完整性灵芝三萜 ATP

球孢白僵菌MADS-box转录因子Bbrlm1与细胞壁完整性和毒力的关系

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球孢白僵菌MADS-box转录因子Bbrlm1与细胞壁完整性和毒力的关系

作者：宋雨林西南大学

学位级别：硕士

球孢白僵菌是一种重要的昆虫病原真菌,目前已经被广泛应用于农、林和卫生害虫的防治,并逐渐成为研究寄主与昆虫互作的一个模式菌株。作为一种生防微生物,昆虫病原真菌在应用过程中易受田间干旱、紫外辐射和高温等不利因素以及宿主昆虫... 详细信息

球孢白僵菌是一种重要的昆虫病原真菌,目前已经被广泛应用于农、林和卫生害虫的防治,并逐渐成为研究寄主与昆虫互作的一个模式菌株。作为一种生防微生物,昆虫病原真菌在应用过程中易受田间干旱、紫外辐射和高温等不利因素以及宿主昆虫免疫反应的影响,限制了生防真菌的防效稳定性和应用范围。因此,研究昆虫病原真菌逆境胁迫反应及其与昆虫互作的机制,具有理论与实践的双重意义。细胞壁作为真菌细胞的一道重要屏障,在真菌的生长、形态发生以及适应环境等过程中均发挥着非常关键的作用,是研究昆虫病原真菌逆境胁迫反应及与昆虫互作的一个重要靶标。细胞壁完整性（CWI）途径又被称为slt2/mpkl/pkc1途径,不仅调节细胞壁结构、组成和功能,而且介导真菌的生长、发育以及逆境胁迫反应等。MADS-box转录因子Rlml是CWI途径调控的转录因子之一,在酵母以及少数丝状真菌中的功能已明确,但在不同的真菌中存在功能上的分化。CWI途径MAPK Bbslt2是介导球孢白僵菌细胞壁结构完整性的重要环节,但其潜在靶标转录因子Rlml的功能,尚不明确。本论文克隆了球孢白僵菌Rlml同源蛋白的编码基因Bbrlm1。通过基因敲除、回复互补和超量表达等手段研究了该基因与球孢白僵菌生长、发育、细胞壁完整性及侵染致病等生物学过程的关系。获得如下主要结果：1. Bbrlm1基因的克隆通过搜索球孢白僵菌基因组序列获得与酿酒酵母、构巢曲霉和烟曲霉等多种真菌Rlm1同源蛋白的编码基因Bbrlm1。序列分析发现,Bbrlm1含有1965 bp的开放阅读框,推测编码蛋白含有654个氨基酸,分子量约为70.08 kDa,pI为9.27,在N端第2-70 aa处含有一个保守的MADS-MEF2结构域,在第365-516 aa间含有功能未知的DUF3827结构域。系统进化树分析发现,Bbrlm1与蛹虫草的rlmA聚为一类。2. Bbrlm1的功能研究Bbrlm1参与调节球孢白僵菌生长。为揭示Bbrlm1介导的生物学过程,利用同源重组及超量表达等策略获得了相应的突变体。培养特性分析发现,Bbrlm1介导球孢白僵菌生长。在基础培养基（CZM）上,破坏Bbrlm1显著降低了菌落的生长速率,而超量表达则加快了菌落的生长速率。在完全培养基（1/4 SDY）上,基因破坏（ΔBbrlm1）和超量表达（OE-Bbrlml）菌株的菌落生长均滞后于野生菌株。在1/4 SDY培养基上,ΔBbrlml气生菌丝厚度明显变薄,而OE-Bbrlml的气生菌丝生长茂盛。可见,Bbrlm1影响球孢白僵菌生长,且与营养成分相关。Bbrlml介导球孢白僵菌产孢。在基础培养基上,破坏Bbrlm1显著提高了菌株的分生孢子产量,而超量表达则降低了产孢量;在完全培养基上,ABbrlml和OE-Bbrlml产孢量与野生型无明显差异。在完全培养条件下,基因破坏和超量表达均导致菌株芽生孢子产量显著下降。由此表明,Bbrlm1参与调节球孢白僵菌分生孢子和芽生孢子产生等过程。Bbrlml介导球孢白僵菌的细胞壁完整性。敲除或超量表达Bbrlml影响菌株对细胞壁合成胁迫剂和高温的敏感性,且因培养基不同而发生变化。在基础培养基上,ΔBbrlm1对荧光增白剂（CFW）的耐受性增强,而对SDS和高温的敏感性增强,对刚果红（CR）的敏感性则无明显影响。超量表达Bbrlm1则导致菌株对细胞壁合成抑制剂CFW和CR耐受性增强,对SDS和高温的敏感性则无明显影响。在完全培养基上,ΔBbrlm1对CFW和SDS的敏感性增强,而对CR耐受性增强,对高温的敏感性无明显影响。OE-Bbrlm1则对CFW、CR、SDS和高温的耐受性均增强。透射电镜观察发现,ΔBbrlml分生孢子细胞壁明显变形,而芽生孢子细胞壁结构与野生菌株无明显差异。OE-Bbrlm1的分生孢子细胞壁不仅变形,而且变薄。OE-Bbrlml芽生孢子细胞形态正常,但细胞壁厚度也明显变薄。由此表明,Bbrlm1依赖于营养的变化介导球孢白僵菌细胞壁结构完整性。Bbrlml介导球孢白僵菌的高渗敏感性。在基础培养基上,ABbrlm1对高渗（山梨醇和NaCl）的敏感性增强,而OE-Bbrlml菌株的高渗敏感性无明显变化。在完全培养基上,破坏和超量表达Bbrlm1均增强了菌株对高渗的耐受性。由此表明,Bbrlm1介导菌株对高渗胁迫的敏感性,且应营养条件不同而发生变化。Bbrlml介导球孢白僵菌的毒力。生物测定结果表明,将分生孢子接种于大蜡螟幼虫体壁时,ΔBbrlm1和OE-Bbrlm1毒力分别下降11%和7%;而通过注射接种分生孢子于昆虫血腔时,ΔBbrlm1和OE-Bbrlm1的毒力也分别下降9%和13%。由此可见,Bbrlm1严格调节球孢白僵菌毒力,破坏和超量表达Bbrlm1均导致菌株毒力下降。Bbrlml参与调节球孢白僵菌的次级

关键词：球孢白僵菌细胞壁完整性毒力 MADS-box转录因子 rlm1

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烟曲霉的细胞壁完整性信号通路概述

烟曲霉的细胞壁完整性信号通路概述

钙调磷酸酶和Slt2MAPK信号途径在介导球孢白僵菌细胞壁完整性、分生孢子产生和毒力的交互作用

第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：李亚丽李若瑜北京大学第一医院皮肤科北京大学真菌与真菌病研究中心

烟曲霉作为最重要的经空气传播的致病真菌,可引起免疫缺陷患者严重的感染。细胞壁对于真菌的生长、存活、形态发生、毒力和药物敏感性至关重要,而细胞壁的完整性主要依靠真菌病原体中细胞壁完整性信号通路来维护。本文以烟曲霉细胞壁为... 详细信息

烟曲霉作为最重要的经空气传播的致病真菌,可引起免疫缺陷患者严重的感染。细胞壁对于真菌的生长、存活、形态发生、毒力和药物敏感性至关重要,而细胞壁的完整性主要依靠真菌病原体中细胞壁完整性信号通路来维护。本文以烟曲霉细胞壁为出发点,综述了与烟曲霉细胞壁完整性相关的信号通路及其主要成分,如以MpkA为核心的MAPK级联反应、Calcineurin通路相关蛋白、Ras超家族蛋白及Hsp90;阐述了各相关通路分子调控细胞壁完整性的主要途径及存在的疑问。结合目前烟曲霉细胞壁完整性的研究现状,细胞壁完整性在烟曲霉中的作用是值得肯定的,基于细胞壁完整性开发新的烟曲霉诊治策略也将成为可能。

关键词：烟曲霉细胞壁完整性信号通路

来源： cnki会议评论

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钙调磷酸酶和Slt2MAPK信号途径在介导球孢白僵菌细胞壁完整性、分...

甘蔗鞭黑粉菌Ram1与Ras调控有性配合与细胞壁完整性

中国菌物学会2015年学术年会

作者：黄帅帅何张江张世伟张永军西南大学生物技术中心

钙调磷酸酶和Slt2 MAPK信号途径均介导真菌细胞壁结构完整性、产孢和毒力等生物学过程,而二者在介导这些生物学过程的相互关系尚不明晰。本研究比较分析了钙调磷酸酶和Slt2 MAPK对球孢白僵菌细胞壁结构完整性和生长发育的贡献及二者介... 详细信息

钙调磷酸酶和Slt2 MAPK信号途径均介导真菌细胞壁结构完整性、产孢和毒力等生物学过程,而二者在介导这些生物学过程的相互关系尚不明晰。本研究比较分析了钙调磷酸酶和Slt2 MAPK对球孢白僵菌细胞壁结构完整性和生长发育的贡献及二者介导的基因表达谱。结果表明,破坏钙调磷酸酶催化亚基A（CNA1）或Slt2 MAPK基因均导致菌株对细胞壁合成抑制剂荧光增白剂和高温的耐受性降低。Δcna1对刚果红的耐受性增强,而对高渗胁迫敏感性增强,但slt2敲除突变菌株（Δslt2）却对上述胁迫条件表现相反的表型。在细胞壁合成抑制剂胁迫条件下,Δslt2和Δcna1的细胞壁结构及组分均发生明显变化。破坏slt2和cna1均影响了菌株生长、产孢和孢子活力,提升了胞内活性氧水平,降低了分生孢子表面疏水性和在疏水基质的附着性,并引起毒力显著下降。在细胞壁合成抑制剂胁迫条件下,失活Slt2 MAPK显著抑制了钙调磷酸酶介导的磷酸酶活力,表明两条信号通路在介导细胞壁结构完整性之间存在交互影响（cross talk）。比较转录组分析发现,钙调磷酸酶和Slt2 MAPK介导明显不同的靶标基因,但也存在部分重叠的靶标基因,这些基因涉及细胞壁完整性、胁迫应答反应、产孢及毒力等进程。研究结果为揭示钙调磷酸酶和Slt2 MAPK信号途径的交互作用（interplay）提供了重要依据。

关键词：钙调磷酸酶 Slt2 MAPK 交互作用细胞壁完整性

来源： cnki会议评论

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甘蔗鞭黑粉菌Ram1与Ras调控有性配合与细胞壁完整性