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卵巢上皮性癌细胞培养上清液增强CD_4^+CD_(25)^+调节性T淋巴细胞增殖及免疫抑制功能的实验研究

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中华妇产科杂志 2006年第3期41卷 206-208页

作者：李晓叶枫陈怀增吕卫国程琪谢幸浙江大学医学院附属妇产科医院妇瘤科9 杭州310006 浙江大学医学院附属妇产科医院妇瘤科杭州310006

CD4^CD25^＋调节性T淋巴细胞是一类具有抑制CD4^4和CD8^＋T淋巴细胞活化和增殖功能的免疫调节细胞。最近的研究发现，在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者外周血及腹腔内，这类细胞的比例显著增加，可能是卵巢癌患者免疫功能下降和生存率低下... 详细信息

CD4^CD25^＋调节性T淋巴细胞是一类具有抑制CD4^4和CD8^＋T淋巴细胞活化和增殖功能的免疫调节细胞。最近的研究发现，在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者外周血及腹腔内，这类细胞的比例显著增加，可能是卵巢癌患者免疫功能下降和生存率低下的重要原因之一。我们先前的体外实验也证实，卵巢癌细胞株SKOV3的培养上清液和健康人外周血淋巴细胞共培养后，能诱导其中的CD4^CD25^＋去调节性T淋巴细胞比例增加。为了进一步阐明其机制，我们将卵巢癌细胞培养上清液和纯化的CD4^CD25^＋调节性T淋巴细胞共同培养，观察其增殖、表型及功能是否发生改变。

关键词： T淋巴细胞增殖细胞培养上清液卵巢上皮性癌调节性免疫抑制功能实验研卵巢癌患者 T淋巴细胞活化外周血淋巴免疫调节细胞

HepG2．2．15细胞培养上清液中HBVDNA及其抗原的检测

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中国医学文摘（检验与临床） 2006年第1期20卷 5-6页

作者：管世鹤卢银平刘华平安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室

乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。HepG2．2．15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系，也是目前用来研究HBV... 详细信息

乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。HepG2．2．15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系，也是目前用来研究HBV复制．肝细胞对干扰素（IFN）应答最为合适的细胞模型系统。

关键词： HepG2.2.15细胞细胞培养上清液 HBVDNA HBV抗原乙型肝炎病毒(HBV) 检测肝细胞癌 DNA病毒炎症性肝病 HBV颗粒

岛津细胞培养上清液分析技术在生物制药工艺开发中的应用

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岛津细胞培养上清液分析技术在生物制药工艺开发中的应用

骨髓间充质干细胞培养上清液抑制异体淋巴细胞增殖

中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：刘巧霞李强郝红元黄涛宏岛津企业管理(中国)有限公司

＜正＞开发合适的培养基配方与优化细胞培养条件是生物技术药物生产工艺的核心内容之一。适宜的培养基组成与优化的细胞培养条件对于提高蛋白药物的产率,保证产品批次之间的一致性、稳定关键质量属性等因素至关重要,尤其是抗体药物偶联... 详细信息

＜正＞开发合适的培养基配方与优化细胞培养条件是生物技术药物生产工艺的核心内容之一。适宜的培养基组成与优化的细胞培养条件对于提高蛋白药物的产率,保证产品批次之间的一致性、稳定关键质量属性等因素至关重要,尤其是抗体药物偶联物、双靶点/特异抗体类药物、抗体片段融合蛋白等相对分子量大、结构复杂的抗体类药物,对其重要性不言而喻。

关键词：生物制药细胞培养上清液培养基 LC-MS/MS 过程监控

来源： cnki会议评论

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 469-469页

作者：吴涛白海王存邦路继红欧剑锋兰州军区兰州总医院全军血液病中心兰州730050

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）作为具有多向分化潜能的干细胞，具有广泛的临床应用前景。近年来的研究已经证实，MSCs具有免疫负调节作用，但其具体机制尚不清楚。我们试图通过研究MSCs培养上清液对异体淋巴细胞增... 详细信息

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）作为具有多向分化潜能的干细胞，具有广泛的临床应用前景。近年来的研究已经证实，MSCs具有免疫负调节作用，但其具体机制尚不清楚。我们试图通过研究MSCs培养上清液对异体淋巴细胞增殖的影响，观察MSCs的免疫调节作用，进一步探讨MSCs的免疫调控机制。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养上清液淋巴细胞增殖异体免疫调节作用 MSCs 多向分化潜能临床应用前景免疫调控机制 cells

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中华肝脏病杂志 2005年第9期13卷 689-691页

作者：郑临杨益大吕国才阮冰盛吉芳陈亚岗浙江大学医学院附属第一医院传染病科杭州310003

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释... 详细信息

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释放试验测定可溶性TRAIL和膜性TRAIL 对HepG2细胞的毒性作用,并用Annexin V染色法验证凋亡细胞的产生。结果经100 ng/ml LPS刺激后, 只有9.8%的巨噬细胞有TRAIL的表达,而培养上清中可溶性TRAIL达(67.4±5.1)ng/ml,有明显增加。巨噬细胞培养上清液中可溶性TRAIL能溶解HepG2细胞,经Annexin V染色法证实为细胞凋亡,此作用可被特异性TRAIL抗体阻断。结论LPS能增加巨噬细胞可溶性TRAIL表达,并诱导肝细胞凋亡,提示TRAIL在病毒性肝炎发病机制中有重要作用。

关键词：脂多糖类细胞凋亡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HepG2细胞可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体脂多糖(LPS) 肝细胞凋亡巨噬细胞可溶性TRAIL 细胞培养上清液

多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子对血管新生作用的研究

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中华血液学杂志 2005年第10期26卷 602-606页

作者：孙春艳胡豫吴涛王雅丹何文娟华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所武汉430022

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平及其与MM细胞诱导的血管新生的关系。方法采用RT-PCR法、Western blot法及ELISA法检测MM细胞系KM3、RPMI8226细胞BDNF的表达及分泌。采用MTT法观察MM细胞培养上清液对... 详细信息

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平及其与MM细胞诱导的血管新生的关系。方法采用RT-PCR法、Western blot法及ELISA法检测MM细胞系KM3、RPMI8226细胞BDNF的表达及分泌。采用MTT法观察MM细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用;用改良的Boyden小室法观察MM细胞培养上清液对HUVEC迁移的影响;采用体外小管形成实验,观察MM细胞培养上清液对HUVEC分化的影响。结果KM3、RPMI8226细胞不仅表达BDNF mRNA,也表达和分泌BDNF蛋白,BDNF的基础分泌水平在其生物学作用范围内。KM3、RPMI8226细胞培养上清液均可明显促进HUVEC增殖,含50.0%KM3细胞培养上清液组和完全KM3细胞培养上清液组HUVEC数分别为对照组的(1.85±0.23)倍和(2.16±0.29)倍(P细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为1.85±0.23,完全KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为2.16±0.29,与对照组比较,差异有统计学意义(P值均细胞表达和分泌BDNF,BDNF可能参与MM细胞诱导的血管新生。

关键词：多发性骨髓瘤脑源性神经营养因子血管新生多发性骨髓瘤细胞细胞培养上清液 BDNF蛋白 HUVEC ELISA法检测 Boyden小室 RT-PCR法

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丙型肝炎病毒体外可感染树鼩肝细胞

中华肝脏病杂志 2005年第11期13卷 805-807页

作者：赵西平田展飞陈义春杨春田德英杨东亮郝连杰华中科技大学同济医学院同济医院感染科武汉430030 广西肿瘤研究所华中科技大学同济医学院同济医院临床免疫研究室

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)体外感染树鼩原代肝细胞。方法用HCV RNA阳性血清感染原代树鼩肝细胞,并用感染后细胞培养上清液进行传代感染,通过检测受染肝细胞正、负链HCV RNA、培养上清液中包装后HCV RNA,并对比分析感染前后病毒准种变... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)体外感染树鼩原代肝细胞。方法用HCV RNA阳性血清感染原代树鼩肝细胞,并用感染后细胞培养上清液进行传代感染,通过检测受染肝细胞正、负链HCV RNA、培养上清液中包装后HCV RNA,并对比分析感染前后病毒准种变化等指标,评价感染是否成功。结果受染树鼩肝细胞自第5-10天可检出负链HCV RNA,而正链RNA至感染后第14天仍可检出;感染后3-14 d培养上清液中可检出HCV RNA,且呈RNA酶抗性;培养上清液中病毒可传代感染新的树鼩肝细胞;感染前后HCV准种分析显示树鼩肝细胞可被特定的准种选择性感染,而传代感染后肝细胞可检出新的准种。结论原代树鼩肝细胞体外可被HCV感染且支持病毒复制。

关键词：肝炎病毒丙型树鼩科肝细胞体外感染丙型肝炎病毒(HCV) 原代肝细胞树鼩细胞培养上清液 RNA酶

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牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证

中国生物制品学杂志 2021年第10期34卷 1232-1235,1242页

作者：牛步青胡术然高有张海浩陈蕾西常亚军易力姚宇峰任芳芳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650503

目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。

关键词：牛多瘤病毒聚合酶链反应细胞培养上清液

转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析

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中华检验医学杂志 2005年第9期28卷 947-952页

作者：崔杰峰刘银坤申华丽张丽君张予孙瑞霞陈洁代智宋海燕复旦大学附属中山医院肝癌研究所上海200032 复旦大学化学系

目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进... 详细信息

目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。

关键词：癌,肝细胞肿瘤转移 S100A4 人肝癌细胞系转移潜能差异蛋白验证 pcDNA3 细胞培养上清液逆转录聚合酶链反应