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中国海洋大学学报（自然科学版） 2024年第11期54卷 65-82页

作者：王璐吴琼银静茹隋正红中国海洋大学海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室山东青岛266003

为了探究细胞周期检查点的调控对龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)四分孢子体发育的影响,本研究中对龙须菜细胞周期检查点部分基因进行分离鉴定及基因表达分析。从不同品系不同发育阶段的数字表达谱数据中,筛选得到与细胞周期检查... 详细信息

为了探究细胞周期检查点的调控对龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)四分孢子体发育的影响,本研究中对龙须菜细胞周期检查点部分基因进行分离鉴定及基因表达分析。从不同品系不同发育阶段的数字表达谱数据中,筛选得到与细胞周期检查点通路相关的差异表达基因ATR、ATM、RAD17和RAD9。通过基因克隆、序列比对和结构域预测,确认了其存在于龙须菜中,对4个基因上游2000 bp进行启动子预测发现,4个基因均含有与光照和植物激素相关的启动子元件;通过荧光定量PCR检测4个基因在良种981、WLP-1品系和野生型龙须菜的四分孢子体发育Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的表达水平变化趋势发现,在WLP-1品系的Ⅰ期,4个基因表达呈现上升趋势;在该品系Ⅱ期,ATR、ATM和RAD9表达呈上升趋势,WLP-1在四分孢子体发育的Ⅰ期,细胞周期检查点相关基因表达相对活跃,表明此时其DNA复制和细胞分裂旺盛,这可能是WLP-1品系高育的原因。良种981在Ⅰ期ATR、ATM和RAD17相对表达量与野生型相比无显著变化,而RAD9有显著降低的趋势。进入Ⅱ和Ⅲ期后,与野生型相比,ATR、ATM和RAD17的相对表达量呈现显著上升的趋势,结合对其形成四分孢子性状的观察,推测在良种981四分孢子体放散的Ⅱ期,DNA损伤可能没有完全修复,因而最终导致低育。

关键词：龙须菜细胞周期检查点荧光定量PCR 育性四分孢子体

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tRNA转运与细胞周期检查点

生命的化学 2009年第3期29卷 335-337页

作者：张新生左云飞任双义大连医科大学检验医学院生化检验教研室大连116044 大连医科大学附属第二医院普外科大连116023

DNA损伤检查点蛋白质与细胞周期进程的关系在分子水平尚不明了。tRNA转运和转录因子Gcn4是细胞周期进程关键的中间体分子,其可检测到DNA损伤并延迟细胞周期由G1到S期转变进程。本文对DNA损伤后tRNA转运和细胞周期检查点延迟细胞周期进... 详细信息

DNA损伤检查点蛋白质与细胞周期进程的关系在分子水平尚不明了。tRNA转运和转录因子Gcn4是细胞周期进程关键的中间体分子,其可检测到DNA损伤并延迟细胞周期由G1到S期转变进程。本文对DNA损伤后tRNA转运和细胞周期检查点延迟细胞周期进程的研究进展做一综述。

关键词：细胞周期检查点 DNA损伤 Los1 Gcn4 Cln2

氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎发育以及细胞周期检查点的研究

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氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎发育以及细胞周期检查...

作者：王超汕头大学

学位级别：硕士

前言精液冷冻保存是辅助生殖(assisted reproductive techniques,ART)领域中的一项重要技术,是保存男性生育力的一种重要方式,广泛应用于可能会导致睾丸衰竭或者射精机能障碍的放、化疗以及手术治疗之前。但是精子冷冻保存的最大缺陷就... 详细信息

前言精液冷冻保存是辅助生殖(assisted reproductive techniques,ART)领域中的一项重要技术,是保存男性生育力的一种重要方式,广泛应用于可能会导致睾丸衰竭或者射精机能障碍的放、化疗以及手术治疗之前。但是精子冷冻保存的最大缺陷就是解冻后的精子质量不满意,包括活率、活力以及精子DNA完整性的降低,在不育患者中这种状况尤为突出。目前关于冷冻导致精子DNA损伤的病因尚未完全阐明,其中,冷冻过程诱发氧化应激和过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成被认为起到了主要的作用。氧化应激可导致多种形式的DNA损伤,例如:染色质交联、染色体缺失、碱基氧化、DNA链损伤等。由于H2O2具有较强的氧化活性,并且可以和O2反应持续产生(O2·-)和羟自由基(·OH);另外H2O2来源方便,所以我们的前期实验用不同浓度H2O2作为精子氧化应激性DNA损伤试剂,探索H2O2精子DNA损伤模型,以研究冷冻精子DNA损伤修复反应机制。在真核生物中,DNA损伤激活DNA损伤修复与检查点系统,共同监视DNA损伤,控制DNA的修复、细胞周期进程以及程序化细胞死亡。为了维持基因组的完整性及细胞分裂过程中完全复制的和未损伤的DNA的正确转导,有丝分裂前,真核生物细胞经历了G1/S,intra-S,G2/M细胞周期检查点。检查点信号通路激活后可以短暂性的停止或放慢细胞周期过程,要么为细胞DNA损伤修复所涉及的基因转录的增强及其产物的活动提供足够的时间,要么为引发凋亡过程提供足够的时间。精子缺乏损伤修复系统,但是DNA损伤精子仍然具有受精能力和发育潜能,损伤要在受精后修复。目前胚胎发育过程中损伤修复系统以及细胞周期检查点系统的研究不多,确切作用机制尚不清楚。本实验运用合理的DNA冷冻损伤精子模型,研究氧化应激性DNA损伤精子体外受精(in vitro fertilization,IVF)后早期胚胎的发育,探讨精子的氧化应激性DNA损伤是否激活了受精卵内的细胞周期检查点信号通路来引发有丝分裂细胞周期的阻滞或延迟,以初步探索DNA损伤精子受精后早期胚胎的损伤反应机制。目的1.研究氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎发育情况。2.验证氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎内细胞周期检查点信号通路的激活。方法1.倒置显微镜下观察新鲜精子组和H2O2处理精子组体外受精的受精率,1-细胞胚胎和2-细胞胚胎的卵裂率以及发育情况。2. BrdU掺入法检测新鲜精子组和H2O2处理的精子组体外受精后受精卵S期(DNA合成)开始和持续时间。观察受精卵排出第二极体的时间来评估受精卵第一次有丝分裂G1期开始的时间。结合受精卵完成第一次卵裂(即M期)结束的时间,求出G1、G2/M期,比较新鲜精子组和H2O2处理的精子组体外受精后一细胞胚胎细胞周期各时相(G1、S、G2/M)经历的时间,验证G1、intra-S或G2/M细胞周期检查点的激活。结果1.新鲜精子组和1.0mM H2O2处理精子组的受精率分别为71.4±16.1%和62.6±12.3%,差别无统计学意义(P>0.05)。受精后第24小时观察1-细胞胚胎卵裂率分别为98.3±0.5%和97.2±1.6%,差别无统计学意义(P>0.05)。受精后第48小时观察2-细胞胚胎卵裂率分别为95.3±0.7%和87.3±6.5%,差别无统计学意义(P>0.05)。新鲜精子组1-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后20±0.9小时,H2O2处理精子组1-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后22.5±1.1小时,差别有统计学意义(P细胞卵裂延迟时间平均约2.5个小时。新鲜精子组2-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后48.8±1.5小时,H2O2处理精子组2-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后51±2.7小时,差别无统计学意义(P>0.05)。因此与新鲜精子组相比,H2O2处理精子组1-细胞期胚胎发生了卵裂延迟,2-细胞期胚胎的卵裂速度基本达到了正常胚胎水平。2.新鲜精子组和1.0mM H2O2处理精子组G1期开始的时间分别为精卵结合后1.8±1.0小时和1.7±1.1小时,差别无统计学意义(P>0.05)。S期开始的时间分别为精卵结合后9.8±0.6小时和10.3±1.0小时,差别无统计学意义(P>0.05),S期结束的时间分别为精卵结合后17.0±0.8小时和17.7±0.6小时,差别无统计学意义(P>0.05)。因此,新鲜精子组S期的平均持续时间约为7.2小时,1.0mM H2O2处理精子组S期的平均持续时间约为7.4小时;新鲜精子组G1期平均持续时间

关键词：精子冷冻氧化应激 IVF DNA损伤修复细胞周期检查点

乙酰基转移酶Tip60(KAT5)的功能研究进展

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生物化学与生物物理进展 2015年第1期42卷 25-31页

作者：张赫张士猛周平坤军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

Tip60(KAT5)属于MYST乙酰基转移酶家族,同时它也是进化上非常保守的Nu A4蛋白质复合体的重要成员.过去十几年的研究证实,Tip60一方面可以作为转录调控因子结合核受体(如雄激素受体,AR)或c-MYC、AICD/Fe65、NCo R、E2F等转录因子来激活... 详细信息

Tip60(KAT5)属于MYST乙酰基转移酶家族,同时它也是进化上非常保守的Nu A4蛋白质复合体的重要成员.过去十几年的研究证实,Tip60一方面可以作为转录调控因子结合核受体(如雄激素受体,AR)或c-MYC、AICD/Fe65、NCo R、E2F等转录因子来激活或抑制下游基因的表达,另一方面,KAT5可以乙酰化一系列蛋白来调控这些蛋白质的活性及稳定性,进而调控DNA损伤修复反应、细胞周期进程、细胞周期检查点的激活、凋亡、代谢及自噬等重要细胞功能.此外,Tip60在肿瘤的发生发展及转移、胚胎发育等过程中也发挥着至关重要的作用.本文将主要对Tip60近几年的研究进展做一个综述.

关键词： KAT5 乙酰化 DNA损伤修复细胞周期检查点凋亡

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生理条件下的S期检查点

生物化学与生物物理进展 2006年第2期33卷 122-126页

作者：苏华杭海英中国科学院生物物理研究所北京100101

细胞周期检查点在细胞遭遇DNA损伤因子的攻击或遇到营养缺乏等不利因素作用时,能够暂时阻止或减慢细胞周期的进程,是细胞在长期进化中发展起来的抵御DNA损伤的重要机制.不仅如此,最近的研究表明,在正常生理条件下,存在一种S期检查点,对... 详细信息

细胞周期检查点在细胞遭遇DNA损伤因子的攻击或遇到营养缺乏等不利因素作用时,能够暂时阻止或减慢细胞周期的进程,是细胞在长期进化中发展起来的抵御DNA损伤的重要机制.不仅如此,最近的研究表明,在正常生理条件下,存在一种S期检查点,对DNA复制的速度进行调控.从分子水平而言,这种调控作用可能是通过一系列细胞周期调控蛋白如ATR、9-1-1复合体、Chk1、Cdc25A和CDK2等的作用来实现的.这种调节作用对细胞至关重要,它使DNA复制速度不致于过快,从而减少复制过程中发生错误的几率,维护基因组的稳定性.

关键词：细胞周期检查点 DNA复制调节机制

3Gyγ射线对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响

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核技术 2005年第8期28卷 621-624页

作者：夏景光李文建魏巍赵靖金晓东高清祥中国科学院近代物理研究所兰州大学生命科学学院兰州730000

本实验旨在研究电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响,为肿瘤的放射治疗提供科学依据。以3Gyγ射线照射指数生长期的肿瘤细胞,用流式细胞术测定细胞DNA含量并确定细胞周期各时相的细胞百分比。实验结果显示,γ射线照射后,SMMC-7721... 详细信息

本实验旨在研究电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响,为肿瘤的放射治疗提供科学依据。以3Gyγ射线照射指数生长期的肿瘤细胞,用流式细胞术测定细胞DNA含量并确定细胞周期各时相的细胞百分比。实验结果显示,γ射线照射后,SMMC-7721,hepG2和HO-8910细胞的G2/M期发生明显阻滞,且都在辐射后12h累积达到最大值,但S期只发生短暂的延迟,即辐射后6h明显累积,之后下降至接近对照水平或低于对照;Hela细胞的G2/M期和S期均发生显著阻滞。实验结果说明,电离辐射后,不同肿瘤细胞的G2/M期和S期检查点的激活和维持是有差异的。

关键词：电离辐射肿瘤细胞细胞周期细胞周期检查点

HPV16型E6蛋白诱导PHK多倍体的形成与消除细胞纺锤体检查点无关

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中国肿瘤临床 2009年第1期36卷 38-41页

作者：陈凌沈柱伍津津第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆市400042 第三军医大学西南医院皮肤科

目的：人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus，HPV 16）与包括宫颈癌在内的多种肿瘤的发生明确相关。诱导宿主基因组不稳定性可能是HPV16致瘤的重要机制之一。本研究对HPV16型E6蛋白诱导人原代角质形成细胞（primary human keratinoc... 详细信息

目的：人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus，HPV 16）与包括宫颈癌在内的多种肿瘤的发生明确相关。诱导宿主基因组不稳定性可能是HPV16致瘤的重要机制之一。本研究对HPV16型E6蛋白诱导人原代角质形成细胞（primary human keratinocytes，PHK）形成多倍体以及对PHK有丝分裂纺锤体检查点的影响进行初步的探索。方法：取正常人包皮组织，分离表皮，常规方法培养PHK。脂质体介导法将pBabe-16E6质粒转染逆转录病毒包装细胞PA317。挑选G418抗性克隆，检测病毒滴度，将表达HPV16型E6蛋白的高滴度逆转录病毒感染PHK。通过逆转录PCR法和免疫印迹法证实HPV16E6成功感染PHK。PHK经Nocodazole处理后，利用流式细胞仪分析多倍体形成，于不同时间点收集细胞、固定，进行抗磷酸化组蛋白染色，利用流式细胞仪分析细胞有丝分裂指数差异。结果：HPV16型E6成功感染PHK，并呈功能性表达。HPV16型E6可诱导PHK形成多倍体，表达E6蛋白的PHK和对照细胞以相似的动力学进入和退出有丝分裂。结论：HPV16型E6对PHK有丝分裂过程中的纺锤体检查点无直接影响，鉴于有丝分裂后期检查点在细胞有丝分裂过程中较持久和严格的作用，本研究结果提示，对有丝分裂后期检查点的作用可能是HPV16型E6蛋白诱导宿主细胞多倍体形成的重要机制。为进一步探讨HPV相关肿瘤的分子发生机制奠定了一定基础。

关键词：人乳头瘤病毒 E6蛋白原代角质形成细胞细胞周期检查点多倍体

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ATM/H2AX与冷冻精子DNA损伤修复

中华男科学杂志 2011年第7期17卷 634-638页

作者：王超李志凌汕头大学医学院第一附属医院生殖中心广东汕头515041

精液冷冻保存是辅助生殖领域中的一项重要技术,但冷冻本身可引起精子DNA损伤,其中过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成起主要作用;而DNA损伤精子仍可以受精形成胚胎,影响生殖结局。蛋白激酶ATM(ataxia-telangiectasia mutat... 详细信息

精液冷冻保存是辅助生殖领域中的一项重要技术,但冷冻本身可引起精子DNA损伤,其中过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成起主要作用;而DNA损伤精子仍可以受精形成胚胎,影响生殖结局。蛋白激酶ATM(ataxia-telangiectasia mutated)是DNA损伤的信号感受器,可启动级联反应磷酸化多种蛋白分子调控DNA损伤修复和细胞周期检查点。在ATM的下游分子中,组蛋白H2AX(histone H2AX)被磷酸化激活后参与了DNA损伤精子受精后的修复,与ATM相互作用共同调控胚胎发育过程的细胞周期。ATM/H2AX参与DNA损伤修复以及细胞周期检查点信号转导,以及在氧化应激性DNA损伤修复中的潜在作用,提示其可能参与了冷冻精子氧化应激性DNA损伤的修复过程。

关键词： ATM/H2AX DNA损伤修复细胞周期检查点精子冷冻

共济失调毛细血管扩张突变基因在胃癌中的研究现状

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中国临床药理学杂志 2022年第23期38卷 2907-2910页

作者：吴妍雷慧君陈贝贝陈小兵郑州大学附属肿瘤医院、河南省肿瘤医院肿瘤内科河南郑州450008

共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因是共济失调毛细血管扩张症唯一的致病基因。由于ATM基因突变使其编码的ATM蛋白表达缺失,从而丧失对下游基因的调控作用,使得受损伤DNA的合成受到抑制,阻碍DNA的修复过程,进而导致染色体的断裂和基因... 详细信息

共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因是共济失调毛细血管扩张症唯一的致病基因。由于ATM基因突变使其编码的ATM蛋白表达缺失,从而丧失对下游基因的调控作用,使得受损伤DNA的合成受到抑制,阻碍DNA的修复过程,进而导致染色体的断裂和基因组的不稳定,最终引起细胞凋亡率和肿瘤发生率的升高。ATM基因突变与胃癌的发生、侵袭及转移相关。ATM突变或缺失的这部分胃癌患者对放疗、铂类化疗的敏感性增加,并且在免疫抑制药应用中观察到明显的临床获益。靶向ATM突变抑制药的研发在与放化疗及其他小分子靶点药物治疗的联合应用中表现出更大的生存获益。本文结合近期对ATM在胃癌中的研究进展进行综述,旨在为胃癌的精准化治疗提供潜在的新靶点。

关键词：共济失调毛细血管扩张突变胃癌同源重组修复细胞周期检查点靶向治疗