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MCF-7细胞评价老龄渗滤液经IME-Fenton处理后酚类提取物的雌激素效应

中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：陈春艳李春艳唐小虎张林冲郭双琴金宇保灵生物药品有限公司

BHK-21细胞在大规模转瓶培养过程中,事前无任何可疑征兆,细胞从瓶壁呈线形脱落痕迹,经不断的总结,发现这一现象的发生与细胞培养基中所加抗生素、血清、培养器皿的洁净、支原体污染等有关系。出现划痕现象以后,首要的工作是进行控制,防... 详细信息

BHK-21细胞在大规模转瓶培养过程中,事前无任何可疑征兆,细胞从瓶壁呈线形脱落痕迹,经不断的总结,发现这一现象的发生与细胞培养基中所加抗生素、血清、培养器皿的洁净、支原体污染等有关系。出现划痕现象以后,首要的工作是进行控制,防止事态蔓延,使经济损失降至最小,实践证明相关的综合措施在问题初期是行之有效的。反之,如果只为寻找原因而不采取措施,反倒对局面控制不及时,不仅会带来较大的济济损失甚至会使细胞全线崩溃,对下一步种细胞的复壮及生产用细胞的全面恢复带来极大困难。

关键词：细胞划痕原因分析预防控制

来源： cnki会议评论

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环境科学学报 2016年第3期36卷 1121-1128页

作者：索俊昌赵玲尹平河陆钢刘鹏暨南大学环境学院广州市环境暴露与健康重点实验室广州510632 暨南大学化学系广州510632 东莞道江环保科技有限公司东莞523808

成分复杂的垃圾渗滤液经处理后,研究其中残留的极低浓度的酚类环境内分泌干扰物的雌激素效应及其对生态环境的毒性作用具有非常重要的实际价值.本文选择对雌激素敏感的MCF-7人类乳腺癌细胞进行体外培养,将老龄渗滤液原液、经过内部微电... 详细信息

成分复杂的垃圾渗滤液经处理后,研究其中残留的极低浓度的酚类环境内分泌干扰物的雌激素效应及其对生态环境的毒性作用具有非常重要的实际价值.本文选择对雌激素敏感的MCF-7人类乳腺癌细胞进行体外培养,将老龄渗滤液原液、经过内部微电解（IME）和内部微电解结合芬顿试剂（IME-Fenton）处理后的渗滤液酚类提取液稀释10-107倍,采用MTT法测定MCF-7细胞的增殖和细胞划痕损伤实验评价渗滤液中酚类物质的雌激素效应,并探讨了活性炭在反应中对酚类物质的去除效果.结果表明,渗滤液中酚类提取物对MCF-7细胞增殖在浸染72 h后达到最大;与渗滤液原液相比,渗滤液经IME和IME-Fenton处理后,最大增殖效应分别下降了85%和110%,酚类提取物减缓了MCF-7细胞的迁移速度;活性炭对渗滤液中酚的吸附主要发生在反应前30 min,渗滤液经活性炭吸附后的酚类提取物稀释10-10^7倍仍表现出细胞毒性.渗滤液经IME-Fenton处理后降低了酚类物质进入环境引起的危害,MCF-7细胞增殖和细胞划痕也为检测浓度低至10^-15g·L^-1的酚类雌激素提供新方法.

关键词：老龄渗滤液 IME-Fenton 雌激素 MCF-7 细胞划痕

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肿瘤细胞迁移过程的动态评估方法

中国药理学通报 2010年第1期26卷 128-131页

作者：胡剑江雷洪涛侯燕鸣王毅中国中医科学院医学实验中心形态学实验室北京100700

目的建立肿瘤细胞迁移过程的多角度、实时动态、定量评估方法。方法建立细胞迁移观测模型,分别加入小檗碱及Rg3培养24h,用活细胞工作站随机选取8个不同观测点,连续观测24h。所取得的数据从迁移面积、距离、单个细胞迁移速度、单位面积... 详细信息

目的建立肿瘤细胞迁移过程的多角度、实时动态、定量评估方法。方法建立细胞迁移观测模型,分别加入小檗碱及Rg3培养24h,用活细胞工作站随机选取8个不同观测点,连续观测24h。所取得的数据从迁移面积、距离、单个细胞迁移速度、单位面积细胞增殖数量等多角度进行分析。结果该方法可以长时间观察划痕内细胞的迁移过程;小檗碱高、中剂量组(25,12.5μmol·L-1)可抑制A549细胞的迁移过程(P细胞增殖数量4项指标的结果基本一致,人参皂苷Rg3(0.1mmol·L-1)可以在各时间点(6,12,24h)抑制细胞迁移速度(P细胞迁移面积及距离(P细胞增殖(P细胞迁移过程的动态观察。

关键词：细胞迁移活细胞工作站细胞划痕动态观察小檗碱 Rg3

三叶因子-3对甲状腺乳头状癌细胞增殖及迁移作用的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2015年第13期29卷 1194-1198页

作者：郑晓春张婷婷吴靖芳张文静张静王保芝张家口学院护理学院河北张家口075000 河北北方学院组胚教研室河北医科大基础医学院解剖教研室

目的:应用小发卡状RNA(shRNA)沉默TFF3基因表达,探索其对人甲状腺癌乳头状癌K1细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染法将靶向TFF3基因的TFF3-shRNA瞬时转染人甲状腺乳头状癌K1细胞,使相应的基因沉默。实验设空白对照组、阴性对照... 详细信息

目的:应用小发卡状RNA(shRNA)沉默TFF3基因表达,探索其对人甲状腺癌乳头状癌K1细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染法将靶向TFF3基因的TFF3-shRNA瞬时转染人甲状腺乳头状癌K1细胞,使相应的基因沉默。实验设空白对照组、阴性对照组和实验组。分别采用逆转录PCR、蛋白质印迹法检测转染TFF3-shRNA后K1细胞中TFF3mRNA及其蛋白的表达;CCK-8实验检测3组细胞增殖能力的改变,细胞划痕试验检测K1细胞侵袭能力的变化。结果:1成功将携有TFF3-shRNA基因的重组质粒Ca#HSH018037-4-HIVmU6转染K1细胞;2RT-PCR检测TFF3mRNA的表达,TFF3基因沉默后TFF3mRNA表达降低,是空白对照组的(0.38±0.11)倍(P0.05);3 Western blot提示TFF3基因沉默后TFF3蛋白表达降低59.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P细胞划痕检测K1细胞侵袭能力,实验组(TFF3-shRNA组)K1细胞的侵袭能力减弱,划痕宽度与空白对照组比较减少57.1%,差异有统计学意义(P细胞增殖能力,通过生长曲线分析干扰组K1细胞生长明显慢于空白对照组细胞(P细胞在6、12、24、36、48h的增殖抑制率分别为16.6%、26.6%、33.6%、33.8%、35.0%,与阴性对照组相比,K1细胞增殖能力减弱。结论:TFF3基因沉默后可引起mRNA的降解、蛋白翻译降低,并抑制K1细胞的侵袭与增殖能力。

关键词： K1细胞 TFF3 增殖侵袭 CCK-8 细胞划痕

汉赛巴尔通体效应蛋白BepE与血管内皮细胞迁移的相关性研究

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中国动物传染病学报 2021年第5期29卷 1-6页

作者：蔡雨豪王蒙王春艳丁田耘张浩然袁聪俐上海交通大学农业与生物学院上海200240

本研究利用SacB介导的同源重组技术构建汉塞巴尔通体效应蛋白BepE的缺失突变菌株Bhe-ΔBepE以及效应蛋白BepE的回补表达菌株Bhe-pBepE。将Bhe、Bhe-ΔBepE与Bhe-pBepE分别感染人血管内皮细胞(HUVEC),24 h后进行细胞划痕实验,在0 h、6 h... 详细信息

本研究利用SacB介导的同源重组技术构建汉塞巴尔通体效应蛋白BepE的缺失突变菌株Bhe-ΔBepE以及效应蛋白BepE的回补表达菌株Bhe-pBepE。将Bhe、Bhe-ΔBepE与Bhe-pBepE分别感染人血管内皮细胞(HUVEC),24 h后进行细胞划痕实验,在0 h、6 h、12 h与18 h对划痕区域进行定点拍摄,通过计算细胞迁移率比较三种菌感染后的HUVEC迁移能力。结果显示,3种菌感染后的HUVEC迁移能力并无显著区别,即Bhe效应蛋白BepE并没有促进血管内皮细胞迁移的作用。

关键词：汉赛巴尔通体效应蛋白BepE 基因敲除细胞划痕

黑曲霉发酵制备荔枝果壳原花青素工艺优化及其对HaCaT细胞增殖和迁移作用

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现代食品科技 2024年

作者：董丽红郑德瑜张名位张瑞芬黄菲马勤赵东郭朝万贾栩超广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室广东丸美生物技术股份有限公司

采用黑曲霉对荔枝果壳进行发酵，研究发酵时间、接种量、料液比对荔枝果壳原花青素（LPPC）得率的影响，优化荔枝果壳发酵工艺条件，分析发酵前后荔枝果壳中原花青素、总酚和总黄酮含量以及单体酚的组成和含量的变化，评价发酵前后LPPC... 详细信息

采用黑曲霉对荔枝果壳进行发酵，研究发酵时间、接种量、料液比对荔枝果壳原花青素（LPPC）得率的影响，优化荔枝果壳发酵工艺条件，分析发酵前后荔枝果壳中原花青素、总酚和总黄酮含量以及单体酚的组成和含量的变化，评价发酵前后LPPC的抗氧化活性以及对Ha Ca T增殖和迁移作用。通过单因素结合正交试验优化确定最佳工艺条件为发酵时间7d，接种量2.0%(V/V)，料液比1:10.0(g/m L)，在该发酵工艺条件下测得LPPC得率为3.77%(m/m)。与未发酵相比，发酵后荔枝果壳中原花青素、总酚和总黄酮含量分别提高了112.75%、53.86%和73.02%，鉴定出7种主要单体酚含量均显著增加；且发酵后LPPC的ABTS和FRAP抗氧化活性显著增强。发酵前后LPPC在10、20、40μg/m L质量浓度时对Ha Ca T细胞无增殖作用，但能显著提高划痕细胞迁移能力，且发酵后LPPC的细胞迁移率较发酵前分别提高了7.89%、40.89%和75.37%。因此黑曲霉发酵能显著增加荔枝果壳中可提取的原花青素含量，提高其抗氧化活性，有效促进角质细胞划痕创伤愈合，研究结果为LPPC应用于表皮损伤修复功能方面提供理论依据。

关键词：荔枝果壳黑曲霉发酵原花青素细胞划痕迁移率创伤愈合

珍珠发酵液对人角质形成细胞HaCaT增殖和迁移的影响

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药物生物技术 2022年第2期29卷 158-162页

作者：张丽华曹福敏王菁莫家欢陈凡雨罗波沈鑫忠杨安全浙江欧诗漫集团有限公司浙江德清313200 欧诗漫生物股份有限公司浙江德清313200 浙江省淡水珍珠深加工工程技术研究中心浙江德清313200 浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310058

利用人永生化角质细胞生长实验,研究珍珠发酵液对细胞划痕迁移的影响,进而研究珍珠发酵液的细胞修护能力。本研究以淡水珍珠为原料,进行发酵获得珍珠发酵液,检测其理化性质。通过培养获得角质细胞,CCK8法评估细胞生存能力;细胞划痕实验... 详细信息

利用人永生化角质细胞生长实验,研究珍珠发酵液对细胞划痕迁移的影响,进而研究珍珠发酵液的细胞修护能力。本研究以淡水珍珠为原料,进行发酵获得珍珠发酵液,检测其理化性质。通过培养获得角质细胞,CCK8法评估细胞生存能力;细胞划痕实验检测珍珠发酵液对角质细胞的迁移的能力,评估珍珠发酵液的促愈合功效。研究表明,珍珠发酵液在浓度为0.1 mL/mL时,对角质细胞没有毒性,不影响细胞生长速率,排除细胞增殖对细胞迁移的影响。在细胞划痕实验中,发现珍珠发酵液在0.1 mL/mL浓度作用于角质细胞48 h后,细胞迁移率达到了96.54%±1.53%,与空白组相比,有显著性差异(P细胞迁移,且对细胞无毒性,可为珍珠发酵液修护能力提供依据。

关键词：珍珠发酵液人永生化角质细胞细胞划痕迁移率修护

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STK33在肺癌细胞转移中作用的研究

STK33在肺癌细胞转移中作用的研究

作者：魏学强昆明医科大学

学位级别：硕士

科技带动着人类的进步。近年来,随着科学技术的迅猛发展,医学也有了很大的进步与突破,但对于癌症的治疗仍然是无法攻克的难题,而且肿瘤的发病率和死亡率还在不断的迅速上升。虽然治疗技术方面有了较大的进步与提高,但五年生存率仍然没... 详细信息

科技带动着人类的进步。近年来,随着科学技术的迅猛发展,医学也有了很大的进步与突破,但对于癌症的治疗仍然是无法攻克的难题,而且肿瘤的发病率和死亡率还在不断的迅速上升。虽然治疗技术方面有了较大的进步与提高,但五年生存率仍然没有明显的改善,究其原因主要是大部分患者就诊时已属晚期,失去了最佳的治疗机会。癌细胞最终都将发生转移,当然肺癌更是不能例外,依旧是世界范围内发生率和病死率居首位的恶性肿瘤,而在这个居于首位的恶性肿瘤当中约85%都是非小细胞肺癌(NSCLC).由此对肺癌尤其是NSCLC早期诊断和治疗的研究成为全球医学界都在不断探索的主要目标之一。其中基因治疗成为目前最热门的研究途径,因为大量的研究结果显示这一途径有望成为肺癌治疗的有效办法。而STK33是迄今发现的作用最新的非癌基因,定位于人类染色体11p15.3区域。而对于很多的肿瘤来说,其发生的主要原因是因为某些特殊基因的功能异常从而和肿瘤的的发生具有相关性,研究发现STK33所在的染色体区域的多个基因与临床多种疾病的发生、发展具有相关性。并且有研究显示它还在其它许多肿瘤组织中都表达。在我们的前期研究当中已经证实STK33在肺癌、乳腺癌、结肠癌中都为高表达。为此本研究通过Trans-well技术对STK33基因沉默后的肺癌细胞侵袭数目和距离,以及实时荧定量RT-PCR技术和western-blot技术检测整合素的mRNA和蛋白在STK33siRNA-2实验组和对照的正常肺癌细胞组中的不同表达进行分析,探讨STK33对肺癌细胞转移情况的影响。目的：分析丝氨酸／苏氨酸激酶33基因(STK33)在肺癌细胞中表达的高低情况,以及其对肺癌细胞侵袭能力的影响。探讨STK33对肿瘤转移相关膜表面蛋白(如：整合素)表达的影响,从而研究STK33是否对肺癌细胞的转移具有一定的影响。方法：通过体外实验检测已建立的肺癌细胞系,采用Trans-well技术检测肺癌细胞的侵袭和细胞划痕法分析STK33对肺癌细胞侵袭能力的影响。用已经建立稳定的细胞系,采用实时荧定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction, real-time quantitative RT-PCR)和蛋白质转移吸印技术(western-blot)方法检测STK33对肿瘤转移相关膜表面蛋白(如：整合素)表达的影响。结果：1. Trans-well技术检测实验组(STK33siRNA-2)的肺癌细胞迁移数目和迁移距离均小于对照组,有显著的差异(P=0.000)。2.实日荧定量RT-PCR技术和western-blot技术检测实验组(STK33siRNA-2)整合素mRNA和蛋白的表达量均小于对照组,有显著的差异(P=0.000)。结论：STK33基因与肺癌细胞的侵袭有着密切的相关性,值得去深入研究和探索。

关键词：丝氨酸/苏氨酸激酶33基因(STK33) 非小细胞肺癌波形蛋白细胞划痕蛋白质转移吸印技术(westem-blot)

赤芍总苷抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制研究

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华西药学杂志 2019年第3期34卷 243-248页

作者：高晓会张亚利张治业郭双双郭艳珍陈小兵河南科技大学第一附属医院肿瘤内科

目的探究赤芍总苷(total paeony glycoside,TPG)对人肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并进一步研究其潜在的调控机理。方法以人肺癌A549细胞作为细胞研究模型,分别给予0、50、100、200μg·mL^-1的TPG处理12、24 h,进行时间-剂量效应分... 详细信息

目的探究赤芍总苷(total paeony glycoside,TPG)对人肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并进一步研究其潜在的调控机理。方法以人肺癌A549细胞作为细胞研究模型,分别给予0、50、100、200μg·mL^-1的TPG处理12、24 h,进行时间-剂量效应分析,并选定100μg·mL^-1TPG处理24 h为机制研究模型;采用小干扰RNA(si AKT)干预Akt蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度和时间点TPG对人肺癌A549细胞增殖抑制的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测Akt、MMP2、p-Akt和MMP9蛋白表达的水平;采用细胞划痕检测TPG对人肺癌A549细胞迁移的能力;采用Transwell实验检测TPG对A549细胞迁侵袭能力的影响。结果MTT试验显示:TPG对A549细胞的生长呈剂量和时间依赖性抑制作用;Western Blot结果显示:与对照组比较,各处理组随着TPG剂量递增,Akt、p-Akt、MMP2和MMP9蛋白表达的水平呈现剂量依赖性下降;细胞划痕结果显示:TPG可呈剂量依赖性抑制A549细胞的迁移;Transwell试验表明:TPG可抑制A549细胞的侵袭。采用si AKT联合TPG处理,细胞划痕和Transwell试验发现:与TPG单独处理组比较,TPG+si AKT联合处理抑制A549细胞的迁移和侵袭更显著。Western Blot检测发现:与TPG单独处理组比较,TPG+si AKT联合处理组Akt、p-Akt、MMP2和MMP9蛋白表达的水平均显著下降。结论TPG可抑制人肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其分子机制可能是通过抑制Akt通路的激活,进而降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达,研究结果为TPG的临床应用提供了实验依据。

关键词：赤芍赤芍总苷 A549细胞 Akt 迁移侵袭细胞划痕 Transwell 肺癌小干扰RNA 作用机制噻唑蓝法蛋白免疫印迹法