检索结果-南通市图书馆

肿瘤 2021年第2期41卷 77-90页

作者：饶利栋邓雪强易轩郝亮南昌大学第二附属医院骨科江西南昌330006 高安市人民医院骨科江西高安330800

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织... 详细信息

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及其相应癌旁组织以及骨肉瘤U2-OS、Saos-2、MG-63和143B细胞(以正常成骨细胞hfoBI-19为对照)中PFKFB3 mRNA及蛋白的表达水平。采用慢病毒感染的方法将携带特异性针对PFKFB3基因的shRNA(shPFKFB3)转入U2-OS细胞,将携带有PFKFB3全基因的重组慢病毒载体转入Saos-2细胞。分别采用CCK-8法及EdU实验检测沉默或上调PFKFB3基因表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,FCM法检测对骨肉瘤细胞的凋亡率的影响,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响,并进一步通过蛋白质印迹法检测对波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)以及PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT和其磷酸化蛋白表达水平的影响。用PI3K抑制剂LY294002处理PFKFB3过表达的Saos-2细胞,再用蛋白质印迹法、CCK-8法、FCM法和Transwell小室侵袭实验检测对PI3K/AKT信号通路,Saos-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果:PFKFB3 mRNA及蛋白在骨肉瘤组织中的表达水平均明显上调(P值均细胞,PFKFB3基因过表达的Saos-2细胞。沉默PFKFB3基因表达后,U2-OS细胞的增殖、迁移及侵袭能力被明显抑制(P值均细胞的凋亡率被明显提高(P细胞的增殖、迁移及侵袭能力被明显提高(P值均细胞的凋亡率被明显抑制(P细胞后,PI3K、AKT以及上调的磷酸化PI3K(phospho-PI3K,p-PI3K)和p-AKT蛋白的表达水平均被明显抑制,Saos-2细胞的增殖及侵袭能力被抑制(P细胞的凋亡率被提高(P<0.05),提示PFKFB3可能通过影响PI3K/AKT信号通路的磷酸化进而促进骨肉瘤生长和转移。结论:PFKFB3可能是骨肉瘤和抗肿瘤靶向治疗的潜在生物标志物。

关键词：骨肉瘤磷酸果糖激酶2 细胞增殖细胞凋亡、细胞运动 PI3K/AKT信号通路

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