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不同强度运动对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及核酸疫苗免疫效果影响的研究

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不同强度运动对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及核酸疫苗免疫效果影响...

作者：宋红利河南大学

学位级别：硕士

目的探讨不同强度运动对小鼠CD4CD25调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)及HBV DNA疫苗(pVAX-S2)免疫效果的影响,为大强度运动造成的免疫抑制现象和适宜运动强度增进健康以及不同强度运动对HBV DNA疫苗免疫效果的影响等提供理论依据... 详细信息

目的探讨不同强度运动对小鼠CD4CD25调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)及HBV DNA疫苗(pVAX-S2)免疫效果的影响,为大强度运动造成的免疫抑制现象和适宜运动强度增进健康以及不同强度运动对HBV DNA疫苗免疫效果的影响等提供理论依据。方法将C57BL/6小鼠96只随机分为四组:正常对照组(Na?ve)、中等强度运动组(MIE)、大强度运动组(HIE)、跑台对照组(CK),构建不同强度运动模型。其中实验各组一半小鼠于运动第0、14和28天肌肉注射HBV DNA疫苗pVAX-S2进行免疫。6周后处死取材,未免疫小鼠利用RT-PCR检测细胞因子基因IL-12p40(IL-12)、TGF-β、IL-35、IL-2的表达;流式细胞仪术检测细胞因子IL-10、IFN-γ、脾总淋巴细胞IL-2Rα(CD25)、CD4T淋巴细胞亚群IL-2Rα(CD25)、CD4CD25Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4CD25Treg的效应分子IL-10的表达。对HBV DNA疫苗pVAX-S2免疫小鼠利用流式细胞仪术检测了T淋巴细胞增殖能力、特异性抗原肽T淋巴细胞毒性及CD4和CD8淋巴细胞亚群IFN-γ和CD4T淋巴细胞亚群IL-4的表达。通过定量ELISA法检测乙肝抗体IgG。结果 1.HIE能够显著增强抗炎症因子IL-10、TGF-β、IL-35等的表达而抑制促炎症因子IL-2、IL-12、IFN-γ的表达。MIE对抗炎症因子IL-10、TGF-β、IL-35的表达影响不显著,但却可以显著增加促炎症因子IL-2、IL-12和IFN-γ的表达。 2.MIE和HIE都显著增加了脾总淋巴细胞IL-2受体(CD25)的表达。 3.HIE显著增加了CD4T淋巴细胞亚群IL-2Rα(CD25)、CD4CD25Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4CD25Treg的效应分子IL-10的表达。而MIE对CD4T淋巴细胞亚群IL-2Rα(CD25)、CD4CD25Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4CD25Treg的效应分子IL-10的表达影响不显著。 4.MIE增强了接种HBV DNA疫苗pVAX-S2后小鼠的细胞免疫功能。如:显著增强了CD4和CD8T细胞IFN-γ的水平、T淋巴细胞增殖能力、特异性抗原肽T淋巴细胞毒性。而HIE却显著减弱了其细胞免疫功能。与对照组相比HIE和MIE组乙肝抗体IgG的产生及CD4 T细胞IL-4的表达不显著。结论大强度运动可能通过增加小鼠CD4CD25Treg的数量和抗炎症因子的表达进而抑制HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。而中等强度运动对小鼠CD4CD25Treg影响不显著,可能主要通过增加促炎症因子的表达来提高机体的免疫功能,进而增强HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。

关键词：不同强度运动 CD4+CD25+调节性T细胞 HBV DNA疫苗细胞免疫反应

介孔硅对O型口蹄疫病毒样颗粒的吸附和缓释性能研究

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介孔硅对O型口蹄疫病毒样颗粒的吸附和缓释性能研究

作者：苏新兰州理工大学

学位级别：硕士

介孔纳米二氧化硅颗粒具有小粒径,高比表面积,大孔容,可调的孔径,表面可化学改性,良好的生物亲和性和稳定性等优异的性质,在生物医学领域应用广泛,已经扩展应用到药物控制给药系统,是各种药物的潜在载体。目前它已经广泛应用于运载抗癌... 详细信息

介孔纳米二氧化硅颗粒具有小粒径,高比表面积,大孔容,可调的孔径,表面可化学改性,良好的生物亲和性和稳定性等优异的性质,在生物医学领域应用广泛,已经扩展应用到药物控制给药系统,是各种药物的潜在载体。目前它已经广泛应用于运载抗癌药物,生物大分子,多肽,核苷酸,抗生素,难溶药物等研究之中。其中作为疫苗载体和佐剂是一个比较新的研究方向之一。理想的疫苗佐剂需要具备安全、有效、靶向和经济的特点,而纳米多孔二氧化硅纳米颗粒就比较符合疫苗佐剂的要求。因此,纳米多孔硅是目前比较的新颖的佐剂材料之一。本实验采用常用的溶胶-凝胶法合成的介孔纳米二氧化硅颗粒,经过透射电子显微镜分析,介孔二氧化硅颗粒呈现球形,粒径在400nm左右,分布基本均匀,存在明显的介孔结构,孔径2-3纳米,介孔材料的特征比较明显。再利用基因工程技术将口蹄疫结构蛋白基因连接在载体上,然后导入大肠杆菌感受态细胞,利用原核表达系统表达和纯化出口蹄疫衣壳蛋白,经过酶切得到Vp0,Vp3,Vp1三部分,在组装缓冲液中组装得到O型口蹄疫病毒样颗粒,粒径分析表明其粒径在20-100纳米之间。将介孔纳米二氧化硅颗粒溶液与口蹄疫病毒样颗粒溶液按照一定的比例简单混合,吸附一段时间后离心,再用PBS溶液重悬后免疫动物。本实验设置了介孔硅纳米颗粒和不同含量口蹄疫病毒样颗粒的两个实验组,并且设置了弗氏完全佐剂和口蹄疫病毒样颗粒组成的传统疫苗作为对照组,通过对比来评价介孔纳米二氧化硅与口蹄疫病毒样颗粒组成的纳米疫苗的免疫效果。疫苗免疫效果评价主要是通过体液免疫反应和细胞免疫反应。本实验采用淋巴细胞增殖实验和淋巴细胞因子含量(IFN-gama)来评估分析豚鼠免疫细胞免疫效果,采用酶联免疫吸附法测定O型口蹄疫特异性抗体水平来反应豚鼠免疫体液免疫效果。实验结果发现发现介孔硅和口蹄疫病毒样颗粒组成的纳米疫苗免疫豚鼠能够引起细胞免疫和体液免疫反应,特别是体液免疫反应,可能由于介孔硅对口蹄疫病毒样颗粒的缓释性能好,导致免疫动物产生的抗体水平高,持续时间长。但是与弗氏佐剂和口蹄疫病毒样颗粒组合的传统疫苗相比较,介孔硅作为疫苗佐剂的抗体水平还是要稍微偏低一些。从攻毒保护效果上看,MSN+VLPs组成的纳米疫苗对动物免疫有一定的效果,两对照组由于没有攻毒也没有发病,PBS组和MSN组攻毒后全部发病,弗氏佐剂+VLPs组与MSN+VLPs2组保护效果相当,M S N+V L P s 1保护效果稍微弱一些,说明攻毒保护效果与抗原免疫剂量存在正相关关系。

关键词：介孔硅病毒样颗粒佐剂缓释体液免疫反应细胞免疫反应

阳离子PLG纳米颗粒包裹对CpG序列免疫佐剂效应影响的研究

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高技术通讯 2003年第4期13卷 62-66页

作者：吕学斌李江凌高荣武梅吴凯源王丽焕沈翼刘崑郑勇刘世贵四川大学生命科学学院草原生物防治工程国家专业实验室成都610064 四川省畜牧科学研究院成都610066

本试验制备了聚乙交酯丙交酯(PLG)纳米颗粒,比较了阳离子PLG纳米颗粒和脂质体作为载体包裹CpG分子对小鼠体液和细胞免疫反应的影响。结果发现,阳离子PLG纳米颗粒包裹CpG能显著提高免疫小鼠总IgG,增加小鼠免疫细胞数量,增强淋巴细胞增殖... 详细信息

本试验制备了聚乙交酯丙交酯(PLG)纳米颗粒,比较了阳离子PLG纳米颗粒和脂质体作为载体包裹CpG分子对小鼠体液和细胞免疫反应的影响。结果发现,阳离子PLG纳米颗粒包裹CpG能显著提高免疫小鼠总IgG,增加小鼠免疫细胞数量,增强淋巴细胞增殖活性及白细胞介素-2的诱生活性。它同阳离子脂质体作为包裹分子的效应相似或较强,能显著提高裸CpG质粒的免疫增强活性。

关键词：聚乙交酯丙交酯小鼠体液细胞免疫反应阳离子PLG纳米颗粒阳离子脂质体 CpG序列免疫增强活性免疫佐剂效应传染性疾病防治

牛分枝杆菌Mtb8.4在枯草芽孢杆菌中的表达与免疫活性分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第9期 136-138,250页

作者：李海涛刘艳环朱言柱谷晨晨闫喜军苗利光中国农业科学院特产研究所长春130112 农业部经济动物疫病重点实验室长春130112

Mtb8.4是从分枝杆菌H37Rv株培养滤液中分离纯化出的一种低分子质量蛋白抗原,具有细胞免疫活性,能诱导Th1型细胞免疫反应,同时能够产生对感染细胞有强烈溶解能力的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,分泌高水平的γ干扰素（IFN-γ）。

关键词：牛分枝杆菌免疫活性枯草芽孢杆菌活性分析细胞毒性T淋巴细胞细胞免疫反应 IFN-γ 蛋白抗原

支原体肺炎患儿自然杀伤细胞和细胞毒性T淋巴细胞检测及分析

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临床儿科杂志 2005年第10期23卷 721-722页

作者：蔡建敏周鸿烈王振海沈芳高红陈同辛上海市金山区中心医院上海201500 上海市儿科医学研究所免疫室

支原体肺炎是儿科常见的呼吸道感染性疾病,它的发病机理目前认为除了病原体直接侵害外,还与免疫功能紊乱有关.自然杀伤( NK)细胞和细胞毒性 T淋巴细胞( CTL)为机体重要的免疫细胞.为了探讨肺炎支原体感染过程中的细胞免疫反应,对 2002年... 详细信息

支原体肺炎是儿科常见的呼吸道感染性疾病,它的发病机理目前认为除了病原体直接侵害外,还与免疫功能紊乱有关.自然杀伤( NK)细胞和细胞毒性 T淋巴细胞( CTL)为机体重要的免疫细胞.为了探讨肺炎支原体感染过程中的细胞免疫反应,对 2002年 10月～ 2003年 6月我院住院的 17例肺炎支原体肺炎患儿的 NK和 CTL进行了检测与分析,现报告如下.

关键词：细胞毒性T淋巴细胞 T淋巴细胞检测自然杀伤细胞支原体肺炎肺炎患儿呼吸道感染性疾病肺炎支原体免疫功能紊乱细胞免疫反应

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重症肌无力发病机制的研究现状与展望

北京医学 2004年第5期26卷 349-350页

作者：杨颖河北省以岭医药研究院附属医院 050091

重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头(NMJ)处突触后膜上乙酰胆碱受体(AChR)自身致敏和破坏的全身性自身免疫性疾病.乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)介导的体液免疫反应和T细胞介导的细胞免疫反应是其主要发病机制.胸腺是激活和维持MG自身免疫... 详细信息

重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头(NMJ)处突触后膜上乙酰胆碱受体(AChR)自身致敏和破坏的全身性自身免疫性疾病.乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)介导的体液免疫反应和T细胞介导的细胞免疫反应是其主要发病机制.胸腺是激活和维持MG自身免疫反应的重要因素,而补体的参与更使疾病的发生成为可能,某些遗传因素和环境因素也与MG发病密切相关.可以说该病是人类疾病中研究得最清楚,最具代表性的自身免疫性疾病,现就MG发病机制的研究进展综述如下.……

关键词：重症肌无力发病机制致敏细胞免疫反应全身性自身免疫性疾病神经肌肉接头自身免疫反应突触维持介导

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血液系统肿瘤侵袭性真菌感染的治疗现状

中国临床医学 2006年第3期13卷 435-438页

作者：徐建民复旦大学附属中山医院血液科上海200032

侵袭性真菌感染（IFIs）仍然是血液肿瘤病人的威胁。IFIs最重要的相关因素包括长时间的粒细胞缺少、异基因造血干细胞移植（HSCT）后的移植物抗宿主病（GVHD）以及应用抗肿瘤化疗引起的T细胞免疫反应明显和持久的缺失。念珠菌和曲霉菌... 详细信息

侵袭性真菌感染（IFIs）仍然是血液肿瘤病人的威胁。IFIs最重要的相关因素包括长时间的粒细胞缺少、异基因造血干细胞移植（HSCT）后的移植物抗宿主病（GVHD）以及应用抗肿瘤化疗引起的T细胞免疫反应明显和持久的缺失。念珠菌和曲霉菌是引起感染的主要真菌病原体。新的抗真菌药物已经产生，并且新的真菌诊断方法已得到许可。这些新的进展整合到抗真菌的策略有望导致改变目前的现状。

关键词：侵袭性真菌感染血液系统肿瘤治疗现状异基因造血干细胞移植移植物抗宿主病抗真菌药物细胞免疫反应抗肿瘤化疗真菌病原体肿瘤病人

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男性生殖道中免疫活性细胞分布及其意义

中国男科学杂志 1990年第2期11卷 117-120页

作者：邢俊平刘文善西安医科大学第一附属医院泌尿外科

早在本世纪初人们就已知道精子细胞具有免疫原性并能诱发特异性自身或同种免疫反应[1]。1954年Rumke等[2]首次报道自身免疫可能是男性不育的原因之一。此后人们对精子自身免疫反应进行了大量研究,但是直到目前对人类抗精子自身免疫的许... 详细信息

早在本世纪初人们就已知道精子细胞具有免疫原性并能诱发特异性自身或同种免疫反应[1]。1954年Rumke等[2]首次报道自身免疫可能是男性不育的原因之一。此后人们对精子自身免疫反应进行了大量研究,但是直到目前对人类抗精子自身免疫的许多研究仍限于检测抗精子抗体。而对这些抗体产生的机制及细胞免疫所起的作用了解甚少。众所周知,T、B淋巴细胞系免疫活性细胞,二者以具有辅助/诱导(TH/I)和抑制/细胞毒(Ts/c)功能的淋巴细胞亚群来调节体液和细胞免疫反应的类型和强度[3],所以确定男性生殖道组织内淋巴细胞亚群的准确部位对了解自身免疫性不育症具有重要意义。

关键词：男性生殖道免疫活性细胞自身免疫性不育精子发生男性不育精子细胞细胞免疫反应抗精子抗体免疫原性细胞亚群

表达HIV-1gag基因的重组腺病毒疫苗的药效学研究

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表达HIV-1gag基因的重组腺病毒疫苗的药效学研究

作者：李芸北京工业大学

学位级别：硕士

艾滋病(AIDS)，是当今对人类健康威胁最大的疾病之一，自从引起艾滋病的HIV病毒被发现以来，科学家们始终致力于寻找科学有效的预防和治疗手段，但由于HIV本身高度变异性及易于产生耐药性的特点，至今仍然没有研制出治愈艾滋病的有效药... 详细信息

艾滋病(AIDS)，是当今对人类健康威胁最大的疾病之一，自从引起艾滋病的HIV病毒被发现以来，科学家们始终致力于寻找科学有效的预防和治疗手段，但由于HIV本身高度变异性及易于产生耐药性的特点，至今仍然没有研制出治愈艾滋病的有效药物。从疾病控制长远战略来说，有效的HIV疫苗才是战胜HIV流行的最佳希望。本课题组前期进行了多载体HIV疫苗序贯及重复免疫的研究，接受免疫的动物体内可长期维持高水平细胞免疫反应。本研究主要对表达gag基因的重组腺病毒疫苗(Ad5-HIVgag)进行临床前药效学研究，为该疫苗的临床应用提供依据。腺病毒载体一直是基因治疗和疫苗研究的热点，这主要是由于腺病毒载体具有安全性高、宿主范围广泛、感染滴度高、稳定性好，腺病毒双链DNA基因组易于重组基因操作等特点。核心蛋白Gag具有较高的保守性，富含CTL表位，是细胞免疫应答的主要靶标。Ad5-HIVgag疫苗是插入了HIV-1gag基因的、缺失病毒E1及E3区的非复制型5型重组腺病毒。疫苗中gag基因来自HIV-1B亚型gag共享序列。本研究首先对Ad5-HIVgag疫苗检定的PCR方法、酶切方法、Western blot方法及ELISpot方法进行了方法学验证并制定了相应的质量检定规程。对纯化的三批重组Ad5-HIVgag疫苗制品进行了相应的质量检定。用PCR方法可以扩增出gag特异性产物，酶切方法证明HIV-1gag基因插入位置正确，Western blot方法证实Gag蛋白可以有效表达，免疫小鼠后用ELISpot方法可检测到Gag特异性细胞免疫反应。本研究重点评价了小鼠及猴体内的细胞免疫反应效果。用不同剂量的Ad5-HIVgag疫苗(2×10VP/只/次、2×10VP/只/次、2×10VP/只/次、2×10VP/只/次、2×10VP/只/次)局部肌肉注射小鼠两次或三次，最后一次免疫后1周用ELISpot方法检测Gag特异性细胞免疫反应。结果2×10VP的剂量就可以在小鼠体内获得明显的细胞免疫应答。以2×10VP的剂量注射产生的细胞免疫反应水平最高，当高于此剂量时，细胞免疫水平反而降低。为观察Ad5-HIVgag疫苗在食蟹猴体内所引起的特异性免疫反应，在猴长毒试验过程中同时进行了药效学观察。分别使用低(0.99×1011VP/只/次)、中(4.94×1011VP/只/次)、高(24.68×1011VP/只/次)不同的病毒剂量，肌肉注射食蟹猴，于0、3、6、9、12周各肌肉注射1次。于不同时间点用ELISpot方法检测疫苗诱导的Gag特异性细胞免疫反应，同时也检测了动物血清抗腺病毒的中和抗体。结果从初次免疫后5周开始，免疫的动物即检测到了Gag特异性细胞免疫反应，随着时间的延长，8周时Gag特异性细胞免疫反应水平有增加。12周时Gag特异性细胞免疫反应水平有所下降，但随后15周及18周的检测，Gag特异性细胞免疫反应水平又有升高。说明，食蟹猴在一定的剂量范围内用Ad5-HIVgag免疫后，可产生针对Gag的特异性免疫反应。三个实验组动物都检测到了较高水平的腺病毒中和抗体，但是对Ad5疫苗反复应用诱导的Gag特异性细胞免疫反应抑制作用并不明显。总之，Ad5-HIVgag疫苗可以诱导机体产生Gag特异性T细胞应答，有可能成为治疗艾滋病的有效疫苗。依据国家对生物制品注册的管理规定，对Ad5-HIVgag疫苗相关的质量研究及药效学研究资料进行了整理，并已向北京市药品监督管理局递交了Ⅰ期临床研究申请。

关键词： HIV疫苗腺病毒载体 Gag 细胞免疫反应