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细丝蛋白c对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

山西医科大学学报 2022年第12期53卷 1511-1518页

作者：孙振业宋斌王磊宋多高闫尧杨帆空军军医大学第二附属医院泌尿外科西安710032

目的探讨细丝蛋白c(filamin c,FLNc)对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法通过免疫组织化学分析了30例前列腺癌患者的癌组织及配对癌旁组织中FLNc的表达。根据FLNc蛋白的表达水平将30例前列腺癌患者分为FLNc低表达组(0~3分,n=9)和FLNc... 详细信息

目的探讨细丝蛋白c(filamin c,FLNc)对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法通过免疫组织化学分析了30例前列腺癌患者的癌组织及配对癌旁组织中FLNc的表达。根据FLNc蛋白的表达水平将30例前列腺癌患者分为FLNc低表达组(0~3分,n=9)和FLNc高表达组(4~12分,n=21),采用Kaplan-Meier法进行生存分析。对人前列腺癌细胞系(Pc-3)转染抑制FLNc表达的小干扰RNA(siRNA-FLNc组)和阴性对照(siRNA-Nc组),未转染的细胞作为对照组。通过MTT法检测细胞活力,Transwell实验进行迁移和侵袭分析。通过qRT-PcR或Western blot检测细胞中FLNc、Eotaxin-1、ccR3、p-ERK1/2、t-ERK1/2和MMP-3的表达。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织中FLNc的染色评分升高(1.43±0.86 vs 5.63±2.91,Pc低表达组和高表达组患者的TNM分期、淋巴结转移和生存时间差异有统计学意义(Pc组Pc-3细胞中FLNc的mRNA和蛋白水平均降低(Pc组Eotaxin-1、ccR3、p-ERK1/2和MMP-3的蛋白相对表达量均降低(P蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05)。结论FLNc在前列腺癌组织中高表达并且与患者预后相关。沉默FLNc可能通过抑制Eotaxin-1-ccR3-ERK1/2-MMP-3通路降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

关键词：细丝蛋白c 前列腺癌预后迁移侵袭 Eotaxin-1-ccR3-ERK1/2-MMP-3通路

拟穴青蟹细丝蛋白c的分子克隆及抗原表位分析

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拟穴青蟹细丝蛋白C的分子克隆及抗原表位分析

作者：何欣蓉集美大学

学位级别：硕士

蟹类水产品的消费量逐年递增,随之引发的过敏反应广受关注。细丝蛋白c(filamin c,FLN c)是拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肌肉中的新型过敏原,有关该过敏原的基因序列、理化特性、抗原表位等尚不清楚。因此针对FLN c基因序列及抗原表位... 详细信息

蟹类水产品的消费量逐年递增,随之引发的过敏反应广受关注。细丝蛋白c(filamin c,FLN c)是拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肌肉中的新型过敏原,有关该过敏原的基因序列、理化特性、抗原表位等尚不清楚。因此针对FLN c基因序列及抗原表位的研究有利于解决甲壳类动物FLN c交叉反应引起的过敏疾病诊断难题。本研究以拟穴青蟹FLN c为研究对象,利用巢式聚合酶链式反应及互补脱氧核糖核酸末端快速扩增技术获得FLN c的基因序列,该基因开放阅读框共2544个碱基,编码847个氨基酸残基,核苷酸序列登录号为MK747241.1,填补了甲壳类水产品FLN c基因序列的空白。生物信息学分析结果显示,FLN c含有9个结构域,其三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有典型的细丝蛋白家族特征;系统进化树分析结果表明,细丝蛋白家族在进化中呈现高度保守性。另外,基于三种生物信息学在线分析及软件预测得到FLN c的28个线性表位,并将本实验室前期经噬菌体淘选获得的模拟表位肽段与青蟹FLN c基因序列进行比对,共匹配得到22个表位肽段,比对分析最终明确了拟穴青蟹FLN c的11个线性表位。进一步对拟穴青蟹FLN c进行体外表达,获得纯化的重组FLN c(rFLN c)。与天然FLN c(nFLN c)比较发现,rFLN c三级结构发生明显改变;免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)结合能力分析显示,rFLN c比nFLN c更易被甲壳类过敏患者血清识别,结果提示rFLN c可以作为蟹类过敏组分诊断的候选过敏原。基于结构域组成及三级结构分析后,将拟穴青蟹FLN c进行分段表达,纯化得到带有麦芽糖结合蛋白标签的重组蛋白rFLN c1(氨基酸序列1-335区)、rFLN c2(氨基酸序列336-531区)、rFLN c3(氨基酸序列532-847区)。免疫结合活性分析FLN c抗原表位的分布情况显示,rFLN c2的免疫结合能力最强,确定的6个抗原表位分布于该区域,提示结构域5,6(氨基酸序列336-531区)可能为拟穴青蟹FLN c的抗原表位优势区域。甲壳类、软体类8种水产品中FLN c的特异性抗体及血清学分析结果显示,FLN c均存在于8种水产品中,且rFLN c可明显抑制8个水产品中FLN c与甲壳类过敏患者血清IgE的结合能力,结果表明不同物种FLN c具有相同或相似的抗原表位且存在免疫交叉反应。综上所述,本研究对拟穴青蟹FLN c进行分子克隆及重组表达,分段表达明确了FLN c抗原表位优势区域,分析8种水产品过敏原FLN c免疫交叉反应情况,这些结果对于完善甲壳类动物FLN c的基因序列信息,以及蟹类过敏疾病的诊断和治疗具有指导意义。

关键词：拟穴青蟹新型过敏原细丝蛋白c 分子克隆生物信息学免疫交叉反应抗原表位

拟穴青蟹细丝蛋白c的生物信息学分析及重组表达

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集美大学学报（自然科学版） 2021年第1期26卷 14-21页

作者：何欣蓉杨阳张永霞刘红曹敏杰刘光明集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心福建厦门361021 厦门市海洋功能食品重点实验室福建厦门361021

为了探讨抗原表位与细丝蛋白c(filamin c,FLN c)结构之间的构效关系,对FLN c进行生物信息学分析及分段重组表达。生物信息学分析结果表明,FLN c二级结构以β折叠及无规则卷曲为主,确定其具有9个结构域,三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有... 详细信息

为了探讨抗原表位与细丝蛋白c(filamin c,FLN c)结构之间的构效关系,对FLN c进行生物信息学分析及分段重组表达。生物信息学分析结果表明,FLN c二级结构以β折叠及无规则卷曲为主,确定其具有9个结构域,三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有典型的细丝蛋白家族特征。基于生物信息学分析,将拟穴青蟹(Scylla paramamosain)FLN c通过分段原核表达,纯化出带有麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签的重组表达蛋白rFLN c1(AA:1-335)、rFLN c2(AA:336-531)、rFLN c3(AA:532-847)。血清学分析结果显示,rFLN c2与蟹类过敏患者血清IgE结合能力最强,推测此区域含有大部分抗原表位。因此,定位拟穴青蟹FLN c氨基酸336-531结构域为抗原表位优势区,rFLN c2可用于FLN c的晶体学研究。

关键词：拟穴青蟹细丝蛋白c 生物信息学重组表达

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拟穴青蟹新型过敏原细丝蛋白c的研究

拟穴青蟹新型过敏原细丝蛋白C的研究

低氧对小鼠海马神经元发育相关分子表达的影响

华东地区生物化学与分子生物学学会联合会2017年学术交流会暨安徽省生物化学与分子生物学学会理事会议

作者：刘萌谢洁晶杨阳刘红张凌晶曹敏杰李岩刘光明集美大学食品与生物工程学院厦门市海洋功能食品重点实验室福建省海洋功能食品工程技术研究中心水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心厦门市妇幼保健院

目的:本研究纯化出拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中新型过敏原,并对其理化性质及过敏性进行了分析研究。方法:以拟穴青蟹肌肉为原料,利用硫酸铵盐析、柱层析等方法分离纯化90 kDa过敏蛋白,利用甲壳类过敏患者血清的Dot-blotting技术分... 详细信息

目的:本研究纯化出拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中新型过敏原,并对其理化性质及过敏性进行了分析研究。方法:以拟穴青蟹肌肉为原料,利用硫酸铵盐析、柱层析等方法分离纯化90 kDa过敏蛋白,利用甲壳类过敏患者血清的Dot-blotting技术分析验证其IgE结合活性,采用肽指纹质量图谱鉴定该蛋白并搜索对比分析其序列相似性,进一步研究了其热稳定性、pH稳定性及消化稳定性。结果:经质谱分析确认,分离纯化的90 kDa蛋白为细丝蛋白c(filamin c,FLN c),其肽段与NcBInr数据库中拟穴青蟹putative filamin c,partial(gi|338224387)序列相似性高达95%。该蛋白可与甲壳类过敏患者血清及克氏原螯虾多克隆抗体反应,其等电点为6.25,且无其他亚型。理化性质分析表明FLN c不耐热,高温处理使其IgE结合活性降低;FLN c在偏碱条件下较偏酸条件下稳定;对其消化稳定性的分析结果表明FLN c可被消化酶降解,但其消化产物仍保留IgE结合活性。结论:本实验首次从拟穴青蟹中纯化鉴定出分子量为90kDa的新型过敏原FLN c,理化性质分析表明其对热不稳定,耐碱不耐酸,体外消化产物保留IgE结合活性,对机体仍具有潜在的致敏性。

关键词：拟穴青蟹新型过敏原细丝蛋白c 理化性质 IgE结合活性

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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神经解剖学杂志 2022年第4期38卷 417-422页

作者：周杨曹子鹏陈筱鸣李鸣战金龙张文斌空军军医大学军事预防医学系军队劳动与环境卫生学教研室西安710032 中国人民解放军32127部队卫生队大连116600

目的:探讨低氧暴露对小鼠海马神经元发育相关蛋白表达的影响,为低氧导致认知功能障碍机制的研究提供新的靶分子。方法:低氧处理小鼠海马神经元来源的HT22细胞系24 h和48 h,收集细胞样本进行转录组测序筛查低氧易感分子,real time RT-Pc... 详细信息

目的:探讨低氧暴露对小鼠海马神经元发育相关蛋白表达的影响,为低氧导致认知功能障碍机制的研究提供新的靶分子。方法:低氧处理小鼠海马神经元来源的HT22细胞系24 h和48 h,收集细胞样本进行转录组测序筛查低氧易感分子,real time RT-PcR检测HT22细胞中低氧相关分子纤维连接蛋白1(Fn1)、细丝蛋白c(FLNc)和细胞周期蛋白F(ccNF)mRNA的表达水平,Western Blot检测HT22细胞中Fn1、FLNc和ccNF蛋白的表达水平。结果:转录组测序筛选出低氧相关分子,低氧暴露后HT22细胞中Fn1和FLNc mRNA和蛋白水平显著降低。结论:低氧暴露可导致HT22细胞中Fn1和FLNc表达发生改变,可能是低氧诱导神经元损伤的靶分子。

关键词：低氧环境认知损伤神经元发育纤维连接蛋白1 细丝蛋白c HT22细胞

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克氏原螯虾新型过敏原的鉴定与性质研究

克氏原螯虾新型过敏原的鉴定与性质研究

作者：张永霞集美大学

学位级别：硕士

近年来,食物过敏性疾病的发病率迅速增高。随着克氏原螯虾消费量的日益增长及加工产品多样化,其引发的食物过敏病例常有出现,严重地影响着人们的生活质量。所以,针对克氏原螯虾引起过敏问题的研究具有重要意义。本文以克氏原螯虾为试验... 详细信息

近年来,食物过敏性疾病的发病率迅速增高。随着克氏原螯虾消费量的日益增长及加工产品多样化,其引发的食物过敏病例常有出现,严重地影响着人们的生活质量。所以,针对克氏原螯虾引起过敏问题的研究具有重要意义。本文以克氏原螯虾为试验对象,继续寻找新型过敏原,研究其分离纯化、理化特性分析及抗原表位的确定,为开发低致敏性克氏原螯虾产品提供理论依据,同时为甲壳类过敏性疾病的诊断和治疗提供帮助。利用甲壳类过敏患者血清Ig E的Western-blotting技术,确定克氏原螯虾肌肉中28 k Da蛋白为其过敏组分。采用硫酸铵分步盐析、连续柱层析(Q-Sepharose、Sephacryl S-200)的方法纯化得到28 k Da蛋白,经肽指纹质量图谱鉴定其为磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,TIM),并通过免疫新西兰兔制备抗TIM多克隆抗体。理化特性分析结果显示,TIM是一种糖含量为0.82%的糖蛋白;TIM不耐热,高温处理可破坏其二级结构导致其Ig E结合活性明显下降;TIM在强酸、强碱条件下不易被降解,但强碱处理使其Ig G结合活性下降,而强酸环境使其Ig E结合活性有所上升;TIM耐胰液消化,易被胃蛋白酶降解但其消化产物仍存在Ig E结合活性;TIM存在多态性,含TIM1、TIM2、TIM3三种亚基,且TIM1、TIM2具有免疫活性;TIM的空间结构为典型的(β/α)8-barrel结构,分析模拟出6个构象型Ig G表位和5个线性Ig G表位。与此同时,实验还发现克氏原螯虾肌肉中90 k Da蛋白可与兔抗克氏原螯虾TIM多克隆抗体发生特异性结合且具有Ig E结合活性,分析其为一种新型过敏组分。采用硫酸铵分步盐析及阴离子交换柱层析(Q-Sepharose)的方法纯化得到90 k Da蛋白,经肽指纹质量图谱鉴定其为细丝蛋白c(filamin c,FLN c)。理化特性分析表明,FLN c含糖量为0.98%;FLN c对热不稳定,高温处理可破坏其二级结构使其Ig E结合活性显著下降;FLN c耐碱不耐酸;FLN c可被消化酶降解,但其消化产物仍保留免疫活性;FLN c具有复杂的空间结构,分析模拟出8个构象型Ig G表位和9个线性Ig G表位,且与TIM存在多个相同抗原表位区域。在此基础上,深入探索了克氏原螯虾TIM与FLN c的相互结合关系。采用噬菌体展示技术,分析发现与FLN c结合的TIM位点主要有3个构象型结合位点和3个线性结合位点,与TIM结合的FLN c位点主要有8个构象型结合位点和6个线性结合位点,判定TIM和FLN c存在相互结合。

关键词：克氏原螯虾新型过敏原磷酸丙糖异构酶细丝蛋白c 抗原表位结合位点

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克氏原螯虾新型过敏原的鉴定与性质研究

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