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低氧诱导因子1α基因敲除小鼠椎间盘退变与益气化瘀方的干预

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中国组织工程研究 2013年第24期17卷 4481-4487页

作者：王晶董芳芳李晓锋许金海舒冰施杞王拥军周重建上海中医药大学脊柱病研究所上海市200032 上海中医药大学附属龙华医院上海市200032

背景:低氧诱导因子1α与椎间盘软骨的正常生理及病理情况存在密切的关系,能够维持软骨组织在低氧环境中的正常活性,低氧诱导因子1α基因敲除后,软骨组织无法维持其正常低氧状态,导致软骨组织营养供应障碍,使软骨细胞处于异常缺血缺氧状... 详细信息

背景:低氧诱导因子1α与椎间盘软骨的正常生理及病理情况存在密切的关系,能够维持软骨组织在低氧环境中的正常活性,低氧诱导因子1α基因敲除后,软骨组织无法维持其正常低氧状态,导致软骨组织营养供应障碍,使软骨细胞处于异常缺血缺氧状态,长此以往,软骨组织会发生退变。目的:观察低氧诱导因子1α条件性基因敲除小鼠椎间盘软骨退变情况,以及中药复方益气化瘀方对减缓低氧诱导因子1α基因敲除小鼠椎间盘软骨退变的作用。方法:①将杂交繁殖获得同窝的低氧诱导因子1α+/+对照小鼠和低氧诱导因子1α基因敲除小鼠,分别分为为2.5月龄组和4.5月龄组(n=6)。分别在2.5、4.5月龄处死相应小鼠,取L4-6腰椎进行藏红固绿、苏木精-伊红染色及免疫组化相关指标染色及分析。②取12只0.5月龄低氧诱导因子1α基因敲除小鼠随机均分为生理盐水组和益气化瘀方组。灌胃给药2个月后,取两组小鼠的L4-6椎间盘进行藏红固绿、苏木精-伊红染色及免疫组化相关指标染色及分析。结果与结论:①低氧诱导因子1α-/-小鼠:2.5月龄组椎间盘软骨组织出现破损和骨化,细胞分布不均匀,软骨细胞减少,椎间盘软骨中Ⅱ型胶原和Sox9表达降低,X型胶原、基质金属蛋白酶13表达增加;4.5月龄组椎间盘软骨损伤更加严重,Ⅱ型胶原蛋白与Sox9表达进一步降低,X型胶原、基质金属蛋白酶13表达进一步上升。②与生理盐水组比较,益气化瘀方干预后苏木精-伊红染色和藏红固绿染色显示软骨骨化和缺损减轻,软骨细胞数目较多,分布较均匀。与生理盐水组比较,益气化瘀方组椎间盘软骨中Ⅱ型胶原和Sox9的表达升高,X型胶原、基质金属蛋白酶13表达减少。说明低氧诱导因子1α基因敲除小鼠出现了椎间盘软骨退变,并且这种退变随着小鼠增龄而加重;益气化瘀方可以减轻低氧诱导因子1α基因敲除小鼠的椎间盘软骨退变。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子益气化瘀方低氧诱导因子1α 基因敲除小鼠椎间盘软骨退变骨化骨缺损 Ⅱ型胶原软骨细胞基质金属蛋白酶国家自然科学基金

退行性变椎间盘组织转化生长因子β1基因的表达

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中国组织工程研究 2013年第24期17卷 4495-4501页

作者：戴启宇杨廷桐于芳芳王全志王媛张小双解放军第371中心医院河南省新乡市453000

背景:据报道,转化生长因子β1能促进椎间盘细胞的增殖与分化,并参与其损伤修复过程。但转化生长因子β1是否参与椎间盘退变的过程?目的:分析在人体退行性变椎间盘组织中转化生长因子β1的表达情况,并探讨其与人体椎间盘退行性变的关系... 详细信息

背景:据报道,转化生长因子β1能促进椎间盘细胞的增殖与分化,并参与其损伤修复过程。但转化生长因子β1是否参与椎间盘退变的过程?目的:分析在人体退行性变椎间盘组织中转化生长因子β1的表达情况,并探讨其与人体椎间盘退行性变的关系。方法:收集正常椎间盘组织30例,退行性变人体椎间盘组织530例,采用苏木精-伊红染色、免疫印迹和RT-PCR方法进行研究,对退行性变的椎间盘组织进行病理学分型,分别检测转化生长因子β1在不同类型退变的椎间盘中表达的情况并与正常椎间盘组织进行对比分析。结果与结论:苏木精-伊红染色病理学诊断:将退行性变的椎间盘组织根据病理学改变程度分为4型。免疫印迹法和RT-PCR法均显示:在正常和退变椎间盘组织中,转化生长因子β1均有表达,但在病变组织中随病变加重转化生长因子β1表达量随之增加,退变组织与正常组织比较差异有非常显著性意义(P因子β1高表达与人体椎间盘退行性变呈正相关。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子椎间盘退行性变转化生长因子β1 髓核细胞信号途径椎间盘组织椎间盘修复基因表达基因治疗病理形态学

退行性变腰椎间盘中基质细胞衍生因子1的表达及意义

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中国组织工程研究 2013年第24期17卷 4488-4494页

作者：刘钢马信龙邓树才陈思天津市天津医院天津市300210

背景:目前腰椎间盘退行性变确切的发病机制并不十分清楚。炎症参与腰椎间盘退行性变的发病机制,基质细胞衍生因子1属于趋化因子家族成员,与炎症有关。目的:检测腰椎间盘退行性变患者椎间盘中基质细胞衍生因子1的表达水平,分析其与病情... 详细信息

背景:目前腰椎间盘退行性变确切的发病机制并不十分清楚。炎症参与腰椎间盘退行性变的发病机制,基质细胞衍生因子1属于趋化因子家族成员,与炎症有关。目的:检测腰椎间盘退行性变患者椎间盘中基质细胞衍生因子1的表达水平,分析其与病情严重程度的关系。方法:选取84例腰椎间盘退行性变患者和28例椎体爆裂性骨折患者,收集2组患者术后的椎间盘组织,用酶联免疫吸附的方法测定椎间盘中基质细胞衍生因子1的表达水平。根据Schneiderman标准进行分级,分析椎间盘中的基质细胞衍生因子1水平与疾病分级的关系。结果与结论:与椎体爆裂性骨折患者相比,腰椎间盘退行性变患者的腰椎间盘组织中基质细胞衍生因子1水平明显升高,差异有显著性意义(P组织中基质细胞衍生因子1水平明显高于Schneiderman2级和3级的患者,而Schneiderman3级的患者椎间盘组织中基质细胞衍生因子1水平明显高于2级患者。另外,Spearman相关分析也显示,基质细胞衍生因子1的蛋白水平与Schneiderman分级呈正相关(r=0.412,P因子1的表达增高,与疾病严重程度呈正相关,可能参与了腰椎间盘退行性变的发病机制。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子腰椎间盘退行性变基质细胞衍生因子1 表达炎症趋化因子 Schneiderman分级细胞因子酶联免疫吸附细胞外基质基质金属蛋白酶

神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5198-5203页

作者：冯璋张芮冯永强周一冲王一兵山东大学附属省立医院烧伤整形科山东省济南市250021 山东医学高等专科学校病理与病理生理教研室山东省济南市250002

背景:既往研究发现神经生长因子在创面愈合过程中发挥重要作用,但对于成纤维细胞中神经生长因子低亲和力受体p75及sortilin的研究较少,p75及sortilin在瘢痕组织成纤维细胞及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达量是否有差异目前未见报道。目... 详细信息

背景:既往研究发现神经生长因子在创面愈合过程中发挥重要作用,但对于成纤维细胞中神经生长因子低亲和力受体p75及sortilin的研究较少,p75及sortilin在瘢痕组织成纤维细胞及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达量是否有差异目前未见报道。目的:比较神经生长因子低亲和力受体p75及soritilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的中表达的差异。方法:体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞,并以人永生化上皮细胞HaCaT为阳性对照。通过实时定量PCR在mRNA水平检测p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的表达及差异,进一步通过Western-blot及细胞免疫化学方法观察p75神经营养因子受体及sortilin在蛋白水平的表达及差异。结果与结论:实时定量PCR及Western blot结果可见,在mRNA及蛋白水平瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75,sortilin均呈阳性表达,其中瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75及sortilin在mRNA及蛋白水平表达量明显少于HaCaT,且p75在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中表达差异无显著性意义,sortilin表达量在瘢痕疙瘩成纤维细胞中明显低于正常皮肤成纤维细胞(P因子前体与p75受体高亲和力结合并在sortilin协助下发挥促进细胞凋亡的作用,sortilin在瘢痕成纤维细胞的表达明显低于正常皮肤成纤维细胞,可能与其高增殖状态有关,该结果为病理性瘢痕的防治提供了新的靶点。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子神经生长因子低亲和力受体 sortilin 瘢痕疙瘩成纤维细胞正常皮肤成纤维细胞 HaCaT 实时定量PCR Western blot 国家自然科学基金

β1整合素抑制β淀粉样蛋白对记忆长时程增强的作用(英文)

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 1959-1964页

作者：韩海燕张逸驰季淑琼梁奇明朱遂强薛峥华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科湖北省武汉市430030 首都医科大学宣武医院神经内科北京市100053

背景:抑制小鼠海马脑片整合素活动后,虽然不会影响长时程增强的诱导,但却带来快速的长时程增强衰减,证明整合素对于诱导后长时程增强的维持和稳定起到关键的作用。目的:通过在体电生理技术阐明整合素的β1亚基在活体大鼠的海马CA1区中... 详细信息

背景:抑制小鼠海马脑片整合素活动后,虽然不会影响长时程增强的诱导,但却带来快速的长时程增强衰减,证明整合素对于诱导后长时程增强的维持和稳定起到关键的作用。目的:通过在体电生理技术阐明整合素的β1亚基在活体大鼠的海马CA1区中β淀粉样蛋白抑制长时程增强的过程中所起到的作用。方法:将15只SD大鼠等分为对照组、β淀粉样蛋白组和β1整合素拮抗剂组,分别给予生理盐水,β淀粉样蛋白和β1整合素的选择性拮抗剂,记录自给予β淀粉样蛋白前10min至高频强直刺激后3h时的兴奋性突触后电位。结果与结论:给予对照组大鼠高频强刺激后兴奋性突触后电位明显增强,增幅在30%以上。β淀粉样蛋白组大鼠给予高频强刺激后兴奋性突触后电位在3h中被显著抑制,没有出现明显的变化。而β1整合素拮抗剂组大鼠给予高频强刺激后兴奋性突触后电位又出现明显的增强。推测β1整合素在活体大鼠的海马CA1区中β淀粉样蛋白抑制长时程增强的过程中可能起着重要的介导作用,而其特异性的拮抗剂或抗体可以阻断这种介导作用。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子阿尔茨海默病神经毒性 β淀粉样蛋白长时程增强 β1整合素亚基海马CA1区高频刺激兴奋性突触后电位国家自然科学基金组织构建图片文章

干扰素α-2a与肝纤维化大鼠肝星状细胞的凋亡

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 1987-1992页

作者：刘翠芸张伟刘佩佩叶长根易珍孙水林南昌大学第二附属医院感染科江西省南昌市330006

背景:干扰素α-2a改善肝纤维化的机制直到目前仍尚未阐明。目的:进一步验证干扰素α-2a对CCl4诱导大鼠肝纤维化模型中肝星状细胞凋亡的影响。方法:建立CCl4诱导肝纤维化模型,健康SD雌性大鼠50只,采用随机对照原则将SD大鼠分成5组,即生... 详细信息

背景:干扰素α-2a改善肝纤维化的机制直到目前仍尚未阐明。目的:进一步验证干扰素α-2a对CCl4诱导大鼠肝纤维化模型中肝星状细胞凋亡的影响。方法:建立CCl4诱导肝纤维化模型,健康SD雌性大鼠50只,采用随机对照原则将SD大鼠分成5组,即生理盐水对照组、纤维化模型组、6×104U/kg干扰素α-2a干预组、12×104U/kg干扰素α-2a干预组及6×104U/kg干扰素α-2a对照组。造模8周时取肝组织标本,分别进行肝纤维化指标检测;RT-PCR分析肝组织bcl-2、bax的表达;免疫组织化学染色用a平滑肌肌动蛋白对活化的肝星状细胞进行标记。结果与结论:肝组织病理形态显示CCl4诱导肝纤维化成功建立,表现为纤维化模型组汇管区周围纤维化明显,有芒状纤维和纤维间隔形成,各干扰素α-2a干预组肝纤维化有不同程度缓解。纤维化模型组有大量a平滑肌肌动蛋白阳性表达,6×104U/kg干扰素α-2a干预组a平滑肌肌动蛋白阳性表达较纤维化模型组减少,12×104U/kg干扰素α-2a干预组更少,6×104U/kg干扰素α-2a对照组未见a平滑肌肌动蛋白阳性表达。结果提示干扰素α-2a能下调CCl4诱导肝纤维化bcl-2的表达,及上调bax的表达。提示干扰素α-2a阻断CCl4诱导肝纤维化机制存在通过调节bcl-2、bax的表达,诱导肝星状细胞凋亡途径,该调节作用可能与干扰素α-2a剂量相关。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子肝纤维化肝干扰素α-2a Bcl-2 Bax 肝星状细胞细胞凋亡省级基金组织构建图片文章

色素上皮衍生因子对角膜碱烧伤后新生血管形成的抑制

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中国组织工程研究 2013年第20期17卷 3707-3714页

作者：朱丹陆晓和付月南方医科大学附属珠江医院眼科广东省广州市510282

背景:角膜新生血管导致角膜透明性降低,造成严重的视觉障碍。色素上皮衍生因子是一种内源性血管生成抑制剂,其对于角膜新生血管是否具有抑制作用尚不清楚。目的:探索局部运用色素上皮衍生因子对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用... 详细信息

背景:角膜新生血管导致角膜透明性降低,造成严重的视觉障碍。色素上皮衍生因子是一种内源性血管生成抑制剂,其对于角膜新生血管是否具有抑制作用尚不清楚。目的:探索局部运用色素上皮衍生因子对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用。方法:将20只大鼠随机分为生理盐水组与色素上皮衍生因子组,每组10只。用NaOH溶液将大鼠右眼角膜烧伤诱导产生新生血管。碱烧伤后2组每日分别给予生理盐水和色素上皮衍生因子点眼,并采用裂隙灯显微镜观察和测量各组角膜新生血管生长情况。碱烧伤后12d处死大鼠,将角膜组织固定切片,行苏木精-伊红染色观察,并进行免疫组织化学染色检测各组大鼠角膜血管内皮生长因子和CD31的表达。结果与结论:大鼠角膜碱烧伤后3,7,12d,色素上皮衍生因子组大鼠角膜新生血管面积均小于生理盐水组(P组织结构紊乱;色素上皮衍生因子组新生血管较少,角膜组织结构趋于整齐。角膜碱烧伤后12d,免疫组织化学染色示生理盐水组大鼠角膜上皮和基质层可见血管内皮生长因子大量表达,角膜基质层可见血管内皮生长因子和CD31大量表达;色素上皮衍生因子组新生血管稀少,CD31表达较弱。证实局部应用色素上皮衍生因子可有效抑制大鼠角膜化学伤后的血管新生。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子角膜新生血管色素上皮衍生因子 NaOH 血管内皮生长因子 CD31 眼科组织工程

酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠肠缺血-再灌注损伤的修复

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 1965-1971页

作者：孙虹张明辉翁立新孙同柱内蒙古医学院基础医学院内蒙古自治区呼和浩特市010059 甘肃中医学院甘肃省兰州市730000 内蒙古医学院基础医学院病理教研室内蒙古自治区呼和浩特市010059 解放军总医院创伤修复研究室北京市100853

背景:细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2在肠缺血-再灌注损伤修复中的作用尚无研究报道。目的:观察大鼠肠缺血-再灌注损伤后外源性酸性成纤维细胞生长因子对细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2表达的影响... 详细信息

背景:细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2在肠缺血-再灌注损伤修复中的作用尚无研究报道。目的:观察大鼠肠缺血-再灌注损伤后外源性酸性成纤维细胞生长因子对细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2表达的影响,探讨细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2与酸性成纤维细胞生长因子促进创伤修复的关系。方法:以大鼠肠系膜上动脉夹闭45min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用酸性成纤维细胞生长因子行干预。分别于再灌注2,6,12,24h取大鼠小肠组织标本,利用免疫组化和RT-PCR检测酸性成纤维细胞生长因子受体的表达及免疫组化检测细胞外调节蛋白激酶表达的规律。结果与结论:在正常大鼠,酸性成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上。缺血-再灌注初期,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达未发生明显变化,但随着再灌注时间的延长表达水平逐渐提高,并于再灌注后6-12h达高峰。经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织小肠黏膜损伤程度减轻,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达量高于未治疗大鼠。结果表明缺血-再灌注损伤后,酸性成纤维细胞生长因子干预可上调酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达,提示外源性酸性成纤维细胞生长因子通过促进内源性酸性成纤维细胞生长因子受体2和细胞外调节蛋白激酶的生成可能是其参与内脏损伤修复的机制之一。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子酸性成纤维细胞生长因子受体细胞外调节蛋白激酶缺血-再灌注损伤小肠小肠绒毛上皮细胞其他基金组织构建图片文章

冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子的体内浓度梯度

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中国组织工程研究 2013年第24期17卷 4473-4480页

作者：甄雷王晓缪黄泰乔世斌吴星欣乔岩刘百球刘新民阙斌聂绍平首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京市心肺血管疾病研究所北京市100029 山东省日照市人民医院心内一科山东省日照市276826 首都医科大学附属北京安贞医院心内科北京市心肺血管疾病研究所北京市100029

背景:体外研究发现,碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度能够促进干细胞的迁移和增殖。然而,采用冠状静脉逆行灌注途径能否建立在体碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度尚不明确。目的:评价冠状静脉逆行灌注实验方法的安全性,建立并检测冠状静... 详细信息

背景:体外研究发现,碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度能够促进干细胞的迁移和增殖。然而,采用冠状静脉逆行灌注途径能否建立在体碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度尚不明确。目的:评价冠状静脉逆行灌注实验方法的安全性,建立并检测冠状静脉与局部缺血心肌间的碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度,探讨逆行灌注后碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度存在的时间窗。方法:开胸结扎法建立犬急性心肌梗死模型,1周后经冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子。灌注结束后球囊充盈时间分别为0,5,10,15min。解除球囊充盈后即刻处死动物,ELISA法测量血浆和梗死区心肌、梗死边缘区心肌组织匀浆中碱性成纤维细胞生长因子的浓度,在体评价在不同时间点冠状静脉血液与梗死区心肌以及梗死边缘区心肌之间的碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度。结果与结论:逆行灌注成功率为100%,无死亡、心脏压塞和恶性心律失常等并发症发生。灌注后5min和10min,冠状静脉血液与梗死区心肌之间碱性成纤维细胞生长因子浓度的差异有显著性意义,梗死区心肌浓度明显高于其他2种组织。球囊充盈15min后2组之间浓度差异无显著性意义。结果表明,经冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子后,球囊充盈的时间为5-10min能在冠状静脉血液与梗死心肌之间建立稳定的碱性成纤维细胞生长因子浓度梯度,而且在梗死心肌区域浓度最高。此时间窗内灌注干细胞有望增强其移行活力。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子缺血性心脏病冠状静脉逆行灌注生长因子干细胞在体浓度梯度碱性成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞国家自然科学基金