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飞蝗表皮蛋白Lm Knk3-5′的抗体制备及组织定位

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中国农业科学 2022年第2期55卷 329-338页

作者：张睿张学尧赵小明马恩波张建珍山西大学应用生物学研究所山西大同大学生命科学学院

【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其... 详细信息

【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础。【方法】首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5′的氨基酸序列,选取LmKnk3-5′的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含Bam H I、Hind III酶切位点的引物,以LmKnk3-5′全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5′的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21(DE3)表达菌株中,加入IPTG(终浓度0.5 mmol·L-1)低温(16℃)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5′多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性。取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5′蛋白进行组织定位。【结果】通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5′的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD。酶切连接后,成功获得pET-32a-R1、pET-32a-R2和pET-32a-R3重组质粒。诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白。将其扩大培养纯化后获得R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512 000,可满足抗体使用需求。Western blot结果表明,注射ds LmKnk3-5′后飞蝗体壁LmKnk3-5′的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5′抗体特异性良好。免疫组化试验结果表明,表皮蛋白LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁皮细胞及新表皮中均有分布,特别是新合成的外表皮顶端。【结论】成功获得飞蝗LmKnk3-5′多克隆抗体,证明其特异性良好。LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁新合成的外表皮顶端分布较多。研究结果为飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′功能研究提供了蛋白水平的证据。

关键词：飞蝗表皮蛋白 LmKnk3-5′ 抗体制备组织定位

家蚕BmMet2基因的组织定位与激素诱导表达分析

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华南师范大学学报（自然科学版） 2022年第2期54卷 63-69页

作者：童春梅易文瑾马琼邓惠敏朱子丹华南师范大学生命科学学院/华南师范大学昆虫科学与技术研究所/广东省昆虫发育调控与应用重点实验室广州510631

Met作为保幼激素(JH)的受体,能编码bHLH-PAS结构域结合DNA并调控下游基因的表达。为了探究BmMet2是否作为JH的受体参与调控家蚕的生长发育,以家蚕为材料,用生物信息学方法分析了BmMet2蛋白结构,利用实时定量PCR检测其在翅原基不同时期... 详细信息

Met作为保幼激素(JH)的受体,能编码bHLH-PAS结构域结合DNA并调控下游基因的表达。为了探究BmMet2是否作为JH的受体参与调控家蚕的生长发育,以家蚕为材料,用生物信息学方法分析了BmMet2蛋白结构,利用实时定量PCR检测其在翅原基不同时期和激素诱导下的表达情况;原核表达了BmMet2中能与DNA结合的蛋白区域BmMet2DBD,并制备了抗体;利用蛋白质印迹法(Western blotting)和免疫组化检测了BmMet2在家蚕多个时期和各组织中的定位表达情况。结果显示:在翅原基中,BmMet2在5龄第3天和5龄第6天有较高水平的表达,蛹期的表达量较低,这与家蚕体内JH的滴度一致;BmMet2在5龄第6天、吐丝期和预蛹期的胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高的表达;JH和20E均对BmMet2有不同程度的诱导,说明其可能同时参与了JH和20E的调控,进而参与调控家蚕变态发育过程。

关键词：家蚕 BmMet2 保幼激素组织定位激素诱导

多房棘球绦虫角化蛋白鉴定、表达及组织定位研究

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多房棘球绦虫角化蛋白鉴定、表达及组织定位研究

作者：廖鹏重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过生物信息学分析预测多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis,Em）角化蛋白（cornifelin,CNFN）基因及其编码蛋白的序列、结构和进化特征,原核表达制备EmCNFN重组蛋白,对该蛋白作为泡球蚴病潜在诊断靶标的可能性进行探究,... 详细信息

目的:通过生物信息学分析预测多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis,Em）角化蛋白（cornifelin,CNFN）基因及其编码蛋白的序列、结构和进化特征,原核表达制备EmCNFN重组蛋白,对该蛋白作为泡球蚴病潜在诊断靶标的可能性进行探究,并将该蛋白作为免疫原制备多克隆抗体,分析EmCNFN蛋白组织定位情况,为进一步研究该蛋白奠定基础。方法:1.通过电子克隆的方法获得EmCNFN基因的全长cDNA,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,对其基本理化性质、结构、翻译后修饰、组织定位、跨膜结构域、信号肽、T、B细胞抗原表位及生物进化关系进行预测分析,为该基因的克隆和深入研究奠定基础。2.通过RT-PCR克隆验证EmCNFN基因的表达,并送往公司进行测序,以验证序列的正确性。3.构建SD大鼠泡球蚴感染模型,获取足量泡球蚴组织,用于提取RNA和蛋白,为后续原核表达载体构建及免疫组织化学定位等实验做准备。4.构建EmCNFN-pET32a原核表达载体,筛选IPTG最适诱导表达条件,获取重组蛋白,并经Ni柱进行纯化。5.采用Western Blot方法分析EmCNFN重组蛋白的免疫反应性,并通过Western Blot方法检测泡球蚴感染SD大鼠不同时期血清对重组蛋白的识别,为研究其作为泡球蚴病潜在诊断靶标的可能性提供实验基础。6.将纯化的EmCNFN重组蛋白进行透析处理后,作为免疫原接种BALB/C小鼠,并设置PBS缓冲液阴性对照组,制备多克隆抗体,纯化抗体后分析抗体效价及其特异性,同时用于免疫组织化学定位。7.通过免疫组织化学定位分析EmCNFN的组织定位情况,为进一步分析其是否参与囊壁形成并如何发挥作用奠定实验基础。结果:1.通过电子克隆得到EmCNFN基因序列,经生物信息学分析发现其编码193个氨基酸,属于不稳定的亲水性蛋白,定位于细胞膜和细胞外基质,无跨膜区和常见信号肽,无规则卷曲是其主要二级结构,有多个潜在的T、B细胞表位,在系统发育树上与人亲缘关系较远,适合作为治疗和诊断的潜在指标。2.成功构建EmCNFN原核表达载体,筛选得到IPTG最适诱导条件,获得大量可溶性的EmCNFN重组蛋白,分子量约为40.26 KD。纯化后带有His标签的EmCNFN重组蛋白可被His标签抗体制备识别。3.Western Blot结果显示,多房型包虫病患者血清和泡球蚴感染六个月SD大鼠血清可特异性识别EmCNFN重组蛋白,说明获得的重组蛋白具有良好的免疫反应性,但该重组蛋白不能被泡球蚴感染SD大鼠早期的血清识别。4.纯化后EmCNFN重组蛋白免疫接种BALB/C小鼠,获得较高效价的多克隆抗体,其可特异性识别EmCNFN重组蛋白和多房棘球绦虫天然角化蛋白,说明获得的重组蛋白具有良好的免疫原性。5.免疫组织化学结果显示,EmCNFN蛋白在泡球蚴囊壁、子囊囊壁和原头蚴中均有表达。结论:1.获得EmCNFN基因序列,编码193个氨基酸,属于PLAC8家族。2.成功构建EmCNFN-pET32a原核表达载体,获得大量可溶性表达的重组蛋白。3.EmCNFN重组蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,有望成为泡球蚴病中晚期诊断指标。4.获得特异性较好的、效价较高的EmCNFN蛋白多克隆抗体。5.EmCNFN蛋白在泡球蚴囊壁、子囊囊壁和原头蚴中均有表达,表明EmCNFN蛋白参与了多房棘球绦虫囊壁的形成。

关键词：多房棘球绦虫角化蛋白原核表达多克隆抗体组织定位

绵羊痒螨两种热休克蛋白（PsoHSP20和PsoHSP60）的组织定位及其重组蛋白的间接ELISA方法建立

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绵羊痒螨两种热休克蛋白（PsoHSP20和PsoHSP60）的组织定位及其重...

作者：蒲善秋四川农业大学

学位级别：硕士

痒螨病是由绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于家养(以兔、绵羊和水牛最常见)和野生动物体表的一种重要外寄生虫病,患病动物以脱毛、消瘦、结痂和剧痒为主要特征,给养殖业带来巨大的经济损失,同时严重损害动物健康影响生存福利。及时有效... 详细信息

痒螨病是由绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于家养(以兔、绵羊和水牛最常见)和野生动物体表的一种重要外寄生虫病,患病动物以脱毛、消瘦、结痂和剧痒为主要特征,给养殖业带来巨大的经济损失,同时严重损害动物健康影响生存福利。及时有效地诊断出感染动物是防控痒螨病的关键,但现有的病原学诊断方法对处于亚临床症状的病例极易漏检,而血清学诊断方法可以弥补上述问题。课题组前期的蛋白组学技术筛选到热休克蛋白(HSPs)可能是痒螨病的候选诊断抗原,但目前尚未见有关P.ovis HSP(PsoHSP)的研究报道。因此,本试验分析2种PsoHSP(PsoHSP20和PsoHSP60)天然蛋白的虫体与皮损区的组织定位,以及它们的重组蛋白(rPsoHSP20和rPsoHSP60)在兔痒螨病的血清学诊断和早期诊断潜能。本研究第一章成功从P.ovis总RNA中扩增出PsoHSP20和PsoHSP60基因,全长分别为546 bp和1755 bp,经原核表达获得重组PsoHSP20和PsoHSP60(rPsoHSP20和rPsoHSP60)大小分别约为37 k Da和75 k Da,均表达在菌液上清液中,为可溶性蛋白;两个重组蛋白均能被感染P.ovis的兔阳性血清所识别,具有良好的免疫反应原性;免疫荧光定位发现,雌虫中PsoHSP20和PsoHSP60广泛定位于虫体各部位,皮损区中PsoHSP20在痒螨病皮损区无定位信号,PsoHSP60定位于表皮层的颗粒层和棘层。以上结果为后期探究PsoHSP20和PsoHSP60生物学功能打下基础。本研究第二章以第一章获得的rPsoHSP20和rPsoHSP60作为包被抗原,建立间接ELISA(i ELISA)方法评估其用于痒螨病的诊断价值。结果发现rPsoHSP20-i ELISA和rPsoHSP60-i ELISA的最佳包被浓度分别为21μg/m L和18.5μg/m L,最佳血清稀释度分别为1:200和1:400;rPsoHSP20-i ELISA和rPsoHSP60-i ELISA的临界值分别为0.496和0.410,rPsoHSP20-i ELISA的敏感性、特异性和AUC值均高于和rPsoHSP60-i ELISA(rPsoHSP20-i ELISA:100.0%、95.5%、0.992;rPsoHSP60-i ELISA:81.0%、84.1%、0.883),表明rPsoHSP20较rPsoHSP60有更高的血清学诊断价值,故选用rPsoHSP20-i ELISA进行早期诊断评价,发现其在新西兰兔感染P.ovis后第2周(无明显结痂症状)的血清阳性率达80%(4/5),第3周阳性率达100%(5/5),表明rPsoHSP20具有早期诊断兔痒螨病的作用。进一步采用rPsoHSP20-i ELISA检测有P.ovis流行史的某兔场共88份血清,发现兔血清的阳性率(36.36%,32/88)高于传统病原学诊断的阳性率(28.41,25/88)。综上,rPsoHSP20-i ELISA可用于兔痒螨病的血清学诊断与早期诊断,且该方法较传统病原学诊断方法能检测出更多的亚临床感染病例,为今后兔痒螨病的早期诊断和防控提供技术支持。

关键词：绵羊痒螨兔痒螨病 HSP20 HSP60 组织定位间接ELISA 血清学诊断

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飞蝗双链RNA降解酶的抗体制备及组织定位

中国农业科学 2018年第19期51卷 3704-3713页

作者：宋慧芳张建琴范云鹤李涛马恩波张建珍山西大学应用生物学研究所山西大学生命科学学院农业有害生物综合治理山西省重点实验室山西大学中医药现代研究中心

【目的】双链RNA降解酶(dsRNA degrading enzyme, dsRNase)是制约RNA干扰(RNAi)技术在害虫防治中应用的关键因素之一。本研究旨在利用原核表达系统获得飞蝗LmdsRNase2和LmdsRNase3的特异抗原,进而制备抗体,对其进行组织定位和蛋白表达... 详细信息

【目的】双链RNA降解酶(dsRNA degrading enzyme, dsRNase)是制约RNA干扰(RNAi)技术在害虫防治中应用的关键因素之一。本研究旨在利用原核表达系统获得飞蝗LmdsRNase2和LmdsRNase3的特异抗原,进而制备抗体,对其进行组织定位和蛋白表达量检测,为进一步解析飞蝗中肠dsRNA降解酶基因的功能分化提供蛋白水平的证据。【方法】通过对LmdsRNase2和LmdsRNase3的氨基酸序列(GenBank:ARW74135.1和ARW74134.1)进行比对,分别选取特异的LmdsRNase2和LmdsRNase3抗原序列(R2’、R3’)进行后续的研究。根据LmdsRNase2和LmdsRNase3的cDNA全长序列,设计包含酶切位点BamH I、Hind Ⅲ的引物,采用PCR技术扩增目标片段,双酶切后连接至pET-32a载体。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,加入IPTG至终浓度为0.5mmol·L-1,37℃下诱导4 h后提取蛋白,采用SDS-PAGE电泳方法检测蛋白表达。大量培养带重组质粒的大肠杆菌,诱导目的蛋白大量表达,用镍柱亲和层析法分离R2’和R3’蛋白,Bradford法检测蛋白浓度。经两次免疫新西兰大白兔后,最终获得LmdsRNase2和LmdsRNase3的多克隆抗体。利用ELISA法测定多克隆抗体的效价,通过Western blot检测抗体的特异性。提取飞蝗5龄第3天的中肠组织蛋白和中肠液,分别用LmdsRNase2和LmdsRNase3的抗体检测其表达量。最后制备飞蝗5龄第3天的中肠石蜡切片,通过免疫组化对LmdsRNase2和LmdsRNase3蛋白进行亚细胞定位。【结果】通过氨基酸序列比对发现,LmdsRNase2和LmdsRNase3具有37%的序列一致度,选取特异的序列R2’和R3’设计引物,分别包含157和153个氨基酸残基,理论分子量分别为17.0和16.8 kD。在IPTG浓度为0.5 mmol·L-1条件下,37℃诱导4 h后,目的蛋白在包涵体中大量表达。扩大培养重组菌株后提取蛋白,用镍亲和层析柱分离得到纯度为85%的R2’蛋白,可直接用于免疫;而R3’蛋白的纯度低于85%,利用电泳切胶纯化后免疫新西兰大白兔,36 d后取抗血清进行检测,效价均达到1:102 400,表明抗体效果良好。用多克隆抗体杂交实验室保存的His-LmdsRNase2和His-LmdsRNase3融合蛋白,对抗体进行特异性检测,结果表明R2和R3的抗体分别特异性识别LmdsRNase2和LmdsRNase3,无交叉杂交现象,且条带与His抗体杂交到的条带大小一致。采用Western blot方法检测,发现LmdsRNase2蛋白在中肠组织中高表达,但在中肠液中未检测到可见表达,LmdsRNase3蛋白在中肠组织和中肠液中均未检测到表达。进一步采用免疫组化方法对两个蛋白进行组织定位,发现LmdsRNase2和LmdsRNase3均在中肠细胞质中表达,但LmdsRNae3的表达量较低。【结论】成功制备了特异性良好的飞蝗LmdsRNase2和LmdsRNase3抗体,Western blot和免疫组化分析表明LmdsRNase2在中肠细胞质中高表达,而LmdsRNase3的表达量很低。研究结果为飞蝗中肠两个dsRNA降解酶LmdsRNase2和LmdsRNase3的功能分化提供了蛋白水平的证据。

关键词：飞蝗 dsRNA降解酶多克隆抗体组织定位

亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第6期27卷 458-462页

作者：杜武英戴佳琳黄江胡旭初徐劲余新炳廖兴江郎书源贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510080

目的表达亚洲带绦虫(Taenia asiatica,Ta)成虫烯醇化酶(enolase,ENO)基因,并对其进行组织定位和免疫反应性分析。方法通过大规模测序从亚洲带绦虫cDNA文库中确定ENO基因,PCR扩增目的片段,将其克隆至表达质粒pET-30a(+),在大肠埃希菌BL-2... 详细信息

目的表达亚洲带绦虫(Taenia asiatica,Ta)成虫烯醇化酶(enolase,ENO)基因,并对其进行组织定位和免疫反应性分析。方法通过大规模测序从亚洲带绦虫cDNA文库中确定ENO基因,PCR扩增目的片段,将其克隆至表达质粒pET-30a(+),在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化重组蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白的免疫反应性。将重组蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清,ELISA检测抗体水平,间接免疫荧光检测确定ENO在亚洲带绦虫成虫组织中的定位。结果PCR、双酶切和DNA测序结果均表明,重组质粒pET-30a(+)-TaENO构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白TaENO的相对分子质量(Mr)为47000。经亲和层析获高纯度的蛋白,蛋白浓度为0.37mg/ml。重组蛋白TaENO能被SD大鼠抗血清、感染亚洲带绦虫的猪血清和患者血清识别。间接免疫荧光检测结果显示,TaENO主要定位于成虫的表膜。结论纯化后的亚洲带绦虫成虫烯醇化酶重组蛋白具有较强的免疫反应性,烯醇化酶主要定位于成虫表膜。

关键词：亚洲带绦虫烯醇化酶基因原核表达组织定位

马比木的显微荧光组织学定位及其中喜树碱的变化研究

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中草药 2010年第9期41卷 1530-1534页

作者：吕江明刘世彪蔡其辉田向荣吉首大学医学院湖南吉首416000 吉首大学植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室湖南吉首416000

目的对马比木Nothapotyes pittosporoides中的喜树碱进行组织学定位,并测定不同产地、不同生长季节和不同部位的马比木中喜树碱的量。方法采用荧光显微技术进行喜树碱的定位,高效液相色谱法进行测定。Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 m... 详细信息

目的对马比木Nothapotyes pittosporoides中的喜树碱进行组织学定位,并测定不同产地、不同生长季节和不同部位的马比木中喜树碱的量。方法采用荧光显微技术进行喜树碱的定位,高效液相色谱法进行测定。Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(6∶4)为流动相梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温20℃,检测波长254 nm。结果马比木中喜树碱主要积累于根部和茎部的韧皮部的分泌细胞内;喜树碱的量具有季节性变化规律,夏季低,春秋高;细根中喜树碱的量最高,主根次之,主茎、幼茎及叶的量依次递减。结论马比木喜树碱主要贮藏于根部树皮内,不同产地、不同季节、不同部位的马比木植物中的喜树碱量差异较大。

关键词：马比木喜树碱组织定位

不同发育阶段‘文紫椒1号’果色色素的比例和组织定位

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中国农学通报 2022年第10期38卷 38-45页

作者：屈用函袁恩平张雪廷王绍祥王灿赵水灵李罡顾凡张洪玲赵昶灵李桂琼陈杞临文山壮族苗族自治州农业科学院生态环境资源研究所云南文山663000 文山壮族苗族自治州农业科学院蔬菜研究所云南文山663000 云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201

研究旨在阐明‘文紫椒1号’果实在不同发育阶段的色素比例和组织定位,为丘北辣椒在观赏园艺中的应用和观赏型新奇果色新品种的选育提供参考。以种植于云南文山州砚山县的‘文紫椒1号’果实为试材,将果实分为5个发育阶段,用分光光度法检... 详细信息

研究旨在阐明‘文紫椒1号’果实在不同发育阶段的色素比例和组织定位,为丘北辣椒在观赏园艺中的应用和观赏型新奇果色新品种的选育提供参考。以种植于云南文山州砚山县的‘文紫椒1号’果实为试材,将果实分为5个发育阶段,用分光光度法检测了果实的叶绿素含量([Chl])、类胡萝卜素含量([Car])、总黄酮类含量(TFC)、总花色苷含量(TAC)和辣椒红素含量([Cap]),并分析其配比和相关性,同时用徒手切片法检测了色素的组织定位。结果表明,在发育过程中,‘文紫椒1号’果实[Chla]/[Chlb]的最大值出现在发育阶段3,[Chl(a+b)]/[Car]、[Chl(a+b)]/TFC和[Chl(a+b)]/TAC的最大值均出现在阶段2,而[Chl(a+b)]/[Cap]、TFC/TAC、TFC/[Cap]和TAC/[Cap]的最大值均出现在阶段1。[Chla]、[Chlb]、[Chl(a+b)]、[Car]、TFC、TAC和[Cap]之间的相关性不尽一致,其中,TAC与[Chl(a+b)]、TFC之间均呈不显著正相关,而与[Car]之间呈不显著负相关,[Cap]则与[Chl(a+b)]、[Car]、TFC和TAC之间分别呈显著负相关、极显著正相关、不显著正相关和不显著负相关。果实色素主要定位在中果皮细胞中,细胞的色相和色度变化趋势与果色的高度一致。所以,‘文紫椒1号’的果色源于各发育阶段果皮细胞中叶绿素、类胡萝卜素(含辣椒红素)和黄酮类(含花色苷)色素的比例差异。

关键词： ‘文紫椒1号’ 发育阶段果色色素比例组织定位

土壤干旱对葡萄果实中黄烷醇类多酚时空积累及隐色花色素还原酶活性、组织定位的影响

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中国农业科学 2013年第14期46卷 2979-2989页

作者：温鹏飞牛兴艳邢延富高美英牛铁泉山西农业大学园艺学院

【目的】葡萄果实发育过程中,土壤干旱对黄烷醇类多酚时空积累及其合成关键酶隐色花色素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)活性和组织定位的影响。【方法】以5年生赤霞珠葡萄为试材,采用避雨棚和断根沟措施模拟土壤干旱,跟踪果... 详细信息

【目的】葡萄果实发育过程中,土壤干旱对黄烷醇类多酚时空积累及其合成关键酶隐色花色素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)活性和组织定位的影响。【方法】以5年生赤霞珠葡萄为试材,采用避雨棚和断根沟措施模拟土壤干旱,跟踪果实发育进程,采用分光光度计法、免疫组织定位等方法,就黄烷醇类多酚的时空积累及其合成关键酶LAR活性和组织定位进行研究。【结果】土壤干旱明显抑制葡萄果实生长,促进果实总酚积累,特别是在幼果期,土壤干旱明显促进葡萄果实总酚积累。土壤干旱未改变黄烷醇类多酚和总黄烷-3-醇的时空积累模式,但对其积累具有一定的诱导作用,且这一诱导作用具有明显的器官和发育阶段依赖性。土壤干旱明显诱导幼果期葡萄果皮和果肉中LAR酶活性增强,对LAR1、LAR2分布无明显作用,但诱导其积累,特别是在果肉维管束中,土壤干旱明显诱导LAR1、LAR2蛋白积累。【结论】土壤干旱诱导果实中LAR1、LAR2蛋白积累,进而导致LAR酶活性增强,最终表现为促进相应发育阶段、部位黄烷醇类多酚积累。

关键词：葡萄果实土壤干旱黄烷醇类多酚 LAR 组织定位