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组织型纤溶酶原激活剂突变体的构建、表达及特性分析

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中国科学（B辑） 1995年第4期25卷 399-405页

作者：刘士辉黄培堂黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850

利用寡核苷酸诱导的定位突变技术及DNA重组技术构建了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的PAI-1结合位点Lys296～Gly302缺失的突变体de1(296～302),K1,K2区去糖基化突变体N117Q/N184Q,以及两者的组合突变体GGI,并在COS-7细胞中获得了暂时性表... 详细信息

利用寡核苷酸诱导的定位突变技术及DNA重组技术构建了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的PAI-1结合位点Lys296～Gly302缺失的突变体de1(296～302),K1,K2区去糖基化突变体N117Q/N184Q,以及两者的组合突变体GGI,并在COS-7细胞中获得了暂时性表达,并进一步在CHO细胞中稳定表达了组合突变体GGI.在此基础上对表达产物的生物学特性进行了分析,结果显示de1(296～302)和组合突变体GGI获得了PAI-1抗性,组合突变体GGI在与纤维蛋白亲和力未受损害的同时,特异活性约提高46％,半衰期延长约1倍.此组合突变体很可能成为优于野生t-PA的新型溶栓剂候选株.

关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体 PAI-1 t-PA

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组织型纤溶酶原激活剂基因在小鼠体内的表达

中国兽医学报 1998年第4期18卷 313-316页

作者：李银聚扈荣良赖良学岳军明金宁一殷震解放军农牧大学军事兽医研究所

将组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游，构建了重组质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。分别将这２种重组质粒直接注射... 详细信息

将组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游，构建了重组质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。分别将这２种重组质粒直接注射于小鼠骨骼肌，观察了ｔ－ＰＡ基因在小鼠体内的表达情况。体外凝血试验结果显示，注射重组质粒ＤＮＡ后，第５天凝血时间有所延长，第１５～２０天达到高峰，小鼠体外凝血时间平均延长７ｍｉｎ左右，延长时间与基因注射量呈明显的正相关。

关键词：小鼠组织型纤溶酶原激活剂基因表达

凝血酶增高NMDA受体敏感性与组织型谷氨酰胺转移酶的关系

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中华内科杂志 2005年第9期44卷 668-671页

作者：曾非余绍祖曾庆杏武汉大学人民医院神经内科 430060

目的探讨凝血酶增高大鼠的小脑颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)敏感性是否与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)变化有关.方法以0.01 U/ml浓度凝血酶单独或与tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC) 0.5×10-4 mol/L处理原代培养的Wistar大鼠小... 详细信息

目的探讨凝血酶增高大鼠的小脑颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)敏感性是否与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)变化有关.方法以0.01 U/ml浓度凝血酶单独或与tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC) 0.5×10-4 mol/L处理原代培养的Wistar大鼠小脑颗粒细胞30 min后,以0.1×10-4 mol/L、0.25×10-4 mol/L和0.5×10-4 mol/L 3种浓度NMDA作用3 h诱导上述处理的细胞凋亡,比较流式细胞仪检测到的细胞凋亡率差异以判断NMDA受体敏感性的变化;RT-PCR和Gelpro图像分析软件检测各NMDA浓度有/无凝血酶预处理的细胞内tTG mRNA变化差异.结果凝血酶预处理细胞后上述3种浓度NMDA诱导的细胞凋亡率均升高[(8.3±0.5～15.1±0.8)%, (14.1±1.1～23.8±0.7)%, (26.8±1.9～33.7±2.1)%].预处理细胞时加入MDC可阻断凝血酶对NMDA受体的这种影响,细胞凋亡率降至(5.8±1.2)%、(11.5±1.5)%和(19.0±1.7)%;凝血酶预处理后各浓度NMDA处理细胞内tTG mRNA量均同一浓度单独NMDA处理的细胞高.结论凝血酶通过增高细胞内tTG使小脑颗粒细胞NMDA受体敏感性增高.

关键词：受体 N-甲基-D-天冬氨酸凝血酶脱噬作用 NMDA受体谷氨酰胺转移酶敏感性组织型 N-甲基-D-天冬氨酸受体增高

脑血栓形成患者血浆组织型纤溶酶原激活物及其快速抑制物的变化及临床意义

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中华神经科杂志 1998年第5期31卷 267-269页

作者：龙洁曲辉白云于学英北京天坛医院神经内科

目的观察急性动脉硬化性脑血栓形成患者血浆组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其快速抑制物（ＰＡＩ１）的变化规律，探讨血浆纤溶活性在脑血栓发生、发展及转归中的作用；同时测查恢复期或后遗期脑血栓形成患者血浆ｔＰＡ及ＰＡ... 详细信息

目的观察急性动脉硬化性脑血栓形成患者血浆组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其快速抑制物（ＰＡＩ１）的变化规律，探讨血浆纤溶活性在脑血栓发生、发展及转归中的作用；同时测查恢复期或后遗期脑血栓形成患者血浆ｔＰＡ及ＰＡＩ１的变化规律，了解此类患者再次发生血栓的危险性。方法采用美国∑９６０酶标读数仪，用发色底物法对２５例急性脑血栓形成患者血浆ｔＰＡ及ＰＡＩ１活性进行动态测查（发病后１、３、７、１４及２１天），并与３８名健康对照组进行比较。同时对３３例恢复期或后遗期脑血栓形成患者血浆ｔＰＡ及ＰＡＩ１进行测查。结果急性脑血栓形成发病后２４小时内，血浆ｔＰＡ活性明显降低，随时间延长逐渐增高，第７天达最高水平，以后又呈逐渐降低趋势。ＰＡＩ１发病后２４小时内明显增高，第２天起随时间进展逐渐降低，第７天达最低水平，以后又呈逐渐增高趋势。除第７天、１４天外，各观测点血浆ｔＰＡ与ＰＡＩ１之比均明显低于正常对照组。恢复期或后遗期脑血栓形成患者血浆ｔＰＡ明显低于正常对照组，而ＰＡＩ１明显高于正常对照组。结论急性脑血栓形成患者血浆纤溶活性明显下降，说明血浆ｔＰＡ及ＰＡＩ１参与了血栓形成的病理过程；而恢复期或?

关键词：纤溶酶原激活物组织型 t-PA 脑血栓形成

用改良的寡核苷酸诱导的定位突变技术构建组织型纤溶酶原激活剂cDNA突变体

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军事医学科学院院刊 1995年第1期19卷 13-19页

作者：刘士辉黄培堂黄翠芬北京生物工程研究所北京100850

为了得到性能改善的组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）突变体，运用Ｐｒｏｍｅｇａ公司研制的改良的寡核苷酸诱导的定位突变技术，成功地构建了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ定位点突变、缺失突变及置换突变等多种突变体。ＤＮＡ序列分析表明突变... 详细信息

为了得到性能改善的组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）突变体，运用Ｐｒｏｍｅｇａ公司研制的改良的寡核苷酸诱导的定位突变技术，成功地构建了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ定位点突变、缺失突变及置换突变等多种突变体。ＤＮＡ序列分析表明突变频率达７５％以上。

关键词：组织型纤溶酶原激活剂寡核苷酸定位突变

乳头黏膜相关淋巴组织型结外边缘区B细胞淋巴瘤一例

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中华病理学杂志 2006年第1期35卷 58-59页

作者：王鹏余小蒙周小鸽张淑红张彦宁北京友谊医院病理科 100050

患者女,57岁.左侧乳头肿大半年余,因短期内迅速增大于2002年11月就诊.患者自发病以来无发热、消瘦及明显不适.体检:左侧乳头明显肿大,表皮粗糙;腋窝及颈部未触及肿大淋巴结.血象等辅助检查未见异常.乳头细针穿刺细胞学检查见大量单一、... 详细信息

患者女,57岁.左侧乳头肿大半年余,因短期内迅速增大于2002年11月就诊.患者自发病以来无发热、消瘦及明显不适.体检:左侧乳头明显肿大,表皮粗糙;腋窝及颈部未触及肿大淋巴结.血象等辅助检查未见异常.乳头细针穿刺细胞学检查见大量单一、异型的淋巴细胞,高度怀疑淋巴瘤,遂行门诊手术切除左侧乳头送检。

关键词： B细胞淋巴瘤结外边缘区黏膜相关乳头组织型肿大淋巴结患者

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组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

生物化学杂志 1991年第5期7卷 595-601页

作者：蒋滋慧王会信谢支光王芳刘农乐徐秀英周廷冲军事医学科学院基础医学研究所北京100850 四川川北医学院附属医院

本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活... 详细信息

本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。

关键词：纤溶酶激活剂组织型发光分析法

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组织型纤溶酶原激活物研究进展

国外医学（输血及血液学分册） 1995年第1期18卷 19-23页

作者：赵海霞内蒙古医学院微生物免疫教研室 010059

组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对于维持机体内纤溶和凝血两个系统的平衡、防止血栓形成起着重要作用。本文着重从t-PA分子的结构特征、生理作用机制、代谢调节以及血液中t-PA浓度变化在临床上的意义等几个方面,综述了近年来t-PA研究的新... 详细信息

组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对于维持机体内纤溶和凝血两个系统的平衡、防止血栓形成起着重要作用。本文着重从t-PA分子的结构特征、生理作用机制、代谢调节以及血液中t-PA浓度变化在临床上的意义等几个方面,综述了近年来t-PA研究的新进展。

关键词：组织型纤溶酶原激活物 t-PA 结构抗凝血药

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组织型纤溶酶原激活剂(TPA)

生物工程进展 1991年第5期11卷 54-55页

作者：张震元

一、产品概述 TPA是由人的血管内皮细胞产生的527个氨基酸序列组成的糖蛋白,其分子量为3万多至7万。它具有称之为索眼的结构,对构成血栓的纤维蛋白有亲和性。血栓是血管内产生的血块,血栓一旦产生,身体末端的微细血管堵塞,导致手脚麻... 详细信息

一、产品概述 TPA是由人的血管内皮细胞产生的527个氨基酸序列组成的糖蛋白,其分子量为3万多至7万。它具有称之为索眼的结构,对构成血栓的纤维蛋白有亲和性。血栓是血管内产生的血块,血栓一旦产生,身体末端的微细血管堵塞,导致手脚麻痹、脑梗塞、心肌梗塞等病症。血栓的主要成分被称为纤维蛋白的硬蛋白,纤维蛋白可被血纤维蛋白溶酶(简称纤溶酶)所分解,但纤溶酶通常以前体血纤维蛋白溶酶原(简称纤溶酶原)

关键词：纤溶酶原激活剂组织型 TPA