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核仁素表达下调对C_2C_(12) 细胞增殖与凋亡的影响

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中南大学学报（医学版） 2005年第2期30卷 125-129页

作者：王慷慨蒋磊鄂顺梅刘可张玲莉刘梅冬肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞... 详细信息

目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。

关键词：细胞增殖表达下调核仁素 C2C12细胞凋亡反义寡核苷酸技术 MTT法检测凝胶电泳检测流式细胞术免疫印迹增殖能力抑制琼脂糖 DNA 24h 组细胞酸处理百分率导入

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芪红胶囊对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的影响

中国中西医结合杂志 2005年第6期25卷 511-515页

作者：宋晓东王仑嵇波辛颖刘玉清惠汝太中国医学科学院阜外心血管病医院中德实验室北京100037 北京军区总医院干部病房中国中医研究院西苑医院心血管内科

目的探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法将培养细胞分为4组:病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Ann... 详细信息

目的探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法将培养细胞分为4组:病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Annexin-Ⅴ/PI染色观察各组细胞凋亡发生情况;并通过流式细胞仪分析各组细胞的凋亡发生率;应用RT-PCR方法观察与凋亡相关细胞因子的表达改变。结果病毒感染对照组细胞经Hoechst33258染色发现病毒感染后的细胞核出现强亮度的蓝色荧光,可观察到凋亡细胞的典型变化;Annexin-Ⅴ/PI染色可见HeLa细胞膜呈强绿色荧光,细胞核显强红色荧光;通过流式细胞仪检测PI染色的细胞DNA,发现病毒感染组出现明显凋亡峰;芪红胶囊加病毒组凋亡发生率明显下降,正常对照组细胞未发生凋亡;同时芪红胶囊能够调节与凋亡相关细胞因子的表达。结论芪红胶囊能够抑制柯萨奇病毒引起的细胞凋亡。

关键词：柯萨奇病毒 Hoechst33258 胶囊 RT-PCR方法相关细胞因子原位末端标记法流式细胞仪分析流式细胞仪检测心肌细胞凋亡 PI染色病毒感染后细胞DNA 对照组组细胞抑制作用培养细胞正常细胞发生情况染色观察 V/PI

乙型肝炎病毒阳性血清体外感染Hep G_2细胞的实验研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第2期19卷 169-171页

作者：王安辉门可徐德忠闫永平卢娟张景霞第四军医大学预防医学系流行病学教研室西安710032

目的　建立HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验方法。方法　培养HepG2 细胞传至6孔板中,2 4h后进行HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验。感染组用HBV阳性血清,阴性对照组用HBV阴性血清,空白对照组用DMEM培养基。实验开始后HepG2 细... 详细信息

目的　建立HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验方法。方法　培养HepG2 细胞传至6孔板中,2 4h后进行HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验。感染组用HBV阳性血清,阴性对照组用HBV阴性血清,空白对照组用DMEM培养基。实验开始后HepG2 细胞继续孵育2 4h ,而后用0 0 1mol LPBS清洗8次后加入2 %DMEM培养液。收集PBS第8次洗液,收集PBS洗后每隔12h各孔细胞培养上清。ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg。PCR检测细胞培养上清和HepG2 细胞中的HBVDNA。结果　感染组在PBS洗后12h的细胞培养上清中ELISA检测HBsAg呈阳性。PCR检测显示感染组细胞培养上清和HepG2 细胞中HBVDNA呈阳性,阴性对照组和空白对照组HBVDNA呈阴性。结论　HBV阳性血清进行HBV感染体外培养HepG2 细胞是可行的。

关键词： G2细胞阳性血清体外感染 Hep 乙型肝炎病毒实验研究 ELISA检测 DMEM培养基培养上清 HBsAg PCR检测 HBV阴性 HBV感染对照组 PBS DNA 实验方法体外培养 24h 培养液组细胞收集

HSPC016基因在凝集性生长人毛乳头细胞的表达

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中华皮肤科杂志 2005年第5期38卷 294-296页

作者：杨卫兵郝飞宋志强杨希川第三军医大学西南医院皮肤科重庆400038

目的确定造血干细胞相关基因HSPC016的表达与毛乳头细胞凝集性生长的关系。方法对凝集性生长的人毛乳头细胞、非凝集性生长的人毛乳头细胞和人真皮成纤维细胞分别进行细胞内mRNA原位杂交;用RT-PCR从以上3组细胞总RNA扩增HSPC016基因。... 详细信息

目的确定造血干细胞相关基因HSPC016的表达与毛乳头细胞凝集性生长的关系。方法对凝集性生长的人毛乳头细胞、非凝集性生长的人毛乳头细胞和人真皮成纤维细胞分别进行细胞内mRNA原位杂交;用RT-PCR从以上3组细胞总RNA扩增HSPC016基因。结果原位杂交发现HSPC016基因在凝集性生长的人毛乳头细胞表达,而在非凝集性生长的人毛乳头细胞和人真皮成纤维细胞均不表达;RT-PCR可以从凝集性生长的人毛乳头细胞RNA中扩增到约200bp目的片段,而不能从非凝集性生长人毛乳头细胞和人真皮成纤维细胞中扩增到相应目的片段。结论HSPC016基因在凝集性生长的人毛乳头细胞特异性表达,可能与毛乳头细胞的分化和功能状态有关。

关键词：人毛乳头细胞凝集性生长 6基因人真皮成纤维细胞 mRNA原位杂交 RNA扩增细胞RNA 特异性表达相关基因细胞表达功能状态 PCR 细胞内组细胞 RT 片段

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过氯酸铵对肺成纤维细胞的作用研究

环境与职业医学 2005年第2期22卷 122-124页

作者：杨建平彭开良赵素丽刘芸鲁翠荣蒋芸杨海兵浙江省宁波市疾病预防控制中心浙江宁波315000 华中科技大学同济医学院工业毒理室湖北武汉430030 航天科工集团六院四十六所内蒙古呼和浩特010000

[目的]探讨过氯酸铵(ammoniumperchlorate ,AP)对肺成纤维细胞(fibroblast ,FB)纤维化作用。[方法]原代培养小鼠胚胎肺FB ,稳定传代3次后台盼蓝染色,以细胞成活率>95 %确定0～40 0mg/L作为染毒浓度,以不同浓度的AP(0、5 0、10 0、2 0 0... 详细信息

[目的]探讨过氯酸铵(ammoniumperchlorate ,AP)对肺成纤维细胞(fibroblast ,FB)纤维化作用。[方法]原代培养小鼠胚胎肺FB ,稳定传代3次后台盼蓝染色,以细胞成活率>95 %确定0～40 0mg/L作为染毒浓度,以不同浓度的AP(0、5 0、10 0、2 0 0、40 0mg/L)染毒肺FB 48h后,测定各组细胞总蛋白质含量、增殖指标(MTT法测培养细胞D值)及羟脯氨酸(HYP)含量。本试验同时以石英(3 0 0mg/L)对肺FB染毒作为阳性对照。[结果]各AP染毒组肺FB蛋白质含量为5 3 5 9～5 8.69μg/ml,D值为0 .13 6～0 .14 6,HYP含量为0 .610～0 .688μg/ml,各AP染毒组之间比较差异均无显著性。石英组蛋白质含量为63 .19μg/ml,与各AP染毒组比较差异无显著性,但其D值0 .194、HYP含量1.182 μg/ml与各AP染毒组比较差异有显著性(P <0 .0 1)。[结论]肺FB在AP直接染毒作用下,未见肺FB增殖和肺胶原纤维增生等改变。

关键词：肺成纤维细胞过氯酸铵作用研究蛋白质含量纤维化作用台盼蓝染色显著性原代培养不同浓度羟脯氨酸培养细胞 MTT法阳性对照胶原纤维 FB增殖 HYP 染毒 AP 胚胎肺成活率组细胞 D值毒作用石英

乐果对U87细胞HSP70表达及AChE活性的影响

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环境与职业医学 2005年第2期22卷 105-108页

作者：谢芳周志俊吴强恩吴同俊复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室上海200032

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h... 详细信息

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h染毒,再分别用Western blot法和DTNB法检测各组细胞HSP70表达和AChE活性的变化,比较这两个指标变化的幅度以及引起此变化所需乐果浓度和染毒时间的差异。[结果]乐果染毒2h即可引起HSP70表达的显著增高(P 组,并可持续至染毒16h。在染毒2h和4h ,HSP70表达的变化与乐果剂量之间存在相关关系(Pearson相关系数分别为0 .916和0 .989,P 组,变化幅度也较小。[结论]乐果可以在相对较短时间内以较低剂量引起U87细胞HSP70表达的显著变化,并存在一定的剂量反应关系。HSP70比AChE对乐果更为敏感。

关键词： AChE活性乐果热应激蛋白70(HSP70) Western-blot法 HSP70表达表达及神经胶质瘤细胞剂量一反应关系乙酰胆碱酯酶 DTNB法不同浓度体外培养染毒时间指标变化相关系数相关关系敏感性 24h 组细胞出现低剂量幅度

骨髓基质细胞体外诱导分化为内皮细胞的超微结构研究

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首都医科大学学报 2005年第3期26卷 326-329页

作者：王春雪王拥军赵性泉万虹孙异临历俊华毛淑静刘丽萍首都医科大学附属北京天坛医院神经内科北京市神经外科研究所河北医科大学

目的采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导骨髓基质细胞(BMSC)的方法,探讨BMSC向内皮细胞分化的可行性.方法在无菌条件下采集SD大鼠(雄性,体质量150～160 g,10只)的长骨骨髓,获得骨髓细胞.实验组细胞以高质量浓度rhG... 详细信息

目的采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导骨髓基质细胞(BMSC)的方法,探讨BMSC向内皮细胞分化的可行性.方法在无菌条件下采集SD大鼠(雄性,体质量150～160 g,10只)的长骨骨髓,获得骨髓细胞.实验组细胞以高质量浓度rhGM-CSF(400 μg/L)为诱导剂,进行体外诱导分化;对照组培养基为常规1640培养液.培养至第8天,收集细胞后分别应用扫描电镜和透射电镜观察实验组分化后细胞的超微结构,并对分化后的细胞进行内皮细胞的鉴定.结果实验组细胞在透射电镜下可见内皮细胞结构特征及特征性的W-P小体结构,扫描电镜下可见细胞呈多边形,细胞膜表面有大量的细长丝状伪足及短小的微绒毛,符合内皮细胞的特点.结论 BMSC在高浓度的rhGM-CSF诱导作用下分化的细胞具有内皮细胞的形态学特征.

关键词：体外诱导分化骨髓基质细胞内皮细胞重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子结构研究 rhGM-CSF 透射电镜观察 BMSC 形态学特征细胞分化 SD大鼠骨髓细胞质量浓度超微结构扫描电镜结构特征胞膜表面诱导作用组细胞

盐酸去氧肾上腺素对体外培养兔角膜内皮细胞的毒性作用

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中国眼耳鼻喉科杂志 2005年第4期5卷 214-216,i002页

作者：刘瑶王爱莲邓红东南大学医学院附属中大医院眼科南京210009 东南大学医学院病理教研室 210009

目的观察盐酸去氧肾上腺素对体外培养家兔角膜内皮的作用,探讨临床应用去氧肾上腺素的可能毒性作用。方法体外培养家兔角膜内皮细胞,传代后加入0.625mg/ml、1.25 mg/ml、2.5 mg/ml、5mg/ml 4组不同浓度盐酸去氧肾上腺素,观察光镜下细胞... 详细信息

目的观察盐酸去氧肾上腺素对体外培养家兔角膜内皮的作用,探讨临床应用去氧肾上腺素的可能毒性作用。方法体外培养家兔角膜内皮细胞,传代后加入0.625mg/ml、1.25 mg/ml、2.5 mg/ml、5mg/ml 4组不同浓度盐酸去氧肾上腺素,观察光镜下细胞的形态变化和增殖情况,72h 后 MTT 法检测各组细胞的吸光度值,对比不同浓度实验组细胞吸光度并进行统计学处理。结果加药4h 后5mg/ml 实验组细胞出现空泡;30h 后2.5mg/ml、5mg/ml 实验组细胞部分死亡;60h 后1.25mg/ml、2.5mg/ml 实验组原空泡变细胞大部分死亡;0.625mg/ml 实验组细胞无明显变化。1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml 实验组细胞吸光度值与空白及阴性对照的差异经统计学分析有极显著意义(P组分别与空白对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸去氧肾上腺素对体外培养兔角膜内皮细胞有损伤作用,并有时间和浓度相关性。

关键词：盐酸去氧肾上腺素角膜内皮细胞体外培养毒性作用 MTT法检测经统计学分析不同浓度吸光度值阴性对照组细胞统计学处理临床应用形态变化 72h后损伤作用实验组对照组相关性家兔 ml 空泡

牙髓细胞平均DNA含量变化与PMI相关性的研究

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美国中华临床医学杂志 2005年第3期7卷 189-190,194页

作者：王伟平龙仁熊平湖南省衡阳市中级人民法院湖南衡阳421001 南华大学法医病理学教研室湖南衡阳421001

目的探讨两组不同环境温度下(30～35℃，15～20℃)人死后牙髓细胞平均DNA含量与PMI之间的相关性，寻求推断死亡时间的一种新手段。方法应用计算机细胞图像分析技术分析人死后0～15d牙髓细胞内平均DNA含量的降解情况。结果高、低两温度... 详细信息

目的探讨两组不同环境温度下(30～35℃，15～20℃)人死后牙髓细胞平均DNA含量与PMI之间的相关性，寻求推断死亡时间的一种新手段。方法应用计算机细胞图像分析技术分析人死后0～15d牙髓细胞内平均DNA含量的降解情况。结果高、低两温度组细胞平均DNA的降解在死后一定时间出现一个平台期，分别0～3d、0～6d。平台期后DNA的降解加速。统计学分析牙髓细胞内平均DNA含量变化与PMI之间有显著相关性(P细胞平均DNA含量与PMI的关系曲线可作为推断PMI的方法之一。

关键词：牙髓细胞含量变化 PMI 相关性的研究平均 DNA含量图像分析技术统计学分析环境温度死亡时间方法应用细胞内平台期死后降解计算机组细胞推断