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缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体损伤的影响

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中华麻醉学杂志 2009年第4期29卷 356-358页

作者：冷玉芳胡文胜顾俊明赵秀华兰州大学第一医院麻醉科 730000 江苏省太仓市第一人民医院麻醉科

目的评价缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时线粒体损伤的影响。方法雄性SD大鼠30只，体重180～230g，随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、肝缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理组（IPo组）。IR组和IPo组采用阻断肝门60min再灌注6h的方... 详细信息

目的评价缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时线粒体损伤的影响。方法雄性SD大鼠30只，体重180～230g，随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、肝缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理组（IPo组）。IR组和IPo组采用阻断肝门60min再灌注6h的方法制备肝缺血再灌注模型，IP0组缺血60min时再灌注10s、缺血10s，反复6次，进行缺血后处理。于再灌注6h时取静脉血样，测定血清谷丙转氨酶（ALT）及天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，然后取肝组织，制备病理切片及分离肝细胞，电镜下观察线粒体超微结构，测定线粒体膜电位及线粒体Na^＋-K^＋-ATP酶活性。结果与S组比较，IR组和IPo组血清ALT和AST活性升高，线粒体Na^＋-K^＋-ALP酶活性及线粒体膜电位降低（P〈0．01）；与IR组比较，IPo组血清ALT和AST活性降低，线粒体Na^＋-K^＋-ATP酶活性及线粒体膜电位升高（P〈0．05或0．01）。IPo组线粒体损伤程度轻于IR组。结论缺血后处理可减轻大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体损伤。

关键词：肝再灌注损伤线粒体,肝缺血后处理

线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

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中华普通外科杂志 2007年第10期22卷 781-784页

作者：张伟张峰吕凌曹晓飞浦立勇刘现忠南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心中国活体肝移植研究所 210029

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,假手术组（sham,S）,缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion,IR）组,对照组（control,C）,二氮嗪... 详细信息

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,假手术组（sham,S）,缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion,IR）组,对照组（control,C）,二氮嗪（diazoxide,DZ）预处理组,DZ＋ 5-羟基葵酸（5-hydroxydecanoate,5-HD）预处理组,以及5-HD预处理组。再灌注后,取肝脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）,免疫组化检测Bcl-2,Bax,caspase-3表达。结果其他各组与S组相比,血清ALT、AST水平升高（P〈0.05）,C组与IR组之间AIX、AST水平无差异（P〉0.05）。DZ预处理组大鼠血ALT、AST水平较IR组明显改善,肝细胞凋亡减少,为（14.5±4.5）%（P〈0.05）,Bax及caspase-3表达降低,分别为15.7±5.4,15.1±6.3（P〈0.05）,而Bcl-2表达升高（18.5±5.8）（P〈0.05）,5-HD能阻断DZ的保护作用,使肝细胞凋亡（25.6±7.9）%增加,Bcl-2表达（13.4±5.7）下降,caspase-3表达（25.0±6.6）升高（P〈0.05）。单独应用5-HD时与IR组相比肝脏细胞凋亡（30.4±8.7）%和caspase-3（33.8±7.1）表达增加（P〈0.05）,Bax（31.2±7.0）和Bcl-2（9.1±3.6）差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论线粒体ATP敏感性钾通道的开放对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,它可能是通过上调Bcl-2表达,下调Bax和caspase-3表达,抑制肝脏细胞凋亡而起作用的。

关键词：线粒体,肝钾通道二氮嗪再灌注损伤

黄芩水煎液对CCl_4肝损伤小鼠肝线粒体的影响

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中国中医药科技 2015年第6期22卷 641-643页

作者：耿广琴杨志军杨秀娟李晶甘肃中医药大学兰州730000

目的:观察黄芩水煎液对CCl4致肝损伤小鼠肝线粒体的影响,揭示黄芩保肝的作用机制。方法:将48只小鼠,随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯对照组、黄芩组。正常对照组、模型组每日给予0.2 m L/10 g生理盐水,联苯双酯组每日给予0.150 m... 详细信息

目的:观察黄芩水煎液对CCl4致肝损伤小鼠肝线粒体的影响,揭示黄芩保肝的作用机制。方法:将48只小鼠,随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯对照组、黄芩组。正常对照组、模型组每日给予0.2 m L/10 g生理盐水,联苯双酯组每日给予0.150 mg/g联苯双酯,黄芩组每日灌服6 g/kg黄芩水煎液,连续灌胃7天。末次给药2小时后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射0.1%CCl4橄榄油溶液0.1m L/10 g建立小鼠肝损伤模型,正常对照组腹腔注射等体积橄榄油。18小时后,剖取肝脏,检测肝线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性,观察肝线粒体超微结构损伤。结果:黄芩水煎液可明显增强小鼠肝线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性(P线粒体肿胀,嵴缩短、消失,基质出现空泡变性;黄芩组多数线粒体超微结构正常。结论:黄芩水煎液可通过增强线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活力及稳定和保护线粒体的结构,改善CCl4致小鼠肝脏能量代谢障碍,而起到保护肝脏的作用。

关键词： @肝损伤黄芩水煎液线粒体,肝呼吸链复合体Ⅰ 呼吸链复合体Ⅳ小鼠

线粒体内柠檬酸合成酶和肉毒碱棕榈酰转移酶-1及细胞色素C氧化酶在大鼠急性肝衰竭模型中的表达

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中华肝脏病杂志 2014年第6期22卷 -页

作者：陈立艳杨宝山周莉段钟平刘文娟丁美 150001 哈尔滨医科大学附属第二医院感染二病房首都医科大学附属北京佑安医院人工肝科

目的观察急性肝衰竭(ALF)中决定肝细胞能量代谢特点的线粒体内关键酶:柠檬酸合成酶(CS)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、细胞色素C氧化酶(COX)的活性变化.方法 40只雄性SD大鼠分为对照组、造模4h组、造模8h组、造模12 h组及造模24 h组.... 详细信息

目的观察急性肝衰竭(ALF)中决定肝细胞能量代谢特点的线粒体内关键酶:柠檬酸合成酶(CS)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、细胞色素C氧化酶(COX)的活性变化.方法 40只雄性SD大鼠分为对照组、造模4h组、造模8h组、造模12 h组及造模24 h组.模型组给予D-氨基半乳糖800 mg/kg和脂多糖100μg/kg联合腹腔注射构建大鼠ALF模型,对照组给予0.9％的等渗盐水1ml腹腔注射.检测各组大鼠ALT、AST、总胆红素、血清白蛋白、凝血酶原时间和凝血酶原活动度;观察肝脏病理和线粒体超微结构变化;检测各组大鼠肝脏线粒体中的CS、CPT-1和COX的活性及mRNA水平,并分析其与肝细胞凋亡及线粒体超微结构之间的关系.方差分析进行各组间总体差异的比较,独立样本t检验进行两组之间差异的比较.结果通过生物化学检查和肝脏病理检查证实本实验的动物模型构建成功.大鼠ALF造模4h时可见肝细胞凋L的出现,8h时凋亡非常明显,12h时可见肝细胞的坏死,24 h时肝脏组织内肝细胞坏死更为显著,并有炎症细胞的浸润.电镜观察线粒体的超微结构发现,模型4h组就已经发生了变化,到24 h时线粒体的外膜结构几乎完全破坏,线粒体崩解.CS、CPT-1、COX的活性在4h均开始升高,8h达到高峰,12h开始下降,24 h下降更为明显.造模8h组与正常组相比,CS[(0.030 8±0.008 2)μmol/min对比(0.004 0±0.001 6)μmol/min]、CPT 1[(0.130 3±0.075 8)μmol/min对比(0.033 4±0.008 3)μmol/min]和COX[(0.022 9±0.002 9)μmol/min对比(0.004 8±0.0007)μmol/min]差异均有统计学意义(t值分别为1.481、2.619和1.014,P＜0.05或P＜ 0.01).结论大鼠ALF过程中,CS、CPT-1和COX活性在肝细胞凋亡时升高,其参与了ALF的发生和发展,尤其是促进了肝细胞凋亡的发生.

关键词：肝功能衰竭,急性线粒体,肝 ATP柠檬酸(pro-S)裂合酶肉碱O-软脂酰转移酶细胞色素C氧化酶

人遗传印记基因PEG10对L02细胞线粒体膜电位的影响

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中华肝脏病杂志 2008年第5期16卷 391-392页

作者：廖家智张琼田德安覃华吴小力林菊生华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科武汉430030

人遗传印记基因PEG10定位于人7号染色体长臂2区1带，是一个反转座子衍生而来的父系表达的遗传印记基因。PEG10基因高表达于肝癌细胞系HepG2和大多数肝细胞癌组织中，在良性肝病组织及非肝脏来源的肿瘤细胞系中没有检测出该基因的表达。P... 详细信息

人遗传印记基因PEG10定位于人7号染色体长臂2区1带，是一个反转座子衍生而来的父系表达的遗传印记基因。PEG10基因高表达于肝癌细胞系HepG2和大多数肝细胞癌组织中，在良性肝病组织及非肝脏来源的肿瘤细胞系中没有检测出该基因的表达。PEG10基因的表达水平与肝细胞癌的转移潜能正相关，并且可以促进正常人肝细胞L02增殖，提示PEG10基因可能在人肝细胞癌的发生过程中起重要作用。本研究通过检测L02细胞转染前后线粒体膜电位及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的改变，初步探讨PEG10基因促人肝细胞增殖的机制。

关键词：线粒体,肝膜电位 PEG10

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线粒体与肝细胞损伤的关系

临床肝胆病杂志 2020年第3期36卷 687-689页

作者：魏海梁司明明郭辉李京涛李倩闫曙光鞠迪陕西中医药大学附属医院普外一科陕西咸阳712000 陕西中医药大学附属医院肝病科陕西咸阳712000 陕西中医药大学基础医学院陕西咸阳712046

在肝脏组织中,线粒体不但为肝细胞的物质代谢提供了能量,同时还广泛参与了肝细胞损伤甚至凋亡的过程,在与肝细胞损伤、凋亡密切相关的肝炎、肝纤维化、肝癌癌前病变及肝癌的病理过程中也发挥了重要的作用。从线粒体膜通透性的改变在肝... 详细信息

在肝脏组织中,线粒体不但为肝细胞的物质代谢提供了能量,同时还广泛参与了肝细胞损伤甚至凋亡的过程,在与肝细胞损伤、凋亡密切相关的肝炎、肝纤维化、肝癌癌前病变及肝癌的病理过程中也发挥了重要的作用。从线粒体膜通透性的改变在肝细胞损伤中的重要作用、ATP合成障碍及消耗加速肝细胞损伤以及肝细胞线粒体Ca 2+稳态异常与肝细胞损伤关系等方面阐述了线粒体与肝细胞损伤之间的关系,以期以线粒体为靶点,为防治肝细胞损伤引起的慢性肝脏疾病提供理论依据。

关键词：线粒体,肝肝疾病肝细胞损伤

靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响

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中华传染病杂志 2009年第8期27卷 454-460页

作者：黄嵘峰林纳陈红英陈治新王小众福建医科大学附属协和医院消化内科福州350001

目的构建并鉴定靶向HBVX蛋白（HBx）小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒，观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702／HBx线粒体功能的影响。方法设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列，克隆至载体psiRNA—Hh1GFP... 详细信息

目的构建并鉴定靶向HBVX蛋白（HBx）小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒，观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702／HBx线粒体功能的影响。方法设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列，克隆至载体psiRNA—Hh1GFPzeo中，构建重组表达质粒pX1和pX2，并以不针对任何序列的重组质粒pScr作为对照。通过脂质体介导转染入HL-7702／HBx肝细胞株，RT—PCR及Western印迹检测其对HBx的阻抑效应。流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位（Δψm）水平的变化。采用方差分析对实验结果进行统计分析。结果酶切鉴定和测序结果证实pX1和pX2构建成功。pScr、pX1、pX2分别转染入HL-7702／HBx细胞48h后，空白对照组HBxmRNA和蛋白表达水平分别为0．65±0．12和0．62±0．09，pX1组分别为0．33±0．10和0．19±0．08，明显低于空白对照组（t=4．73，P〈0．05；t=7．53，P〈0．05），pX2组分别为0．48±0．10和0．37±0．11，亦明显低于空白对照组（t=2．39，P〈0．05；t=4．43，P〈0．05），但pXl组抑制效果强于pX2组（t=2．28，P〈0．05）。RNA干扰后细胞内ROS水平为5．00±0．38，Aqrm水平为33．864-0．50；空白对照组ROS为72．10±0．55，AWm为3．57±0．26（t=276．22，P〈0．05；t=107．15，P〈0．05）。结论靶向HBx的siRNA能特异性抑制HBx在HL-7702／HBx细胞中的表达，并降低细胞内ROS水平，提高AWm水平，减轻细胞内氧化应激反应。

关键词：肝炎病毒,乙型病毒蛋白质类 RNA,小分子干扰氧膜电位线粒体,肝

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抗结核药致肝细胞线粒体的氧化损伤

中华传染病杂志 2011年第11期39卷 659-663页

作者：张炜张冰郝金奇黄晓林鲍筝周剑平冯福民河北联合大学公共卫生学院流行病与卫生统计学科河北省煤矿卫生与安全实验室唐山063000

目的探讨抗结核药对小鼠肝细胞线粒体功能的影响，为减少抗结核药致肝损伤发生提供实验依据。方法150只昆明种小鼠分成5组，分别为对照组（C组）、利福平（RFP）组、异烟肼（INH）组、吡嗪酰胺（PZA）组以及三种药物的混合组（MIX），... 详细信息

目的探讨抗结核药对小鼠肝细胞线粒体功能的影响，为减少抗结核药致肝损伤发生提供实验依据。方法150只昆明种小鼠分成5组，分别为对照组（C组）、利福平（RFP）组、异烟肼（INH）组、吡嗪酰胺（PZA）组以及三种药物的混合组（MIX），分别予0．9％氯化钠溶液0．3mL／d，RFP135mg·kg^-1·d^-1，INH90mg·kg^-1·d^-1，PZA315mg·kg^-1·d^-1和RFP＋INH＋PZA（135＋90＋315）mg·kg^-1·d^-1，每天灌胃给药一次，在用药3、7和15d分批处死小鼠取标本。动态观察各组肝细胞线粒体丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性和线粒体DNA（mtDNA）中8羟基脱氧鸟苷（8-OH—dG）含量。采用单因素方差分析或秩和检验。结果随着用药时间的延长，RFP组（Z=6．020，P=0．049）、INH组（Z=10．220，P=0．006）和MIX组（Z=7．460，P=0．024）MDA含量逐步增高，RFP组（F=6．751，P=0．011）和MIX组（F=4．891，P=0．041）的SOD活性低于对照组和PZA组，RFP组GSH—PX活性明显减低（F=32．445，P〈0．01），其余各组无明显变化规律。各组8=OH—dG含量随用药时间延长均有升高趋势，其中RFP组（F=6．602，P〈0．01）、PZA组（F=5．927，P〈0．01）和MIX组（F=7．974，P〈0．01）升高明显。结论抗结核药可导致小鼠肝细胞线粒体内MDA和mtDNA中8-OH-dG含量升高，SOD和GSH—PX活性降低。随着用药时间的延长损伤呈加重趋势，三种药物联合用药，可加重对小鼠肝细胞线粒体的损伤程度。

关键词：结核肝炎,中毒性线粒体,肝丙二醛 DNA,线粒体脱氧鸟苷

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备

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中国病理生理杂志 2009年第3期25卷 595-596,600页

作者：陈涛 Bhatta SK 刘建平林浩铭万云乐陈翔罗兴喜区庆嘉中山大学附属第二医院肝胆胰脾外科广东广州510120

目的:探索生物荧光定量分析三磷酸腺苷作为评估肝实质功能的可行性。方法:选择2005-2006年入住我院肝胆胰脾外科的32例肝病患者(26例为恶性肝病,6例为良性肝病)作为研究对象,男27例(84.38%),女5例(15.62%),中位年龄53.87(范围33-76)岁... 详细信息

目的:探索生物荧光定量分析三磷酸腺苷作为评估肝实质功能的可行性。方法:选择2005-2006年入住我院肝胆胰脾外科的32例肝病患者(26例为恶性肝病,6例为良性肝病)作为研究对象,男27例(84.38%),女5例(15.62%),中位年龄53.87(范围33-76)岁。所有患者均于术前进行谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)常规肝生化检查。术中根据肝脏形态学改变将患者进行分组,分别为正常组7例(21.88%);大结节硬化组9例(28.12%);小结节硬化组16例(50.00%)。无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,经过酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数、ATP的提取和检测等步骤,最后换算出每个肝细胞ATP含量检测;进一步将ATP数据与术前肝功能其它指标(AST、TBIL)进行相关分析。结果:ATP含量在大结节硬化组明显较正常组增高[(1224.66±373.37)mol/cellvs(438.66±186.97)mol/cell,P肝细胞ATP(mole/cell)水平与术前生化检查AST(R=0.60933,P肝细胞ATP检测水平有可能作为评估肝实质储备功能的指标,ATP水平可能用于预测手术风险及术后恢复过程。

关键词：腺苷三磷酸线粒体,肝肝硬化荧光素酶