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分离自新生儿肺炎链球菌的青霉素与红霉素耐药基因研究

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临床检验杂志 2005年第4期23卷 293-293,301页

作者：郑亚芬黄瑞萍承小京韩小亚常州市妇幼保健院江苏常州213003

我国多中心研究发现,无论是自儿童还是成人分离的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae),对青霉素、红霉素耐药呈迅速上升趋势[1-2].我们对分离自常州地区新生儿呼吸道的20株对青霉素耐药的肺炎链球菌与青霉素耐药相关的青霉素结合蛋白... 详细信息

我国多中心研究发现,无论是自儿童还是成人分离的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae),对青霉素、红霉素耐药呈迅速上升趋势[1-2].我们对分离自常州地区新生儿呼吸道的20株对青霉素耐药的肺炎链球菌与青霉素耐药相关的青霉素结合蛋白2编码序列pbp2B基因、与红霉素耐药相关的erm、mefA基因进行了检测与分析,现报道如下.

关键词：红霉素耐药肺炎链球菌基因研究分离青霉素耐药新生儿呼吸道 mefA基因研究发现上升趋势编码序列常州地区多中心 B基因蛋白2 erm 相关

人工诱导空肠弯曲菌红霉素耐药株的生物学特性及蛋白质组学分析

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人工诱导空肠弯曲菌红霉素耐药株的生物学特性及蛋白质组学分析

作者：王燕扬州大学

学位级别：硕士

空肠弯曲菌'Campylobacter jejuni)是重要的人兽共患病原菌,能引起人的腹泻性肠炎。在少数情况下,空肠弯曲菌的感染会导致格林-巴利综合症。大环内酯类的红霉素是治疗空肠弯曲菌病的首选药物。但随着红霉素的广泛使用,空肠弯曲菌对红霉... 详细信息

空肠弯曲菌'Campylobacter jejuni)是重要的人兽共患病原菌,能引起人的腹泻性肠炎。在少数情况下,空肠弯曲菌的感染会导致格林-巴利综合症。大环内酯类的红霉素是治疗空肠弯曲菌病的首选药物。但随着红霉素的广泛使用,空肠弯曲菌对红霉素耐药率不断升高,空肠弯曲菌红霉素的耐药性已成为一个重要的临床问题。因此,研究和克服空肠弯曲菌对红霉素的耐药性问题,探索和发现其耐药机制,对研发低毒、高效、选择性强的抗菌药物具有重要意义。随着分子生物学的迅速发展,空肠弯曲菌红霉素的耐药机制研究取得了一些进展,但还不能完全来解释空肠弯曲菌红霉素耐药的形成。空肠弯曲菌对红霉素耐药性的获得是多层次多基因水平的变异积累过程,所以可以从整体水平上分析空肠弯曲菌红霉素耐药相关蛋白的表达,鉴定并了解其功能。本研究的目的是：(1)建立体外诱导空肠弯曲菌红霉素耐药株的方法,分析耐药基因的突变对空肠弯曲菌红霉素耐药株生理特性的影响。(2)利用二维电泳技术分析比较空肠弯曲菌红霉素耐药株与其亲本敏感株的蛋白质组学特性,寻找空肠弯曲菌红霉素耐药株可能的耐药相关蛋白。一、空肠弯曲菌红霉素耐药株的诱导及其生物学特性的研究本研究通过将空肠弯曲菌红霉素敏感株在红霉素梯度平板上不断地传代筛选,最终获得7株空肠弯曲菌红霉素耐药株RGXY122R、d-2-3R、C31-10R、SO-12-5R、PO-13-9R、PO-19-5R、11168R。测定这7株耐药株的稳定性、生化反应和药敏,结果显示诱导的耐药株在无抗的平板上传30代后,仍能生长于高浓度红霉素的平板上,且耐药性的改变对该菌代谢方面没有显著的影响;空肠弯曲菌红霉素耐药性获得后,不影响其对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类抗生素的耐药性。建立了可靠的体外诱导空肠弯曲菌红霉素耐药株的模型。对空肠弯曲菌人工诱导红霉素耐药株和天然耐药株的耐药基因和外排泵的检测结果显示,诱导耐药株RGXY122R、d-2-3R、C31-10R发生了23S rRNA基因的突变,SO-12-5R、 PO-13-9R、PO-19-5R、11168R同时发生了rplD和rplV基因的突变,而天然耐药株则只发生23S rRNA基因的突变。诱导耐药株23S rRNA基因的突变在2074位点,而天然耐药则在2075位点。诱导耐药和天然耐药都不发生cmeB基因的突变。外排泵都能降低诱导耐药株与天然耐药株对红霉素的耐药性。这一结果表明空肠弯曲菌红霉素诱导耐药株比天然耐药株具有多样、复杂的耐药机制。将诱导空肠弯曲菌产生红霉素耐药性的传代次数及耐药株的来源、药敏、毒力和增殖能力与耐药基因的突变类型结合分析显示空肠弯曲菌禽源株倾向于发生23S rRNA基因突变,而人源株则倾向于发生rplD和rplV基因的突变。23S rRNA基因的突变能产生高水平的耐药,但其对人肠上皮细胞Caco-2和鸡巨噬细胞HD-11的黏附侵袭率及在鸡巨噬细胞HD-11中增殖能力是下降的,同时23S rRNA基因的突变还能引起克林霉素的耐药。而rplD和rplV基因能引起低水平的红霉素耐药,增殖能力降低。二、空肠弯曲菌红霉素诱导耐药株与其亲本敏感株的比较蛋白质组学研究本研究通过丙酮-三氯醋酸沉淀法提取空肠弯曲菌红霉素诱导耐药株11168R与其亲本敏感株11168的菌体蛋白。用7cm pH3-10的胶条进行二维电泳发现蛋白点主要集中于pH4-7之间,在用17cm pH4-7的胶条重复进行3次二维电泳,PDQust8.0软件分析,大约共鉴定出500个蛋白点,其中9个在耐药株中是上调的,2个下调。这11个差异蛋白点经质谱成功鉴定,将11个鉴定成功的蛋白进行功能分类,分别有5个能量代谢相关蛋白、3个毒力相关蛋白、2个转录翻译相关蛋白及1个生物合成相关蛋白。能量代谢相关蛋白上调说明空肠弯曲菌在耐药形成过程中,对能量的需求增加;毒力相关蛋白上调,说明空肠弯曲菌获得红霉素耐药后,毒力增加。其中GalU、Enolase、NusG、FusA蛋白经STRING9.05软件分析能与核糖体蛋白相互作用,是可能的耐药相关蛋白。通过荧光定量PCR验证二维电泳,结果显示除了fumC和fba基因在mRNA水平上无明显差异,其余基因在mRNA水平表达差异与二维电泳结果一致。

关键词：空肠弯曲菌红霉素耐药诱导耐药二维电泳耐药相关蛋白

红霉素耐药粪肠球菌ermB基因及水平转移分析

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职业与健康 2020年第6期36卷 745-748页

作者：卢大雷桓新王乐冯卫东马颖冯彩丽开封市医学科学研究所微生物研究室河南开封475000

目的研究临床分离的红霉素耐药粪肠球菌中红霉素耐药基因ermB及其水平转移情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)法检测红霉素耐药粪肠球菌耐药基因ermB,采用液体环境传递法研究红霉素耐药基因ermB水平转移情况。结果 20株耐红霉素粪肠球菌... 详细信息

目的研究临床分离的红霉素耐药粪肠球菌中红霉素耐药基因ermB及其水平转移情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)法检测红霉素耐药粪肠球菌耐药基因ermB,采用液体环境传递法研究红霉素耐药基因ermB水平转移情况。结果 20株耐红霉素粪肠球菌中ermB基因17株为阳性,阳性率为85.00%。液体环境传递实验结果表明,3.57%(10/280)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌之间液体环境中水平转移;1.39%(4/288)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与葡萄球菌之间液体环境中水平转移;无法统计菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与大肠杆菌之间液体环境中水平转移情况。结论耐红霉素粪肠球菌ermB基因携带率较高,且该基因在粪肠球菌间和异种菌株间液体环境下可发生水平转移。

关键词：粪肠球菌红霉素耐药 ermB 基因水平转移

红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的研究

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中国血液流变学杂志 2014年第2期24卷 308-310页

作者：张宇蔺苏州市立医院本部检验科江苏苏州215002

目的：了解临床分离的红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的发生率，比较双纸片扩散法（D试验）中纸片之间距离对试验结果的影响。方法VITEK-2微生物分析系统检测为红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌135株，其中金黄色葡... 详细信息

目的：了解临床分离的红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的发生率，比较双纸片扩散法（D试验）中纸片之间距离对试验结果的影响。方法VITEK-2微生物分析系统检测为红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌135株，其中金黄色葡萄球菌（SA）为55株，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）为80株。比较红霉素纸片与克林霉素纸片边距15 mm与26 mm对结果的影响。结果 D试验阳性率为57.0%，其中SA阳性率70.9%， CNS为47.5%（P＜0.01）。纸片边距15 mm组D试验阳性77株，26 mm组仅69株，漏检率10.4%（P＜0.05）。结论实验室应常规开展D试验，D试验中双纸片间距以15 mm为佳。

关键词：红霉素耐药葡萄球菌克林霉素诱导性耐药 D试验

肺炎链球菌分离株红霉素耐药erm、mef基因检测研究

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江苏大学学报（医学版） 2003年第5期13卷 414-415,417页

作者：丁云芳糜祖煌陶云珍亓晓秦玲苏州大学附属儿童医院检验科江苏苏州215003 无锡克隆遗传技术研究所江苏无锡214026 上海复旦大学公共卫生学院上海200032

目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月～ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染... 详细信息

目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月～ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 2 3株Sp菌 (红霉素敏感表型 3例、中敏 3例、耐药 17例 )进行检测。结果 :红霉素耐药、中敏、敏感Sp菌分别检出耐药基因 94.1% (16 17)、10 0 %、3 3 .3 % (1 3 )。ermB基因PCR检出率 43 .5% (10 2 3 ) ;ermA ermB基因通用兼并引物PCR检出率 69.6% (16 2 3 ) ;mefA基因PCR检出率 2 6.1% (6 2 3 ) ;erm或和mef基因检出率 87.0 % (2 0 2 3 )。携带erm基因的耐药表型率 93 .3 % (14 15) ,其中单独ermA基因为 10 0 % (4 4) ;ermB +ermA B基因为 87.5% (14 16)。单独携带mef基因的耐药表型率 50 % (2 4) ,而erm或和mef基因为 80 % (16 2 0 )。结论 :本地区Sp菌株中存在ermA、ermB和mef基因 ;三者单独或共同表达均可致Sp菌红霉素耐药 ;

关键词：肺炎链球菌红霉素耐药 erm基因 mef基因

川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响

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药物评价研究 2018年第11期41卷 2065-2068页

作者：盛玮田玉珍渭南市第一医院儿科陕西渭南714000 西安儿童医院呼吸哮喘门诊陕西西安710003

目的考察川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响。方法选择180例红霉素耐药大叶性肺炎患儿为研究对象,随机分为阿奇霉素组和联合组,每组90例。阿奇霉素组给予静脉滴注10 mg/kg的注射用阿奇霉素,连用3~5 d... 详细信息

目的考察川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响。方法选择180例红霉素耐药大叶性肺炎患儿为研究对象,随机分为阿奇霉素组和联合组,每组90例。阿奇霉素组给予静脉滴注10 mg/kg的注射用阿奇霉素,连用3~5 d,患儿体温恢复,且外周血白细胞恢复后,给予口服10 mg/kg的阿奇霉素干混悬剂,1次/d,连续治疗10 d。联合组在此基础上给予静脉滴注40 mg的盐酸川芎嗪注射液,1次/d,连续治疗10 d。观察比较两组的疗效、免疫球蛋白水平及炎性因子水平。结果治疗后,阿基霉素组的有效率为77.78%,联合组为87.78%,两组有效率有显著差异(P霉素对红霉素耐药大叶肺炎患儿有较好的疗效,其治疗作用的发挥与调节机体免疫环境有关,能增加免疫力,减轻炎症反应,从而促进患儿的康复。

关键词：阿奇霉素川芎嗪红霉素耐药大叶肺炎疗效

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌氨基糖苷类、四环素及红霉素耐药相关基因检测

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临床检验杂志 2005年第4期23卷 286-286页

作者：黄支密陆亚华陈榆单浩邹玉秀熊春林杨伟平沈娟中国人民解放军第98医院检验科浙江湖州313000 苏州大学医学院附属第三医院江苏常州213003

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)具耐多药特征,是临床抗感染治疗的难题之一.为了解MRSA中氨基糖苷类、四环素及红霉素耐药相关基因存在状况,我们对自临床分离的20株MRSA进行了氨基糖苷类... 详细信息

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)具耐多药特征,是临床抗感染治疗的难题之一.为了解MRSA中氨基糖苷类、四环素及红霉素耐药相关基因存在状况,我们对自临床分离的20株MRSA进行了氨基糖苷类耐药相关基因[aac(6′)/aph(2")、aph(3′)-Ⅲ、ant(3")-Ⅰ、ant(4′,4")、ant(6)-Ⅰ]、四环素耐药相关基因(tetM)和红霉素耐药相关基因(erm)检测,结果如下.

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌氨基糖苷类四环素红霉素耐药基因检测耐药相关基因临床抗感染治疗 aureus MRSA 临床分离耐多药

葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究

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中华检验医学杂志 2005年第4期28卷 400-402页

作者：沈定霞罗燕萍徐雅萍张秀菊周光解放军总医院微生物科北京100853

目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素对克林霉素诱导耐药率及诱导耐药基因。方法按美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散方法测定并判读金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,并以D... 详细信息

目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素对克林霉素诱导耐药率及诱导耐药基因。方法按美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散方法测定并判读金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,并以D试验测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型,聚合酶链反应检测诱导耐药基因。结果甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素同时耐药分别占62.7%和54.8%。D试验阳性占所检测葡萄球菌的17.7%。在单一纸片红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中,D试验阳性即对克林霉素具有诱导耐药性者分别为67.6%和45.3%。红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,占74.5%。结论临床微生物室开展D试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。

关键词：克林霉素耐药性研究凝固酶阴性葡萄球菌美国临床实验室标准化委员会甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌聚合酶链反应检测临床微生物室耐药基因红霉素耐药大环内酯类纸片扩散耐药表型诱导耐药 ermC 临床医生类抗生素

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汉赛巴尔通体红霉素体外诱导耐药研究

实用预防医学 2015年第6期22卷 645-647页

作者：宋秀平刘起勇刘云彦栗冬梅中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

目的体外诱导汉赛巴尔通体对红霉素的耐药菌株,初步探索其耐药的发生规律。方法选取对红霉素均敏感的汉赛巴尔通体参考株Houston-1(ATCC 49882)和6株国内猫分离株作为出发菌株。出发菌株连续培养3代后开始诱导,红霉素起始浓度为出发菌... 详细信息

目的体外诱导汉赛巴尔通体对红霉素的耐药菌株,初步探索其耐药的发生规律。方法选取对红霉素均敏感的汉赛巴尔通体参考株Houston-1(ATCC 49882)和6株国内猫分离株作为出发菌株。出发菌株连续培养3代后开始诱导,红霉素起始浓度为出发菌株初始MIC的1/4,逐级倍增诱导浓度,直至菌株停止生长或诱导成高度耐药菌株。采用E-test法和琼脂稀释法测定耐药前后试验菌株对红霉素和其他10种抗生素的最低抑菌浓度(minimal inhibition concentrations,MICs)。同时测定出发菌株无药传代后菌株的MICs值。结果经过12代诱导,6株菌除获得对红霉素耐药(MIC值>256 mg/L)外,对阿奇霉素和克林霉素也产生耐药(MIC值>256 mg/L)。出发菌株自然传代30次后,有4株菌对克林霉素产生了一定的耐药,对其他抗生素耐药情况没有变化。结论通过体外浓度递增法首次成功诱导汉赛巴尔通体对红霉素耐药,并产生对同系药物阿奇霉素的耐药和林克酰胺类克林霉素的耐药,提供了苛养、包内寄生菌耐药菌株模型,为今后进一步研究巴尔通体对大环内脂类抗生素的相关耐药机制奠定了基础。

关键词：汉赛巴尔通体红霉素耐药诱导最低抑菌浓度