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寡聚糖诱导悬浮培养红豆杉细胞生理态势的改变

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化工学报 2002年第11期53卷 1133-1138页

作者：李春元英进马忠海胡宗定天津大学化工学院制药工程系清华大学化学工程系生物化工研究所北京100084

运用顺磁共振、电镜、能谱等手段研究了寡聚糖对红豆杉细胞氧化还原生理态势的影响 .结果表明 ,诱导前红豆杉细胞处于相对稳定的生长态势 ,细胞完整 ,细胞器发达 ;氧化还原电势较低 ,活性氧相关酶系统相对稳定 ,细胞初生代谢旺盛 ,紫杉... 详细信息

运用顺磁共振、电镜、能谱等手段研究了寡聚糖对红豆杉细胞氧化还原生理态势的影响 .结果表明 ,诱导前红豆杉细胞处于相对稳定的生长态势 ,细胞完整 ,细胞器发达 ;氧化还原电势较低 ,活性氧相关酶系统相对稳定 ,细胞初生代谢旺盛 ,紫杉醇合成速率很低 .诱导后红豆杉细胞向产物合成态势转移 ,SOD酶活性迅速提高 ,CAT和POD酶活被强烈抑制 ;细胞出现活性氧迸发 ,4h达最大值 ;细胞的氧化还原电势增高 ,细胞膜上离子通道被激活 ,H+ 和Ca2 + 内流 ,Cl-外流 ;液胞内出现大量含Ca2 + 离子的高电子致密区并呈规律性变化 ,培养环境碱化 ;细胞生长被抑制 ,紫杉醇合成速率升高 ,其产量提高了 5 5倍 ,达 76 1mg·L-1.

关键词：真菌寡聚糖红豆杉细胞悬浮培养生理态势紫杉醇细胞培养抗癌药物

果糖补料与真菌诱导对红豆杉细胞悬浮培养体系的协同效应

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化学工程 2003年第5期31卷 46-49,65,4页

作者：晏琼元英进胡宗定天津大学化工学院制药工程系天津300072

研究了果糖补料和真菌诱导对南方红豆杉细胞悬浮培养体系中细胞生长状态和紫杉烷合成的协同作用。结果表明果糖补料和真菌诱导子的协同作用引起细胞的生理状态发生改变 ,培养基碱化 ,细胞的生物量有一定程度的降低 ,而表征酶含量的蛋白... 详细信息

研究了果糖补料和真菌诱导对南方红豆杉细胞悬浮培养体系中细胞生长状态和紫杉烷合成的协同作用。结果表明果糖补料和真菌诱导子的协同作用引起细胞的生理状态发生改变 ,培养基碱化 ,细胞的生物量有一定程度的降低 ,而表征酶含量的蛋白质含量有明显的提高 ,酚类物质大量积累 ,目的产物紫杉醇 (Taxol)被大量合成 ,其产量在摇瓶和反应器体系中最高分别达到 81.0mg/L和 71.7mg/L。

关键词：果糖补料真菌诱导红豆杉细胞悬浮培养体系协同效应紫杉醇

红豆杉细胞提取物抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

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中草药 2003年第11期34卷 1013-1015页

作者：鲁翠涛赵应征梅兴国华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的　研究红豆杉细胞提取物对肝癌细胞 SMMC- 772 1的生长抑制作用及其机制。方法　运用台盼蓝拒染法测定肿瘤细胞生长曲线 ,流式细胞仪和 Giem sa染色分析肿瘤细胞周期和细胞凋亡。结果　红豆杉细胞二氯甲烷提取物对肝癌细胞 SMMC- 77... 详细信息

目的　研究红豆杉细胞提取物对肝癌细胞 SMMC- 772 1的生长抑制作用及其机制。方法　运用台盼蓝拒染法测定肿瘤细胞生长曲线 ,流式细胞仪和 Giem sa染色分析肿瘤细胞周期和细胞凋亡。结果　红豆杉细胞二氯甲烷提取物对肝癌细胞 SMMC- 772 1的生长有明显的抑制作用 ,流式细胞仪分析发现 G2 / M期肿瘤细胞数量增多 ,经 Giem sa染色发现肿瘤细胞有凋亡发生。结论　红豆杉细胞提取物可以通过诱导细胞发生凋亡而抑制肝癌细胞SMMC- 772

关键词：红豆杉细胞 SMMC-7721 细胞增殖细胞凋亡

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红豆杉细胞培养生产紫杉醇产量稳定性的探讨

广西植物 2002年第1期22卷 85-88页

作者：余龙江蔡永君兰文智华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋... 详细信息

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋水仙碱同步处理处于中期的细胞紫杉醇产量高于非同步化细胞 ,而磷酸盐双饥饿同步处理处于间期的细胞紫杉醇产量则相反。这表明紫杉醇产量与培养物的均一性有关 ,且与细胞同步的周期时相有关 ,采用同步化方法来选择合适的细胞周期时相有利于紫杉醇产量的稳定 ,通过比较不同同步化方法处理对细胞生物量和

关键词：红豆杉细胞细胞培养紫杉醇产量稳定性同步化处理诱导子

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红豆杉细胞在反应器中培养动力学的研究

华中科技大学学报（自然科学版） 2001年第A01期29卷 52-54页

作者：余斐吴诚德罗杰刘凌华中科技大学生命科学与技术学院

应用气升式生物反应器及搅拌式生物反应器悬浮培养红豆杉细胞 ,得到细胞生长和紫杉醇合成动力学曲线 .经过反应器动力学的比较 ,结果表明红豆杉细胞较适于在机械搅拌式反应器中培养 .

关键词：红豆杉细胞紫杉醇生物反应器气升式搅拌式生物制药

Ce^(4+)对不同培养时期红豆杉细胞p-ERK-like的影响

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中国稀土学报 2008年第6期26卷 774-779页

作者：葛志强王莹天津大学化工学院制药工程系系统生物工程教育部重点实验室天津300072

为了探究培养生长不同时期的红豆杉细胞对Ce4+应答差异的机制,采用West-Blot免疫印迹法考察了1 mmol.L-1Ce4+对培养不同时期的红豆杉细胞的细胞外信号调节蛋白激酶磷酸化(p-ERK-like)的表达变化。结果发现,悬浮培养的红豆杉细胞基础p-ER... 详细信息

为了探究培养生长不同时期的红豆杉细胞对Ce4+应答差异的机制,采用West-Blot免疫印迹法考察了1 mmol.L-1Ce4+对培养不同时期的红豆杉细胞的细胞外信号调节蛋白激酶磷酸化(p-ERK-like)的表达变化。结果发现,悬浮培养的红豆杉细胞基础p-ERK-like的表达在整个培养周期中呈"M"型变化,分别在培养第五天和第二十一天出现两个高峰,而培养第十一天达到低谷,仅为参比值的77%。在培养的不同时间点应用Ce4+诱导后,细胞的最大p-ERK-like表达量以及到达最大量所需的时间表现出显著的差异,培养第十一天的细胞经Ce4+诱导后其p-ERK-like表达速率达高峰。结果表明,处于不同培养时期的红豆杉细胞其p-ERK-like表达存在显著差异,这可能是导致不同培养时期细胞对Ce4+产生不同应答效应的一个因素。

关键词：铈 ERK-like激酶红豆杉细胞悬浮培养稀土

外加紫杉醇对悬浮培养东北红豆杉细胞的诱导效应

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生物工程学报 2002年第2期18卷 204-207页

作者：马振毅王艳东元英进天津大学化工学院制药工程系天津300072

研究表明外加紫杉醇能够诱导悬浮培养的东北红豆杉 (Taxuscuspidata)细胞总DNA发生梯带化降解。利用mRNA差异显示技术比较了紫杉醇诱导凋亡与不诱导凋亡的东北红豆杉细胞基因表达的差异 ,得到了 8个特异表达的cDNA克隆 ,经Northern杂交... 详细信息

研究表明外加紫杉醇能够诱导悬浮培养的东北红豆杉 (Taxuscuspidata)细胞总DNA发生梯带化降解。利用mRNA差异显示技术比较了紫杉醇诱导凋亡与不诱导凋亡的东北红豆杉细胞基因表达的差异 ,得到了 8个特异表达的cDNA克隆 ,经Northern杂交证实其中 3个在不发生凋亡的细胞中表达 ,5个在凋亡的细胞中表达。对这 8个cDNA克隆单向序列测定后 ,与GenBank EMBL DDBJ中同源序列进行了比较 ,结果表明 :1个cDNA片段与拟南芥中ABA应答蛋白基因的保守区有 86 %的同源性 ;2个cDNA片段与番茄内切壳聚糖酶前体基因的保守区有 5 0 %的同源性 ;其他 5个cDNA片段无明显的同源基因 ,可能是新基因。

关键词：红豆杉细胞悬浮培养细胞凋亡 DDRT-PCR 同源性分析外加紫杉醇诱导效应

真菌诱导子对悬浮培养南方红豆杉细胞态势及紫杉醇合成的影响

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生物工程学报 2001年第4期17卷 436-440页

作者：张长平李春元英进孙安慈胡昌序天津大学化工学院生化工程系天津300072 中国科学院植物研究所北京100093

在南方红豆杉细胞悬浮培养过程中 ,研究了在指数生长期的末期加入真菌诱导子 (尖孢镰刀菌的胞壁组分粗提物 )对细胞态势及紫杉醇合成的影响。结果表明 ,真菌诱导子能在短期内激发细胞的防御性应答反应而产生氧迸发 ,细胞的氧化还原态势... 详细信息

在南方红豆杉细胞悬浮培养过程中 ,研究了在指数生长期的末期加入真菌诱导子 (尖孢镰刀菌的胞壁组分粗提物 )对细胞态势及紫杉醇合成的影响。结果表明 ,真菌诱导子能在短期内激发细胞的防御性应答反应而产生氧迸发 ,细胞的氧化还原态势发生了明显的变化 ,培养基发生碱化现象 ,表征酶含量的蛋白质含量明显提高 ,SOD、POD、CAT的活力出现波动性变化 ,并具有一定的时序性。同时 ,南方红豆杉悬浮培养体系中产次生代谢途径中重要的酶PAL的活力得到提高 ,紫杉醇的合成被加强 ,产量得到了显著提高 ,达到了对照组的 5倍左右。

关键词：真菌诱导子紫杉醇悬浮培养氧进发 SOD POD CAT 红豆杉细胞

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红豆杉细胞系种质保存及遗传变异研究

红豆杉细胞系种质保存及遗传变异研究

作者：吴文娟华中科技大学

学位级别：硕士

红豆杉细胞系在继代培养过程存在不稳定现象,表现在随着继代次数的增加,细胞合成紫杉醇的能力逐渐下降,这严重制约着红豆杉细胞进行大规模培养生产紫醇的的工业化进程,对于其不稳定性机理已经有了一些研究,但尚不明确。因而建立一种稳... 详细信息

红豆杉细胞系在继代培养过程存在不稳定现象,表现在随着继代次数的增加,细胞合成紫杉醇的能力逐渐下降,这严重制约着红豆杉细胞进行大规模培养生产紫醇的的工业化进程,对于其不稳定性机理已经有了一些研究,但尚不明确。因而建立一种稳定保存红豆杉种质的方法,可缓解红豆杉细胞常温继代过程中的变异。本研究对红豆杉细胞低温缓慢生长保存及其遗传变异,以及超低温保存进行了研究,获得如下结果： 1)首先建立了系列抗前体筛选红豆杉细胞系。通过在培养基中添加苯丙氨酸,苯甲酸钠和乙酸钠,经半年时间筛选获得了产量提高了1.35倍的细胞系。 2)对低温缓慢生长法保存红豆杉细胞进行了较为系统的研究,发现： (1)低温缓慢生长法保存前后,红豆杉细胞细胞表观形态和紫杉醇产量与对照相比没有显著差异,但在恢复培养2个周期后,细胞系发生了变异,表现在紫杉醇含量下降,且保存时间越长,含量下降越快。 (2)利用反相高效液相检测技术(HPLC)对低温保存后恢复培养过程中红豆杉细胞基因组甲基化水平分析,发现低温保存后恢复培养的细胞系的DNA甲基化水平升高,表明细胞培养过程中紫杉醇含量的下降可能与某些基因的甲基化有关。 3)研究了玻璃化法、预培养干燥法、干燥／玻璃化法三种方法对红豆杉细胞系进行超低温保存的可行性,初步建立了红豆杉细胞超低温保存体系。 (1)对影响玻璃化超低温保存的因素进行了系统研究,发现预培养方式,冰冻保护剂种类,脱水时间对红豆杉细胞超低温保存的存活率有比较大的影响,但在最优条件下,保存后细胞恢复生长需45 d;(2)预培养干燥法成功用于中国红豆杉细胞的保存,干燥／玻璃化法成功实现了中国红豆杉和曼地亚红豆杉的保存,进一步研究发现其原因可能是曼地亚红豆杉比中国红豆杉临界含水量高,需要冰冻保护剂的保护才能在进入液氮时顺利越过冰点。

关键词：红豆杉细胞紫杉醇 DNA甲基化超低温保存缓慢生长