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绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：李霞何艺蔡旭航罗润波郭容利索朗斯珠毛立李彬西藏农牧学院江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室阜康市城关镇农业(畜牧业)发展服务中心西北农林科技大学

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组... 详细信息

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组进行同源性及遗传进化分析。研究结果表明，MRV-XJ23分离株可在MDBK细胞稳定传代，产生特异的细胞病变，病毒滴度为106TCID50·mL-1。MRV感染细胞经IFA检测可观察到特异荧光，电镜可观察到直径约70 nm的无囊膜病毒粒子。经RT-PCR扩增和测序获得MRV全基因组，该毒株共10个节段，全长23 534 bp。序列对比及遗传进化分析结果显示，MRV-XJ23株为MRV-1血清型，其在韩国蝙蝠源BatMRV2/SNU1/Korea/2021毒株基础上，与日本的人源Homo sapiens/Osaka2005株L3、M2、S4基因、印度牛源C/bovine/Indiana/MRV00304/2014株S1基因重配，形成一株新的MRV。本研究首次从腹泻绵羊肛拭子中分离获得一株MRV-1型重配毒株，证明绵羊可感染MRV，拓宽了病毒感染宿主谱，且感染毒株为蝙蝠源、人源和牛源MRV重配毒株，证明这些毒株跨物种感染后发生了复杂的重配。本研究揭示了MRV在各物种中循环传播对公共卫生的风险，提升了深入研究MRV在绵羊乃至家畜中的流行病学、重配规律和致病性的重要性。

关键词：哺乳动物正呼肠孤病毒绵羊分离鉴定重配进化分析

干扰PPARγ基因对绵羊滋养层细胞增殖、凋亡、迁移和脂质积累的影响

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2421-2430页

作者：刘畅郝科兴陈岩曾维斌喻恒彬陈磊王静胡广东石河子大学动物科技学院石河子832003

旨在通过干扰PPARγ基因的表达,探究PPARγ对绵羊滋养层细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移率以及脂质累积的影响,为深入研究PPARγ在绵羊滋养层细胞中的分子机制提供基础依据。本研究设计并合成干扰PPARγ基因的siRNA干扰片段,通过Weste... 详细信息

旨在通过干扰PPARγ基因的表达,探究PPARγ对绵羊滋养层细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移率以及脂质累积的影响,为深入研究PPARγ在绵羊滋养层细胞中的分子机制提供基础依据。本研究设计并合成干扰PPARγ基因的siRNA干扰片段,通过Western Blot和RT-qPCR筛选干扰效率最高的siRNA,并转染至分离培养的绵羊滋养层细胞中。通过BODIPY染色检测干扰PPARγ基因后滋养层细胞中脂滴的聚积,比色法检测细胞中甘油三酯的含量,并利用RT-qPCR检测脂代谢相关基因的转录水平。采用CCK-8法、划痕试验和流式细胞法,分别探究干扰PPARγ基因对滋养层细胞增殖活性、细胞迁移率及细胞凋亡的影响。筛选得到了干扰效率最高的siPPARγ-1片段用于转染滋养层细胞,在干扰滋养层细胞PPARγ基因表达后,细胞中脂滴聚积能力下降,甘油三酯含量降低(P<0.01),脂代谢相关基因CD36、FABP4和PLIN2的转录水平也受到抑制(P<0.01)。同时,滋养层细胞的增殖活力也显著降低(P<0.05),细胞迁移率减少(P<0.01),而细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。本研究表明PPARγ基因在调控滋养层细胞功能方面起重要作用,可对其具体分子机制进行深入研究,以期用于繁殖育种实践中。

关键词：绵羊滋养层细胞 PPARγ 干扰

基于粪便DNA宏条形码的人工草地放牧绵羊采食组分研究

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草地学报 2024年

作者：郭艳萍王月君彭思嘉左淑贤张英俊罗海玲中国农业大学动物科学技术学院畜禽营养与饲养全国重点实验室中国林业科学研究院林业研究所中国农业大学草业科学与技术学院

准确获取食草动物食性数据有助于了解草地放牧家畜的营养状况，同时也对掌握草地植物群落的动态变化具有重要意义。本研究通过从滩羊粪便样本中提取DNA，利用ITS2条形码和粪便DNA宏条形码技术（fDNA metabarcoding），基于出现频率（Fre... 详细信息

准确获取食草动物食性数据有助于了解草地放牧家畜的营养状况，同时也对掌握草地植物群落的动态变化具有重要意义。本研究通过从滩羊粪便样本中提取DNA，利用ITS2条形码和粪便DNA宏条形码技术（fDNA metabarcoding），基于出现频率（Frequency of occurrence，FO）和相对序列丰度（Relative read abundance，RRA）两个指标快速分析获得粪便中的物种组成。分析获得的滩羊食物组成包含28个植物类群，主要有藜属（Chenopodium sp.）、苜蓿属（Medicago sp.）、蒿属（Artemisia sp.）等隶属于13科23属，其中27个鉴定到种水平，物种鉴定分辨率高达96%。藜属FO和RRA均最高，分别为100.0%和31.5%，其次为紫花苜蓿（Medicago sativa），分别为100.0%和26.9%。基于两种算法分析得到的食物比例具有差异性和一致性，其中紫花苜蓿是放牧滩羊的主要采食来源，但摄入比例需要校正。研究证明了基于ITS2片段的粪便DNA宏条形码技术在食草家畜快速准确食性分析中的可行性，为此类研究提供了有力借鉴。建议采用该技术时应完善潜在摄食植物DNA条形码数据库，准确分析目标家畜在特定区域内的采食种类。

关键词：绵羊食性 DNA宏条形码 ITS2 物种鉴定

miR-127调控绵羊骨骼肌细胞增殖分化及其转录因子PAX3筛选

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 3864-3875页

作者：贾宇航郭良富张茹楠赵阿勇刘玉芳储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 郓城县畜牧服务中心郓城274700

旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响,并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子。本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料,过表达或干扰miR-127后,采用RT-qPCR、EdU染... 详细信息

旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响,并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子。本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料,过表达或干扰miR-127后,采用RT-qPCR、EdU染色、流式细胞仪分析、免疫荧光染色等方法探究miR-127对绵羊成肌细胞增殖、凋亡和分化的影响。基于生物信息学分析和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-127核心启动子区域及其转录因子。结果表明,在绵羊成肌细胞中过表达miR-127后,促进了细胞增殖相关基因PCNA、CDK4的表达(P绵羊成肌细胞中过表达miR-127后,细胞阳性率显著提升(P绵羊成肌细胞中过表达转录因子PAX3后,miR-127启动子活性和miR-127的表达均极显著增加(P绵羊miR-127显著促进绵羊骨骼肌成肌细胞增殖分化,减少了成肌细胞凋亡,进而参与骨骼肌成肌细胞的发育过程;进一步研究发现,绵羊miR-127上游的1 500~1 800 bp是其核心启动子区,转录因子PAX3正向调节miR-127的转录。本研究为进一步探究绵羊肌肉生长发育性状的分子机制提供了理论参考。

关键词：绵羊成肌细胞增殖分化 miR-127 转录因子PAX3

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绵羊基质Gla蛋白基因克隆、表达谱及其在卵巢组织的定位

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江苏农业学报 2024年第7期40卷 1276-1284页

作者：张欣如古丽米热·阿不都热依木陈莹马秀玲林嘉鹏汪立芹黄俊成吴阳升农业农村部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室/新疆动物生物技术重点实验室/新疆畜牧科学院生物技术研究所新疆乌鲁木齐830011 新疆农业大学动物科学学院新疆乌鲁木齐830052

本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体,并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板,扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列;合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽,免疫小鼠,... 详细信息

本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体,并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板,扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列;合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽,免疫小鼠,制备抗血清;利用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹技术分析其在不同组织和不同大小的卵泡中的表达水平;通过免疫组织化学方法分析其在卵巢组织中的表达分布特征。结果表明,成功获得绵羊MGP基因的CDS区全长片段(467 bp),编码103个氨基酸,理论相对分子量为12230.96,等电点为9.27;N末端19个氨基酸序列被预测为信号肽序列,成熟肽有84个氨基酸,为外泌性蛋白质,无胞内区;MGP总蛋白质氨基酸序列与山羊、牛的同源蛋白质相似性分别为100.0%、99.0%,与人、小鼠的相似性均为85.4%。MGP mRNA和蛋白质在绵羊心、肝、脾、肺、肾等组织中的相对表达量较低,在卵巢、输卵管、子宫等生殖系统或组织中的相对表达量较高,在黄体中的相对表达量也较高;MGP在卵巢组织颗粒细胞、卵丘细胞中均有表达,但在闭锁卵泡中不表达。本研究结果可为进一步研究MGP在卵巢组织中的生物学功能提供参考。

关键词：基质Gla蛋白绵羊卵巢颗粒细胞黄体

不同FecB基因型和不同直径绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性及蛋白表达差异

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 3957-3967页

作者：龚一鸣贾一轩李佳骏王翔宇贺小云储明星狄冉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

旨在探究不同FecB基因型对绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的影响;揭示成熟大卵泡和小卵泡之间BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的差异。本研究采用TaqMan分型方法筛选出不同FecB基因型的母羊,同期发情后取卵泡期成熟卵泡和黄体期卵巢... 详细信息

旨在探究不同FecB基因型对绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的影响;揭示成熟大卵泡和小卵泡之间BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的差异。本研究采用TaqMan分型方法筛选出不同FecB基因型的母羊,同期发情后取卵泡期成熟卵泡和黄体期卵巢表面小卵泡,利用免疫印迹法(Western blot)测定BMP/SMAD通路相关蛋白表达水平和通路活性。结果表明,对于小卵泡组,FecB突变型卵泡中骨形态发生蛋白1B型受体(bone morphogenetic protein receptor type 1B,BMPR1B)表达量显著高于野生型卵泡(P绵羊突变型卵泡生长发育成熟后BMP/SMAD通路活性显著增强。

关键词：绵羊 FecB突变卵泡 BMP/SMAD通路 SMAD4

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湖羊与三元杂交绵羊夏杜湖、夏澳湖肉质特性比较研究

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 110-119页

作者：王海波占今舜谷志勇陈新锋潘月贾浩滨钟小军李开嵘赵生国霍俊宏江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384 赣州绿林湾农牧有限公司赣州341103

旨在探究湖羊与三元杂交绵羊夏杜湖、夏澳湖肉质特性。本研究选择健康且出生体重相近的公羔((3.61±0.65)kg)随母哺乳至45天后集中断奶。断奶后分成3个处理组(湖羊组、夏澳湖组和夏杜湖组),每个处理15只公羔,3个处理的45只羔羊混合饲养... 详细信息

旨在探究湖羊与三元杂交绵羊夏杜湖、夏澳湖肉质特性。本研究选择健康且出生体重相近的公羔((3.61±0.65)kg)随母哺乳至45天后集中断奶。断奶后分成3个处理组(湖羊组、夏澳湖组和夏杜湖组),每个处理15只公羔,3个处理的45只羔羊混合饲养至6月龄屠宰,并分析背最长肌组织形态及背最长肌的肉品质及营养成分。试验期饲喂全混合基础日粮。结果表明:1)相对于湖羊,三元杂交绵羊背最长肌亮度(L*)显著降低,熟肉率显著提高(P0.05)。2)相对于湖羊,三元杂交绵羊背最长肌纤维直径和平均面积显著提高,但肌纤维数量和密度显著降低(P绵羊背最长肌中粗蛋白、必需和非必需氨基酸的含量显著提高(P0.05)。4)夏杜湖和夏澳湖在背最长肌pH、剪切力、失水率、熟肉率、肉色、肌纤维数量、肌纤维面积、肌纤维密度、常规营养成分(水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分)、微量元素(铜、铁、锌和锰)、必需和非必需氨基酸的含量、总饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量均无显著差异(P>0.05)。综上所述,三元杂交绵羊能够显著改善肉品质,增加背最长肌中粗蛋白和氨基酸水平,具有培育生产优质羊肉的潜力,且同一终端父本杂交后代在肉质特性中无明显差异。

关键词：绵羊肌纤维微量元素氨基酸脂肪酸

L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 179-191页

作者：段香茹康佳杨若晨单新雨李太春赵雯张英杰刘月琴河北农业大学动物科技学院保定071000

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各... 详细信息

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700μmol·L^(-1),培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,100、300和500μmol·L^(-1)组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP 11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P 4的分泌。

关键词：绵羊卵巢颗粒细胞 L-半胱氨酸增殖凋亡类固醇激素生成

基于RNA-seq技术鉴定绵羊毛囊发育相关lncRNAs

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华北农学报 2024年第1期39卷 211-218页

作者：孙昊然李新海宁夏大学动物科技学院宁夏银川750021

杜泊羊的毛囊具有周期性生长发育的特点,一般分为生长期、退行期、休止期3个时期。旨在探索经前期研究筛选出的与毛囊生长期和休止期相关的关键lncRNAs作为ceRNA的调控机制。选用饲养条件相同、体质量体尺相近,年龄大约2周岁的具有极端... 详细信息

杜泊羊的毛囊具有周期性生长发育的特点,一般分为生长期、退行期、休止期3个时期。旨在探索经前期研究筛选出的与毛囊生长期和休止期相关的关键lncRNAs作为ceRNA的调控机制。选用饲养条件相同、体质量体尺相近,年龄大约2周岁的具有极端脱毛表型的杜泊母羊(S组)和不脱毛杜泊母羊(N组)各10只作为试验对象,经表型观测选择其中表型最好的5只脱毛羊与3只不脱毛羊用于转录组测序。通过靶向预测、表达模式分析以及GO和KEGG富集分析等生物信息学分析方法构建关键lncRNAs的ceRNA调控网络,进一步研究关键lncRNAs的调控机制。经lncRNA-miRNA及miRNA-mRNA靶向预测分析共筛选到262个mRNAs,其中有135个与相应lncRNAs表达模式一致(19个A模式(Anagen,生长期高表达),116个T模式(Telogen,休止期高表达))。将这135个mRNAs进行GO和KEGG富集分析发现,一些与毛囊发育相关的基因,如CTNNB1、FGF22、FGF5、FZD3、JAK3、Lpar6、NGFR、PAK1、EIF4E及Wnt10b富集于与毛囊发育相关的Rap1、MAPK、Wnt、PI3K-Akt、Ras、mTOR、Jak-STAT及Hippo等信号通路中。最终构建了由10个lncRNAs、11个miRNAs及10个mRNAs组成的ceRNA调控网络。对随机挑选的几个差异表达lncRNAs和差异表达基因进行qRT-PCR验证,结果显示与转录组测序结果表达趋势基本一致,说明测序结果可靠。研究获得的这10个lncRNAs与其靶向调控的miRNAs及mRNAs可作为绵羊毛囊发育的重点研究对象。

关键词：绵羊 lncRNA ceRNA 毛囊生长期休止期