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微RNA-126对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下人巨噬细胞极化的调节作用

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中华口腔医学杂志 2022年第4期57卷 390-396页

作者：黎家君刘玥宋立婷李长义蒋少云天津医科大学口腔医院修复科天津300070 北京大学深圳医院口腔医学中心广东省高水平临床重点专科广东省口腔疾病诊疗技术工程技术研究中心深圳518036 天津医科大学口腔医院综合科天津300070

目的研究微RNA-126(microRNA-126,miR-126)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下巨噬细胞极化的影响。方法用5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h,以及转染miR-126模拟物或阴性对照物24 h后再行5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h,实时定量PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质印迹法分别检测miR-126、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)以及M1型极化相关通路:核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化。结果Pg-LPS刺激巨噬细胞48 h后,与非Pg-LPS刺激组各因子mRNA水平(TNF-α:1.000±0.020,iNOS:1.125±0.064,miR-126:1.004±0.113,IL-10:1.003±0.053,Arg-1:1.130±0.061)相比,Pg-LPS刺激后TNF-α和iNOS的mRNA水平(3.105±0.278、4.296±0.003)均显著上升(t=6.53,P=0.003;t=42.63,P胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化p-38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38)相对蛋白表达均显著上升(t=2.78,P=0.013;t=18.70,P胞的M1型极化;miR-126通过下调M1型极化相关通路,抑制Pg-LPS对巨噬细胞向M1型极化的作用。

关键词：紫单胞菌,龈微RNAs 微RNA-126 巨噬细胞脂多糖类细胞极化

尾静脉注射牙龈卟啉单胞菌对野生大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子表达的影响

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中华口腔医学杂志 2022年第4期57卷 375-383页

作者：庾靖君雷双李福龙陈双双唐晓琳中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙周病科辽宁省口腔疾病重点实验室沈阳110002

目的观察尾静脉注射牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对野生成年大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子表达水平的影响,初步探讨Pg入血对海马神经发生的作用。方法建立尾静脉注射Pg大鼠模型:18只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠... 详细信息

目的观察尾静脉注射牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对野生成年大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子表达水平的影响,初步探讨Pg入血对海马神经发生的作用。方法建立尾静脉注射Pg大鼠模型:18只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法随机分为3组(每组6只)。低剂量组、高剂量组大鼠分别经尾静脉注射1.0×10^(3)和1.0×10^(8)菌落形成单位(colony forming unit,CFU)的Pg菌液200μl,假手术组大鼠注射等体积磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS),3组大鼠均每周注射3次,连续8周。行为学检测:应用莫里斯水迷宫(Morris water maze,MWM)定位航行实验、空间探索实验检测大鼠学习和记忆能力。免疫组织化学法检测各组大鼠海马颗粒下区(subgranular zone,SGZ)神经干细胞标志分子神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经母细胞和未成熟神经元标志分子双皮质素(doublecortin,DCX)、成熟神经元标志分子神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的阳性细胞分布。蛋白质印迹法检测各组大鼠海马组织nestin、DCX、NeuN的表达水平。结果学习和记忆能力:MWM定位航行实验结果显示,第5天到达平台时间高剂量组[22.83(16.00,38.34)s]显著长于假手术组[5.59(5.41,6.17)s](t=-11.17,P胞密度,低剂量组[(35.36±4.32)个/mm^(2)]和高剂量组[(26.51±5.89)个/mm^(2)]均显著低于假手术组[(59.58±14.15)个/mm^(2)](t=24.21,P=0.018;t=33.07,P=0.005);DCX阳性细胞平均吸光度值,低剂量组(0.007±0.002)和高剂量组(0.006±0.002)均显著低于假手术组(0.011±0.001)(t=0.004,P=0.018;t=0.006,P=0.005);NeuN阳性神经元密度,高剂量组[(0.75±0.08)×10^(3)个/mm^(2)]显著低于假手术组[(1.13±0.14)×10^(3)个/mm^(2)](t=0.38,P=0.017),低剂量组[(0.88±0.19)×10^(3)个/mm^(2)]与假手术组相比差异无统计学意义(t=0.25,P=0.075)。蛋白质印迹法结果显示,与假手术组相比,高剂量组海马中nestin、DCX、NeuN表达水平均显著降低(t=0.74,P胞和神经元标志分子nestin、DCX、NeuN阳性表达细胞数量和表达水平。

关键词：紫单胞菌,龈菌血症大鼠 Sprague-Dawley 海马认知障碍神经干细胞成年海马神经发生

牙龈卟啉单胞菌脂多糖通过髓样细胞触发受体-1调控巨噬细胞极化状态的研究

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中华口腔医学杂志 2021年第2期56卷 175-181页

作者：刘琳杨芸周婕妤吴亚菲赵蕾四川大学华西口腔医院牙周科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041 成都武侯三益匠心口腔门诊部 610041

目的探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞后,髓样细胞触发受体-1(triggering receptors expressed on myeloid cells-1,TREM-1)表达与M1、M2型极化的关系,进一步探讨巨噬细胞TREM-1在牙周炎发生发展中的作用机制。方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,予以0(空白对照组)和1μg/ml的Pg-LPS(LPS组)刺激,同期加入终质量浓度为0.1μg/ml的TREM-1抑制剂LP17(LPS+LP17组)或对照肽(LPS+对照肽组),培养24 h后用实时荧光定量PCR(real-time quantitative-PCR,RT-qPCR)检测TREM-1和巨噬细胞M1、M2型极化标志物(分别为CD86、CD206)及其极化相关细胞因子[分别为肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10]mRNA表达变化,蛋白质印迹法检测TREM-1、CD86、CD206蛋白含量,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达。结果细胞培养24 h后,LPS组巨噬细胞中TREM-1相对mRNA表达量(1.40±0.14)及蛋白表达量(3.85±0.24)均较空白对照组(分别为1.01±0.18、1.00±0.05)显著升高(P胞因子TNF-α、IL-1βmRNA及蛋白表达量均显著增加(P0.05),CD86 mRNA(0.96±0.00)和蛋白(1.36±0.02)表达水平均显著下降(P胞因子IL-10,细胞培养24 h后,CD206 mRNA(0.56±0.05)及蛋白表达(0.25±0.04)均较空白对照组(分别为1.02±0.25、1.00±0.10)显著下调(P0.05);LPS+LP17组CD206、IL-10 mRNA表达均较LPS组显著下调(P0.05)。结论TREM-1及其下游信号通路可能参与了Pg-LPS介导的巨噬细胞M1型极化,从而在牙周炎发生发展中发挥促炎作用;尚无证据表明TREM-1是否参与调控Pg-LPS介导的巨噬细胞M2型极化。

关键词：牙周炎紫单胞菌,龈髓样细胞触发受体‑1 巨噬细胞极化

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牙周炎相关关键微生物的网络分析构建与预测

中华口腔医学杂志 2020年第12期55卷 1005-1010页

作者：邹任杰吴亚菲申道南四川大学华西口腔医院牙周科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041

菌斑微生物之间存在复杂的相互作用,在环境因素的影响下可使群落产生重构,促进牙周炎的发生与发展。关键微生物在调节微生物群落动态变化中十分重要。在牙周微生态中,共存网络构建和分析的方法有助于筛选牙周炎相关的关键微生物以便进... 详细信息

菌斑微生物之间存在复杂的相互作用,在环境因素的影响下可使群落产生重构,促进牙周炎的发生与发展。关键微生物在调节微生物群落动态变化中十分重要。在牙周微生态中,共存网络构建和分析的方法有助于筛选牙周炎相关的关键微生物以便进一步进行实验研究。这些微生物如牙龈卟啉单胞菌等可以作为微生物成员的重要联络者协同调节群落毒力等特征,或作为响应环境因素的重要调控因子如介导免疫失衡推动群落结构和功能重塑。本文将从微生物共存网络构建、应用网络拓扑分析技术进行关键微生物筛选与预测,以及与牙周炎发生发展相关的关键微生物等方面进行综述,为进一步确定关键微生物以及研究此类微生物在群落动态变化中的作用提供参考。

关键词：紫单胞菌,龈共存网络分析牙周微生态龈沟产线菌

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对共培养体系中人脐动脉平滑肌细胞增殖及迁移能力的影响

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中华口腔医学杂志 2021年第6期56卷 549-556页

作者：李霞胡琳琳何权敏高丽葛颂遵义医科大学附属口腔医院牙周科 563000 贵阳市口腔医院综合科 550002

目的研究Ⅰ、ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS)对共培养条件下人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)增殖和迁移能力的影响,探讨牙周炎与动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)相关的生物学基础和机制。方法厌氧培养Ⅰ、ⅣfimA型Pg,分别提取、纯化并鉴定两型Pg-LPS;体外原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)和HUASMC,并采用鼠尾Ⅰ型胶原建立HUVEC-HUASMC共培养细胞模型;实验分为T1组(质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞)和T2组(质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞),以及阴性对照组(不加LPS组);细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测HUASMC的增殖能力,Transwell迁移小室观察HUASMC的迁移能力。比较各组不同质量浓度Pg-LPS刺激共培养细胞2、8、24及48 h后,HUASMC的增殖及迁移能力的变化。结果共培养细胞在Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS的作用下,在24及48 h时,两型Pg-LPS的各质量浓度组中,HUASMC的A值均较阴性对照组显著上调(P胞后,HUASMC的A值(分别为1.386±0.044、1.455±0.058)均显著高于相同浓度ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养中HUASMC的A值(分别为1.168±0.064、1.204±0.088)(P胞后,HUASMC的A值均显著高于0.5、1.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养中HUASMC的A值(分别为1.170±0.082、1.239±0.089)(P胞后,HUASMC的迁移数量(204.00±20.98)较相同浓度下ⅠfimA型Pg-LPS刺激后HUASMC迁移数量(141.89±18.28)显著上调(P胞中HUASMC的增殖和迁移能力增强;Pg-LPS的毒力与其fimA基因型相关,ⅣfimA型Pg-LPS较ⅠfimA型Pg-LPS刺激作用更显著,更易导致HUASMC功能紊乱,从而为重度牙周炎更易促进As的进展提供依据。

关键词：紫单胞菌,龈脂多糖类人脐动脉平滑肌细胞人脐静脉内皮细胞动脉粥样硬化细胞增殖细胞迁移

基于比较蛋白质组学技术的牙髓卟啉单胞菌毒力因子分析

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中华口腔医学杂志 2016年第12期51卷 746-752页

作者：李红纪海吴杉杉侯本祥首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科 100050

目的分析牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,Pe）和不同毒力牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）表达量相近的蛋白,筛选Pe潜在的毒力因子.方法将Pe ATCC35406分别与Pg高毒力株PgW83、低毒力株Pg ATCC33277进行... 详细信息

目的分析牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,Pe）和不同毒力牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）表达量相近的蛋白,筛选Pe潜在的毒力因子.方法将Pe ATCC35406分别与Pg高毒力株PgW83、低毒力株Pg ATCC33277进行全细胞蛋白质组学比较,采用相对和绝对定量同位素标记（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）与纳升液相色谱串联质谱（nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS）相结合的比较蛋白质组学技术,通过同位素标记肽段、质谱检测和生物信息学分析等方法,分析Pe ATCC35406分别与PgW83、Pg ATCC33277之间表达相近的蛋白数及蛋白的生物学功能.结果 Pe ATCC35406和Pg W83比较时共鉴定到l 210个蛋白,其中表达量相近的蛋白130个（占蛋白总数的10.74％）,包括89个功能蛋白和41个未知功能蛋白;Pe ATCC35406和Pg ATCC33277比较时共鉴定到1 223个蛋白,其中表达量相近的蛋白110个（占蛋白总数的8.99％）,包括72个功能蛋白和38个未知功能蛋白.Pe ATCC35406与不同毒力的Pg表达相近的蛋白集中在外膜蛋白和蛋白酶,包括有致病作用的重组活化基因A（recombination activation geneA,RagA）、脂蛋白、伴侣蛋白Dnak、Clp家族蛋白（ClpC和ClpX）以及多种铁结合蛋白等,主要行使催化活性和结合功能,参与代谢和细胞进程.Pe ATCC35406与Pg W83表达相近的毒力蛋白种类和数目相对多于与低毒力Pg ATCC33277表达相近的蛋白.结论脂蛋白、氧气耐受蛋白、铁结合蛋白等可能为Pe ATCC35406潜在的毒力因子,Pe的致病能力与高毒力Pg更接近.

关键词：紫单胞菌,龈卟啉单胞菌,牙髓蛋白质组学同位素标记串联质谱法

牙龈卟啉单胞菌中与侵袭力相关的毒力因子的研究进展

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中华口腔医学杂志 2019年第3期54卷 200-204页

作者：冯莹李红刘怡首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科 100050 首都医科大学口腔医学院牙周科 100050

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是革兰阴性专性厌氧菌,它能侵入宿主细胞并在其内继续发挥致病作用,Pg的侵袭性对疾病的发生和发展至关重要,一直以来都是研究热点。在细菌侵袭宿主的过程中,Pg通过特异性黏附素与宿主细胞... 详细信息

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是革兰阴性专性厌氧菌,它能侵入宿主细胞并在其内继续发挥致病作用,Pg的侵袭性对疾病的发生和发展至关重要,一直以来都是研究热点。在细菌侵袭宿主的过程中,Pg通过特异性黏附素与宿主细胞相应配体结合,激活宿主细胞内多种信号传导途径,启动细菌内化,其中Pg的多种毒力因子,如菌毛、蛋白酶、血凝素、囊泡等在侵袭过程中发挥了重要作用。本综述总结了近年来与Pg侵袭力相关的毒力因子的研究进展,为进一步阐明Pg的致病机制以及相关疾病的防治提供思路。

关键词：紫单胞菌,龈纤毛,细菌血凝素类侵袭力

伴糖尿病牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌FimA基因型的检测

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中华口腔医学杂志 2016年第1期51卷 20-24页

作者：杨炳涛徐菁玲和璐孟焕新徐莉北京大学口腔医学院口腔医院牙周科 100081 中国医科大学航空总医院口腔科北京100012

目的了解伴2型糖尿病牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）菌毛蛋白A（fimbria protein A,FimA）基因型的分布情况,探讨糖尿病加重牙周破坏的可能机制.方法纳入北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科中... 详细信息

目的了解伴2型糖尿病牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）菌毛蛋白A（fimbria protein A,FimA）基因型的分布情况,探讨糖尿病加重牙周破坏的可能机制.方法纳入北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科中老年中重度牙周炎患者80例,其中伴2型糖尿病40例（伴糖尿病牙周炎组）,无系统性疾病者40例（单纯牙周炎组）.对两组患者分别进行问卷调查、全口牙周检查及血生化检查,滤纸条法取前牙和后牙各一个位点的龈下菌斑形成集合菌斑样本,PCR法检测样本内Pg及其FimA基因型,比较两组受试者Pg及其FimA基因型的检出差异.结果伴糖尿病牙周炎组菌斑指数[2.35（0.58）]显著高于单纯牙周炎组[1.64（0.76）]（P＜0.05）,其他各项牙周临床指标差异均无统计学意义（P＞0.05）;伴糖尿病牙周炎组龈下菌斑Pg检出率[50％（20/40）]与单纯牙周炎组[60％（24/40）]相比差异无统计学意义（P＞0.05）,但FimAⅡ型检出百分比[80％（16/20）]显著高于后者[42％（10/24）] （P＜0.05）.结论伴2型糖尿病牙周炎患者较无系统性疾病牙周炎患者更易感染毒力较强的FimA Ⅱ型Pg.

关键词：牙周炎糖尿病,2型紫单胞菌,龈基因型 Diabetes mellitus,type 2

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牙龈卟啉单胞菌菌毛致病机制的研究进展

中华口腔医学杂志 2018年第10期53卷 703-707页

作者：杜留熠孙晓琳于维先任静宜顾芯铭周延民吉林大学口腔医学院种植科长春130021 吉林省牙发育及颌骨重塑与再生省重点实验室

FimA蛋白是牙龈卟啉单胞菌的重要毒力因子,在牙龈卟啉单胞菌黏附和入侵宿主细胞,促进牙菌斑生物膜形成以及引起宿主免疫炎症反应的过程中发挥重要作用,与牙周病和心血管疾病的发生和发展密切相关.根据编码FimA蛋白的fimA基因核苷酸序列... 详细信息

FimA蛋白是牙龈卟啉单胞菌的重要毒力因子,在牙龈卟啉单胞菌黏附和入侵宿主细胞,促进牙菌斑生物膜形成以及引起宿主免疫炎症反应的过程中发挥重要作用,与牙周病和心血管疾病的发生和发展密切相关.根据编码FimA蛋白的fimA基因核苷酸序列的不同可将牙龈卟啉单胞菌分为Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型共6种基因型.FimA的表达受fimA基因的调控,不同fimA基因型菌毛的致病作用有一定差异.本文就牙龈卟啉单胞菌菌毛相关致病机制的研究进展进行综述.

关键词：紫单胞菌,龈纤毛细菌牙周炎动脉粥样硬化 fimA基因