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黏附连接及紧密连接与腹泻型肠易激综合征症状之间的关系

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中华内科杂志 2020年第1期59卷 40-46页

作者：张梦陈超英胡玥吕宾浙江中医药大学附属第一医院消化科杭州310006 武汉市金银潭医院内镜中心 430023

目的探讨黏附连接蛋白E-cadherin、β-catenin及紧密连接蛋白Claudin-2与腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者腹痛及症状持续时间之间的关系。方法根据罗马Ⅲ标准,收集26例IBS-D患者和26例健康对照的回盲部组织标本,记录肠易激综合征(IBS)症... 详细信息

目的探讨黏附连接蛋白E-cadherin、β-catenin及紧密连接蛋白Claudin-2与腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者腹痛及症状持续时间之间的关系。方法根据罗马Ⅲ标准,收集26例IBS-D患者和26例健康对照的回盲部组织标本,记录肠易激综合征(IBS)症状持续时间、腹痛评分及每周排便的次数。20只SD大鼠随机分为两组,模型组和对照组各10只,采用结直肠扩张联合束缚应激的方法构建内脏高敏感大鼠模型,采用腹部收缩反射(AWR)评估大鼠敏感性,记录造模成功后1 h内大鼠排便颗粒数。分别采用蛋白印迹和免疫荧光法检测E-cadherin、β-catenin及Claudin-2的表达和分布,用透射电镜观察细胞间隙改变。结果IBS-D患者肠黏膜E-cadherin、β-catenin蛋白表达明显低于健康对照组(P=0.015和P=0.005),而Claudin-2蛋白表达明显高于健康对照组(P=0.000);免疫荧光观察和透射电镜可见IBS-D患者细胞间紧密连接和黏附连接结构破坏;E-cadherin、β-catenin低表达与IBS-D的腹痛评分呈负相关(分别为r=-0.463,P=0.017和r=-0.407,P=0.039),β-catenin低表达与IBS-D腹痛持续时间呈负相关(r=-0.458,P=0.019)。内脏高敏感大鼠肠黏膜E-cadherin、β-catenin蛋白表达明显低于对照组(P=0.004和P=0.003),而Claudin-2蛋白表达明显高于对照组(P=0.008);E-cadherin、β-catenin低表达与IBS大鼠的内脏高敏感呈负相关(r=-0.639,P=0.047和r=-0.888,P=0.001)。结论IBS-D患者和内脏高敏感大鼠的回盲部黏附连接和紧密连接的微观结构和蛋白表达发生改变,E-cadherin、β-catenin蛋白表达降低,其与IBS-D患者腹痛评分相关,和大鼠内脏高敏感相关,β-catenin更与IBS-D患者腹痛持续时间相关。黏附连接蛋白E-cadherin、β-catenin改变可能在IBS内脏高敏感及肠黏膜屏障障碍中发挥重要作用。

关键词：肠易激综合征紧密连接部黏附连接

硫糖铝对幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜损伤的保护作用及其对胃肠菌群的影响

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中华医学杂志 2019年第20期99卷 1546-1552页

作者：刘芸滕贵根王蔚虹吴婷胡伏莲北京大学第一医院消化内科北京100034

目的探讨硫糖铝混悬凝胶(SC)对幽门螺杆菌(H.pylori)感染所致小鼠胃黏膜损伤和胃肠菌群的影响。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组(NC组)、H.pylori组(HP组)和硫糖铝组(HP+SC组)。HP组和HP+SC组以H.pylori悉尼菌株(SS1)灌胃,HP+SC组同时... 详细信息

目的探讨硫糖铝混悬凝胶(SC)对幽门螺杆菌(H.pylori)感染所致小鼠胃黏膜损伤和胃肠菌群的影响。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组(NC组)、H.pylori组(HP组)和硫糖铝组(HP+SC组)。HP组和HP+SC组以H.pylori悉尼菌株(SS1)灌胃,HP+SC组同时予SC灌胃14 d。小鼠处死后取胃黏膜行苏木精-伊红(HE)染色并行胃黏膜损伤评分(EDS),免疫组织化学法(IHC)或改良吉姆萨染色阳性认为H.pylori阳性。IHC检测紧密连接蛋白及炎症因子并行免疫组化评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测炎症因子,透射电镜观察胃黏膜超微结构。取胃黏膜和肠内容物行16S核糖体RNA(16S rRNA)测序。结果HP组小鼠H.pylori定植率为91.67%,HP+SC组定植率为50.00%。HP组小鼠胃黏膜EDS高于NC组[(3.42±0.19)比(1.17±0.17),P0.05)。HP组闭锁小带蛋白(ZO-1)及咬合蛋白IHC评分低于NC组(均P0.05)。HP组较NC组胃菌群多样性降低,肠道菌群多样性差异无统计学意义,HP+SC组较HP组胃菌群及肠道菌群差异无统计学意义。结论SC降低H.pylori定植率,改善H.pylori所致胃黏膜损伤,降低H.pylori所致IL-8表达,增强咬合蛋白,但对H.pylori所致胃肠菌群改变无明显影响。

关键词：螺杆菌感染胃炎炎症紧密连接部核糖体

呼吸道合胞病毒感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮屏障功能的影响

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2024年第1期31卷 31-35页

作者：康子卿杨婧兴王向东蔡超首都医科大学附属北京佑安医院耳鼻咽喉头颈外科北京100069 首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科北京市耳鼻咽喉科研究所耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)鼻病研究北京市重点实验室北京100730

目的为探索呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)和对照黏膜来源的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,hNECs)物理屏障关键分子的影响。方法不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(0.1和0.3)的RSV分别感染鼻息肉(n=21)和对照黏膜(n=9)的hNECs 24 h和48 h后,提取总RNA,逆转录成cDNA后,采用实时荧光定量PCR检测ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达变化。结果RSV感染hNECs后,ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达水平均下降,但只在鼻息肉来源的hNECs中存在统计学差异(P<0.05)。RSV感染嗜酸性粒细胞型CRSwNP(eosinophilic CRSwNP,ECRSwNP)与非嗜酸性粒细胞型CRSwNP(nonECRSwNP)的hNECs相比,无显著差异。结论RSV感染可破坏鼻黏膜上皮屏障,与对照组相比CRSwNP组受RSV感染影响更重,且ECRSwNP组与nonECRSwNP组无显著差异。

关键词：鼻窦炎鼻息肉呼吸道合胞病毒上皮细胞鼻粘膜紧密连接部人鼻黏膜上皮细胞

短期口服糖皮质激素对慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮紧密连接的影响

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2024年第5期31卷 301-304页

作者：羡慕庞磊李颖王成硕张罗首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)北京100730 北京市耳鼻咽喉科研究所鼻病研究北京市重点实验室北京100005

目的观察短疗程口服糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)上皮中紧密连接(tight junctions,TJs)表达水平的影响。方法招募拟行鼻内镜手术治疗的CRSwNP患者,术前给予GCs口服连续7 d,分别留取治疗前、后的鼻息肉... 详细信息

目的观察短疗程口服糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)上皮中紧密连接(tight junctions,TJs)表达水平的影响。方法招募拟行鼻内镜手术治疗的CRSwNP患者,术前给予GCs口服连续7 d,分别留取治疗前、后的鼻息肉组织。选取因非炎性疾病而拟行相关鼻内镜手术的成年患者,留取术中所得到的钩突黏膜、中鼻甲黏膜或下鼻甲黏膜作为对照。应用实时荧光定量PCR和免疫荧光共聚焦显微镜检测TJs的表达情况。结果短疗程口服GCs治疗前,鼻息肉标本中claudin-3、claudin-4和occludin mRNA的表达水平显著低于正常鼻黏膜;治疗后,鼻息肉组织中TJs mRNA和蛋白的表达水平较治疗前显著升高。结论鼻息肉组织中多种TJs表达下降,短期口服GCs治疗可以显著上调TJs的表达。

关键词：鼻窦炎鼻息肉糖皮质激素类紧密连接部上皮屏障

氧化应激对人视网膜色素上皮细胞屏障功能的影响及其分子机制研究

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中华眼科杂志 2012年第5期48卷 417-422页

作者：柏凌闫欢欢张德秀王建明孙乃学西安交通大学医学院第二附属医院眼科 710004 西安交通大学医学院第一附属医院眼科

目的观察氧化应激对人视网膜色素上皮（RPE）细胞紧密连接屏障功能及紧密连接蛋白oecludin、claudin-1～4表达水平的影响。方法实验研究。培养人RPE细胞株13407，分为H2O2处理组和H2O2未处理组（对照组）。MTT法观察不同浓度H2O2对D407... 详细信息

目的观察氧化应激对人视网膜色素上皮（RPE）细胞紧密连接屏障功能及紧密连接蛋白oecludin、claudin-1～4表达水平的影响。方法实验研究。培养人RPE细胞株13407，分为H2O2处理组和H2O2未处理组（对照组）。MTT法观察不同浓度H2O2对D407细胞活性的影响；分别应用经上皮电阻（TER）和荧光素钠渗透实验检测低浓度H2O2作用24h和72h后RPE紧密连接屏障功能的变化；通过实时荧光定量PCR法和免疫印迹法分别从mRNA和蛋白水平检测H2O2作用24h后对紧密连接蛋白oceludin、elaudin-1～4表达水平的影响。采用t检验统计分析TER、荧光素钠渗透实验、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法的检测结果，采用单因素方差分析统计分析细胞活力结果。结果H2O2≤0．4mmol／L时，处理24h对RPE细胞的活力无明显影响。选择0．2mmol／L为后序试验的浓度。D407细胞培养8d后，TER达到稳定状态。0．2mmol／LH2O2作用3h后TER开始下降，至12h出现明显差异（18．62±1．89比24．11±0．96，t=4．490，P=0．013），24h接近最大效应（11．86±1．19比24．13±1．26，t=12．260，P=0．000），维持至72h（11．56±1．47比24．33±1．52，t=10．460，P=0．000）。H2O2处理IN07细胞24h后加入荧光素钠，不同时间点处理组的荧光渗透百分比均高于对照组（20min：25％±3％比12％±4％，t=-4．50，P=0．011；40min：36％±4％比16％±5％，t=-5．41，P=0．006；60min：51％±5％比29％±6％，t=-4．88，P=0．008）。H2O2处理IN07细胞24h后，claudin-1、3、4的mRNA和蛋白表达水平较对照组下调（claudin-1mRNA：0．98±0．18比0．28±0．12，t=5．60，P=0．005，elaudin-1蛋白：48±10比100±12，t=5．77，P=0．004；claudin-3mRNA：0．37±0．12比1．03±0．15，t=5．95，P=0．004，claudin-3蛋白：63±13比1004-15，t=3．23，P=0．032；claudin-4mRNA：0．38±0．11比0．99±0．17，t=5．22，P：0．002，claudin-4蛋白：57±12比100±13，t=4．21，P=0．014），claudin-2mRNA和蛋白表达水平则较对照组明显上调（mRNA：1．01±0．22比3．964-0．24，t=-15．69，P=0．000，蛋白：195±15比100±13，t=-8．29，P=0．001），但oceludin的mRNA和蛋白表达水平在处理组和对照组的差异均无统计学意义（mRNA：1．30±0．21比1．02±0．16，t=-1．84，P：0．140，蛋白：109±15比100±14，t=-0．76，P=0．490）。结论氧化应激能够破坏RPE紧密连接的完整性，使其屏障功能受损，而elaudin-1～4的表达水平变化可能在RPE的氧化损伤中发挥重要的作用。

关键词：氧化性应激色素上皮,眼血视网膜屏障紧密连接部

低蛋氨酸饮食对实验性结肠炎大鼠紧密连接蛋白表达和功能的影响

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中华内科杂志 2013年第6期52卷 503-509页

作者：饶艳霞陈洁陈蕾蕾顾伟忠浙江大学医学院附属儿童医院浙江310003

目的研究低蛋氨酸（methionine restriction，MetR）饮食对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的大鼠结肠炎的结肠黏膜病理组织学、肠黏膜通透性以及结肠上皮紧密连接蛋白表达的影响，并探讨其可能机制。方法SD大鼠随机分为常规饮食正常组（AA组... 详细信息

目的研究低蛋氨酸（methionine restriction，MetR）饮食对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的大鼠结肠炎的结肠黏膜病理组织学、肠黏膜通透性以及结肠上皮紧密连接蛋白表达的影响，并探讨其可能机制。方法SD大鼠随机分为常规饮食正常组（AA组）、低蛋氨酸饮食正常组（MetR组）、常规饮食模型组（DSS＋AA组）、低蛋氨酸饮食模型组（DSS＋MetR组），每组15只。DSS建模后第21天腹主动脉采血，分析血常规、肝肾功能和电解质水平，取结肠组织行HE染色分析肠黏膜病理学变化，检测肠组织髓过氧化物酶（MPO）活性，免疫组化染色检测增殖细胞核抗原（PCNA）分析肠上皮细胞的增殖状况，采用尤斯灌流室（Ussing chamber）检测肠黏膜通透性；采用蛋白质印迹法分析肠上皮紧密连接蛋白的表达。结果结肠炎造模大鼠出现腹泻、便血、体重下降，炎症集中在远端结肠，表现为隐窝脓肿，炎性细胞的浸润。与DSS＋AA组比较，MetR饮食干预可显著降低模型大鼠结肠的组织病理学评分[（10．55±3．62）分比（15．00±4．89）分，P=0．003]。DSS＋MetR组和DSS＋AA组大鼠血白细胞计数、肠组织MPO活性以及PCNA免疫组化结果的差异均无统计学意义。Ussing chamber检测显示，DSS＋AA组的跨膜电阻抗显著低于AA组[（28．40±6．78）Ω·cm。比（46．53±4．03）Ω·cm^2，P〈0．05]，MetR组显著高于AA组[（60．64±8．40）Ω·cm^2比（46．53±4．03）Ω·cm^2，P〈0．05]，DSS＋MetR组的短路电流值显著高于DSS＋AA组[（35．01±2．19）μA／cm^2比（29．61±1．19）μA／cm^2，P〈0．05]。蛋白质印迹结果显示，AA组和MetR组未见claudin2蛋白表达，MetR组的结肠上皮claudin3蛋白表达量明显高于AA组；与DSS＋AA组比较，DSS＋MetR组claudin2的表达量更高，claudin3表达量更高。结论MetR饮食对DSS诱导的结肠炎模型大鼠有明显的治疗作用，其机制可能不是通过调节炎性细胞浸润以及促进肠细胞生长的途径来缓解炎症损伤，而可能是通过改变紧密连接蛋白结构和功能而改善其肠黏膜屏障的功能，促进受损肠黏膜的修复。

关键词：结肠炎紧密连接部硫酸葡聚糖肠屏障功能低蛋氨酸

高转移肝癌细胞HCCLM6的酪氨酸磷酸化蛋白质组学研究

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军事医学 2019年第2期43卷 106-111页

作者：李素贞徐锋徐平安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所?生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京102206

目的探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术。方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽段亲和纯化技术,并结合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)实现HCC... 详细信息

目的探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术。方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽段亲和纯化技术,并结合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)实现HCCLM6细胞中酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HCCLM6细胞蛋白的提取质量;LC-MS/MS检测富集得到的酪氨酸磷酸化肽段;采用MaxQuant软件实现对质谱数据的分析。结果实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集,建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,共鉴定到1105个酪氨酸磷酸化蛋白,2666个酪氨酸磷酸化肽段,1884个酪氨酸磷酸化位点;酪氨酸磷酸化蛋白主要富集在黏附、细胞内吞、紧密连接等与转移相关的生物学进程;所鉴定的多种酪氨酸磷酸化蛋白质有效补充了已报道的酪氨酸磷酸化数据库,可为肝癌转移机制相关研究提供新的治疗靶点。结论建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集。

关键词：酪氨酸磷酸化蛋白质组肝癌肿瘤转移色谱法,高压液相紧密连接部

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埃博拉病毒与天然免疫

第二军医大学学报 2015年第6期36卷 607-611页

作者：张景熙李成忠白冲中国人民解放军第二批援利医疗队第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学长海医院感染科上海200433

埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)是迄今发现的最凶猛的烈性传染病之一。EVD传染性强、死亡率高,目前尚无特效治疗方法。EBOV感染后能够引起机体出现一系列免疫反应,宿主出现特异性及非特异性... 详细信息

埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)是迄今发现的最凶猛的烈性传染病之一。EVD传染性强、死亡率高,目前尚无特效治疗方法。EBOV感染后能够引起机体出现一系列免疫反应,宿主出现特异性及非特异性抗病毒免疫缺陷是EVD致死的重要原因。本文就EBOV对人体天然免疫功能的影响及其相应对策的研究进展作一综述。

关键词：埃博拉病毒天然免疫干扰素类紧密连接部树突细胞细胞因子风暴

乌司他丁对过氧化氢诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用

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胃肠病学 2017年第4期22卷 224-228页

作者：王改王志华段红年徐欢马江涛刘鑫惠刘佳琪李宁常春鹏郝京霞保定市儿童医院重症监护病房 071051 河北省儿童医院重症监护病房

背景:肠上皮细胞间紧密连接的破坏及其所致的肠黏膜屏障功能受损在一系列胃肠道疾病的发生、发展中起重要作用。目的:探讨乌司他丁对过氧化氢(H_2O_2)诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法:以Caco-2细胞体外培养制备肠单层上皮屏障模型... 详细信息

背景:肠上皮细胞间紧密连接的破坏及其所致的肠黏膜屏障功能受损在一系列胃肠道疾病的发生、发展中起重要作用。目的:探讨乌司他丁对过氧化氢(H_2O_2)诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法:以Caco-2细胞体外培养制备肠单层上皮屏障模型,将其分为空白对照组(不予干预)、H_2O_2组(500μmol/L H_2O_2)和低浓度(500 U/mL)、高浓度(3 000 U/mL)乌司他丁治疗组并予相应处理。检测丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性,以跨上皮细胞电阻(TEER)和荧光素钠透过率评估上皮屏障功能,蛋白质印迹法和免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达和定位,透射电镜观察紧密连接超微结构。结果:与空白对照组相比,H_2O_2组Caco-2细胞单层上皮MDA水平、荧光素钠透过率明显升高,SOD活性、TEER、ZO-1和occludin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P连接模糊,ZO-1、occludin蛋白分布断续不完整,荧光强度低。乌司他丁治疗组上述指标均较H_2O_2组显著改善(P紧密连接蛋白表达和分布有关。

关键词：乌司他丁过氧化氢肠黏膜屏障上皮细胞紧密连接部