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淫羊藿苷对阿尔茨海默病大鼠模型金属蛋白酶及紧密连接蛋白zo-1表达的影响

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中风与神经疾病杂志 2017年第10期34卷 927-930页

作者：陈仕检石胜良刘倩倩卢先富邓珊阳洪广西医科大学第四附属医院神经内科广西柳州545005 广西医科大学第一附属医院神经内科广西南宁530021

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白zo-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫... 详细信息

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白zo-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用Western-blot法分析紧密连接蛋白zo-1的表达,用免疫组织化学法检测大鼠海马区MMP-9、MMP-2表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退,zo-1表达明显减少(P蛋白明显增加;淫羊藿苷干预后,大鼠学习记忆能力均明显提高,海马区MMP-9/MMP-2表达减少(Pzo-1表达明显增加(P<0.05),以淫羊藿苷高剂量干予后明显。结论淫羊藿苷能通过抑制MMP-9/MMP-2表达,减轻血脑屏障破坏,从而改善AD症状。

关键词：阿尔茨海默病淫羊藿苷紧密连接蛋白zo-1 金属蛋白酶-9 金属蛋白酶-2

紧密连接蛋白zo-1和occludin相互作用降低参与人移植下颌下腺分泌功能改变

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紧密连接蛋白ZO-1和occludin相互作用降低参与人移植下颌下腺分泌...

重组人生长激素对阻塞性黄疸大鼠肠黏膜紧密连接蛋白zo-1及PMLC的影响

2017全国口腔生物医学学术年会

作者：丁冲李盛林吴立玲俞光岩北京大学口腔医院中心实验室北京大学医学部生理学与病理生理学系北京大学口腔医院颌面外科

目的:血管化自体下颌下腺移植术后,移植腺体分泌功能发生改变,部分患者出现"泪溢"。本研究目的为明确紧密连接蛋白zo-1和occludin在人移植下颌下腺分泌功能改变中的作用。方法:收集北京大学口腔医院自体移植下颌下腺术后因过量分泌而行... 详细信息

目的:血管化自体下颌下腺移植术后,移植腺体分泌功能发生改变,部分患者出现"泪溢"。本研究目的为明确紧密连接蛋白zo-1和occludin在人移植下颌下腺分泌功能改变中的作用。方法:收集北京大学口腔医院自体移植下颌下腺术后因过量分泌而行减量手术的标本,

关键词：自体下颌下腺移植术移植腺体分泌功能紧密连接蛋白zo-1 occludin蛋白调控机制

来源： cnki会议评论

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重组人生长激素对阻塞性黄疸大鼠肠黏膜紧密连接蛋白zo-1及PMLC的...

作者：康喜万延边大学

学位级别：硕士

目的：探讨重组人生长激素(recombinant human growthhormone, rhGH)干预下阻塞性黄疸大鼠肠黏膜紧密连接蛋白(tight junction associated protin, TJP)zo-1的变化及肌球蛋白轻链(myosinlight chain, MLC)磷酸化水平的研究。方法：将70只wistar清洁级大鼠(雌雄不限)随机分为：一.假手术(sham operation, SO)对照模型组,7天组,n=10。二.阻塞性黄疸(obstructive jaundice,OJ)模型组,7天组,n=12,14天组,n=13。三.阻塞性黄疸重组人生长激素(recombinant human growthhormone, rhGH)治疗模型组,7天组,n=12,14天组,n=13。四.假手术重组人生长激素治疗组(GSO),7天,n=10.假手术组及假手术重组人生长激素治疗组模型单纯游离胆总管但不予以阻断,阻塞性黄疸重组人生长激素组及阻塞性黄疸组胆总管游离后用3.0丝线结扎,制成阻塞性黄疸模型。术后第一天开始每日阻塞性黄疸重组人生长激素治疗组及假手术重组人生长激素治疗组给予注射重组人生长激素(0.75iu/kg)。分别于术后第7天及第14天两侧结扎末端回肠3cm(不损伤结扎段回肠动静脉弓),结扎段肠腔内注射异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran),半小时后采集门静脉血、心尖血、取回肠末端小肠组织。门静脉血液用分光光度法检测异硫氰酸荧光素-葡聚糖吸收强度衡量肠黏膜通透性。心尖血液检测肝功能。小肠组织HE染色后观察黏膜病理形态学改变,免疫组织化学方法检测肠黏膜紧密连接蛋白zo-1及磷酸化的肌球蛋白轻链含量。结果：1)rhGH组及OJ组与SO组相比,血清中胆红素及谷丙转氨酶增高(P0.05).rhGH组与OJ组相比,大鼠血清中胆红素及谷丙转氨酶值无明显差异(P>0.05)。2)rhGH组及OJ组与SO组相比,肠黏膜形态学观察损伤程度较重(P0.05)。3)rhGH组、OJ组门静脉血异硫氰酸荧光素-葡聚糖吸收强度高于SO组(P紧密连接蛋白zo-1的表达水平明显降低(P紧密连接蛋白zo-1的表达水平升高(P0.05)。梗阻14天组肠黏膜紧密连接蛋白zo-1的表达比梗阻7天组降低(P蛋白轻链磷酸化的水平降低(P蛋白轻链的磷酸化水平比OJ组降低(P蛋白轻链的磷酸化水平比治疗7天组有所升高,但无明显差异性(P>0.05);阻黄14天组肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化的水平比阻黄7天组升高(P紧密连接蛋白zo-1的表达升高而降低肌球蛋白轻链的磷酸化水平来减轻肠粘膜的损伤,降低肠黏膜的通透性,维护肠道黏膜的正常屏障功能。

关键词：阻塞性黄疸紧密连接蛋白zo-1 磷酸化肌球蛋白轻链(PMLC) 肠黏膜通透性肠上皮细胞重组人生长激素

ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白zo-1的影响

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ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响

作者：高红梅华中农业大学

学位级别：硕士

仔猪早期断奶技术是国内外集约化和规模化养猪生产中普遍关注和采用的先进技术。仔猪在断奶前后胃肠道微生物区系发生了很大变化。目前研究认为仔猪早期断奶后产生腹泻这一临床症状的主要原因是幼龄仔猪消化道组织及其功能发育尚未完全... 详细信息

仔猪早期断奶技术是国内外集约化和规模化养猪生产中普遍关注和采用的先进技术。仔猪在断奶前后胃肠道微生物区系发生了很大变化。目前研究认为仔猪早期断奶后产生腹泻这一临床症状的主要原因是幼龄仔猪消化道组织及其功能发育尚未完全成熟,断奶应激易导致仔猪胃肠道功能紊乱,使仔猪胃、肠道屏障受损,从而导致仔猪“断奶综合征”的发生。研究表明：肠黏膜上皮的完整性是仔猪早期断奶综合征发生的关键。肠黏膜屏障包括完整的肠上皮细胞及其细胞间连接所构成的机械屏障、肠道正常微生物群所构成的生物屏障和肠道相关淋巴样组织及其分泌抗体所构成的免疫屏障。紧密连接是肠上皮细胞间的主要连接方式,对维持上皮细胞极性、调节肠屏障的通透性、防止细菌、内毒素和毒性大分子物质进入体内发挥着重要作用。zo-1是组织紧密连接的重要组成成分,其表达上调可调节组织的通透性。因此,在分子生物学水平上检测zo-1的变化对研究断奶仔猪腹泻的机理具有重要的意义,同时可以降低仔猪断奶综合征的发病率。研究目的：建立起PCR反应体系,可以同时检测LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ三种大肠杆菌毒力因子。检测紧密连接蛋白zo-1在断奶仔猪ETEC性腹泻时胃肠道组织中的分布及表达水平及意义。实验方法：本实验选取24头断奶仔猪,攻入ETEC,分别取1d、3d、5d、7d的胃黏膜、回肠及结肠组织,采用半定量PCR法摸索反应适合的条件,实时荧光定量PCR的方法检测胃肠道紧密连接蛋白zo-1以及内参基因GAPDH的mRNA丰度;采用Western blotting的方法检测胃肠道紧密连接蛋白zo-1的蛋白表达量。实验结果：成功地建立了ETEC肠毒素三种毒力因子LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ的PCR分子生物学检测方法,为研究ETEC性断奶仔猪腹泻提供了科学的理论依据。实时荧光定量PCR结果表明：zo-1 mRNA的表达水平与组织的分化水平有关,随着断奶仔猪腹泻程度的加重,zo-1的表达率也随之下降。胃肠道紧密连接蛋白zo-1在三种组织中均有表达,可见在攻入ETEC后5d、7d表达量差异极其明显,且其表达量随着腹泻时间的延长逐渐呈降低趋势;Western blotting结果表明：zo-1蛋白表达量逐渐降低,表达水平明显低于内参基因的表达量。分析总结：通过本实验成功的揭示了肠屏障功能调控的部分分子机制,对于提升该领域的基础科学理论水平具有重要的临床实践意义,而且为断奶仔猪生产提供了技术研究平台,为营养调控仔猪肠道结构与功能提供了一些理论依据,为防治“仔猪早期断奶综合征”,提高仔猪成活率开辟出了一条新思路,从而促进养猪业的增效和增收。

关键词： ETEC 紧密连接蛋白zo-1 mRNA丰度蛋白表达

屎肠球菌HDRsEf1缓解LPS诱导的紧密连接蛋白zo-1下调表达作用及机制研究

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屎肠球菌HDRsEf1缓解LPS诱导的紧密连接蛋白ZO-1下调表达作用及机...

作者：刘琳华中农业大学

学位级别：硕士

肠上皮屏障是抵御细菌感染和炎症的主要防御机制,对人和动物的胃肠道健康至关重要。紧密连接蛋白是肠道屏障结构重要的组成部分,在维持屏障完整性方面起着决定性的作用。益生屎肠球菌能够维持肠道稳定性,改善宿主肠道健康。虽然屎肠球... 详细信息

肠上皮屏障是抵御细菌感染和炎症的主要防御机制,对人和动物的胃肠道健康至关重要。紧密连接蛋白是肠道屏障结构重要的组成部分,在维持屏障完整性方面起着决定性的作用。益生屎肠球菌能够维持肠道稳定性,改善宿主肠道健康。虽然屎肠球菌对肠道屏障的保护作用已经被报道,但其分子机制极其复杂,特别是调控紧密连接蛋白作用机制目前尚不清楚。本研究以LPS诱导紧密连接损伤的IPEC-J2细胞为模型,探究益生屎肠球菌HDRs Ef1对紧密连接蛋白zo-1的表达调控作用及机制,为益生菌对肠道紧密连接蛋白的表达调控提供理论基础,为益生菌预防和治疗动物胃肠道疾病提供技术支持。主要研究内容与结果如下:***、HDRs Ef1对IPEC-J2细胞zo-1表达的影响(1)LPS对IPEC-J2细胞zo-1表达的影响。建立LPS诱导的肠上皮细胞损伤模型,采用q RT-PCR法检测LPS对zo-1 m RNA表达水平的影响以确定LPS最佳作用浓度和时间。结果显示LPS显著下调zo-1的表达,具有一定的浓度依赖性。(2)HDRs Ef1对IPEC-J2细胞zo-1表达的影响。采用CCK8法检测HDRs Ef1对IPEC-J2细胞是否具有细胞毒性作用,结果显示10CFU/m L的HDRs Ef1活菌与IPEC-J2细胞共培养8 h内不会产生细胞毒性。采用q RT-PCR和Western blot分析HDRs Ef1对zo-1表达水平的影响,结果显示HDRs Ef1对LPS下调zo-1的表达具有缓解作用。采用细胞免疫荧光试验检测HDRs Ef1和LPS对zo-1结构形态的影响,结果显示HDRs Ef1能够抑制LPS对zo-1结构的破坏作用。因此HDRs Ef1能够抑制LPS对zo-1表达和结构的破坏作用。*** Ef1对LPS诱导zo-1下调作用机制的研究(1)转录因子AP-1对zo-1表达调控的影响。采用q RT-PCR法检测HDRs Ef1和LPS对转录因子的影响,确定参与调控的转录因子,结果显示AP-1可能参与zo-1的表达调控。通过基因超表达试验和RNA干扰试验分析AP-1对zo-1调控的作用,结果显示AP-1过表达可以抑制zo-1的表达,AP-1基因干扰可以升高zo-1的表达。因此AP-1能够参与zo-1的表达调控。(2)JNK/MKK7/ASK1通路对HDRs Ef1缓解LPS下调zo-1表达机制研究。采用Western blot检测AP-1的上游JNK激活情况,结果表明HDRs Ef1能够抑制LPS诱导的JNK磷酸化。通过加入JNK抑制剂(SP600125)和基因干扰试验检测HDRs Ef1是否通过该通路调控zo-1的表达,结果显示JNK通路阻断后,zo-1表达量升高,并且缓解LPS下调zo-1的表达。因此HDRs Ef1是通过抑制JNK途径来稳定zo-1的表达,并且HDRs Ef1缓解LPS上调AP-1的表达也依赖于JNK途径。采用Western blot和基因干扰试验检测JNK上游因子是否参与HDRs Ef1对zo-1的调控,结果显示HDRs Ef1能够抑制LPS诱导的MKK7、ASK1磷酸化。MKK7、ASK1基因干扰后,zo-1的表达上调,并且能够显著抑制LPS下调zo-1的表达。因此HDRs Ef1通过抑制JNK/MKK7/ASK1通路抑制LPS诱导zo-1的下调。(3)TLRs对HDRs Ef1缓解LPS下调zo-1表达机制研究。采用q RT-PCR法检测TLRs是否在HDRs Ef1调控zo-1表达中发挥作用,结果显示LPS处理后,TLR2表达量显著下调,而TLR4表达量显著上调;当HDRs Ef1处理后,TLR2、TLR4表达量均显著上调,并且能够缓解LPS下调TLR2的作用。通过RNA干扰试验分析TLR2/4的作用,结果显示TLR2和TLR4基因干扰后,能够抑制HDRs Ef1缓解LPS下调zo-1的作用。因此HDRs Ef1通过TLR2/4通路抑制LPS诱导zo-1的下调。(4)TNF-α对HDRs Ef1缓解LPS下调zo-1表达机制研究。采用q RT-PCR法检测HDRs Ef1对炎症因子的影响,结果显示HDRs Ef1能够抑制LPS诱导炎症因子上调的作用。通过q RT-PCR法和Western blot检测炎症因子刺激IPEC-J2细胞对zo-1表达量的影响,结果显示IL-6和TNF-α能够下调zo-1的表达量,但HDRs Ef1仅缓解TNF-α下调的作用。通过RNA干扰试验检测HDRs Ef1是否通过TLR4抑制LPS诱导TNF-α的表达,结果显示HDRs Ef1能够通过抑制TLR4缓解LPS诱导TNF-α的产生。因此HDRs Ef1通过TLR4抑制TNF-α诱导zo-1的下调。综上所述:HDRs Ef1能够抑制LPS下调Z

关键词：屎肠球菌HDRsEf1 紧密连接蛋白zo-1 脂多糖LPS JNK TLR TNF-α

黄芪提取物对老年痴呆大鼠基质金属蛋白酶-9和紧密连接蛋白zo-1表达的影响

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职业与健康 2020年第16期36卷 2191-2194页

作者：李俊娇马景红单铁英栗志英牛丽杰齐淑平王雪丹王银龙高立威河北工程大学附属医院河北邯郸056002 河北工程大学医学院河北邯郸056002 五矿邯邢职工总医院内科河北邯郸056002 邯郸市中心医院内科河北邯郸056002

目的研究黄芪提取物干预老年痴呆大鼠后,其海马组织中的基质金属蛋白酶-9与紧密连接蛋白(zo-1)水平的变化。方法2019年2月1日,制备出患有老年痴呆疾病的大鼠,将研究对象归为正常组、模型组、黄芪提取物组与吡乙酰胺组,各组均有6只。模型... 详细信息

目的研究黄芪提取物干预老年痴呆大鼠后,其海马组织中的基质金属蛋白酶-9与紧密连接蛋白(zo-1)水平的变化。方法2019年2月1日,制备出患有老年痴呆疾病的大鼠,将研究对象归为正常组、模型组、黄芪提取物组与吡乙酰胺组,各组均有6只。模型组:口服黄芪提取物100 mg/(kg·d),时间为28天,吡乙酰胺组:口服吡乙酰胺430 mg/(kg·d),时间为28天,正常组与模型组同时口服相同剂量的生理盐水。用水迷宫评估大鼠的学习记忆能力的变化;免疫印迹测量海马组织中的基质金属蛋白酶-9、zo-1的含量。结果和正常组相比,模型组的大脑记忆功能显著下降,基质金属蛋白酶-9的含量(0.555±0.036)增加而zo-1的含量(0.192±0.020)减少(均P蛋白酶-9的含量减少(0.335±0.018)而zo-1的含量(0.291±0.016)增加(均P0.05)。结论黄芪提取物能改善老年痴呆大鼠的行为能力,其机制为下降基质金属蛋白酶-9的含量,增加zo-1的含量。

关键词：黄芪提取物老年痴呆基质金属蛋白酶-9 紧密连接蛋白zo-1

非酒精性脂肪性肝病大鼠肠粘膜紧密连接蛋白zo-1及肌球蛋白轻链激酶的变化

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现代生物医学进展 2017年第30期17卷 5832-5836页

作者：吴云李春苗刘喃喃王立国庄丽维哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150001 天津市海河医院天津300350

目的:研究不同阶段非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠粘膜紧密连接蛋白zo-1及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。方法:将60只雄性清洁级SD大鼠随机分为两组:正常饮食组(NDG)和高脂饮食组(FDG)。于4周、8周、12周时观察各组大鼠肝脏病理学改... 详细信息

目的:研究不同阶段非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠粘膜紧密连接蛋白zo-1及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。方法:将60只雄性清洁级SD大鼠随机分为两组:正常饮食组(NDG)和高脂饮食组(FDG)。于4周、8周、12周时观察各组大鼠肝脏病理学改变;应用ELISA方法测定各阶段大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)的变化;应用鲎实验测定各阶段大鼠门静脉血中内毒素(ET)水平;应用免疫组化方法检测肠道粘膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白(zo-1)的表达及分布情况。结果:随着高脂饮食时间增长,高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变性程度逐渐加重;血清ALT、AST、TG、CHOL水平逐渐升高(4周时,P>0.05,8周和12周时P0.05;0.36±0.01比0.11±0.01,P紧密连接蛋白zo-1表达逐渐下降(3.6±0.7比3.9±0.32,P>0.05;2.8±0.63比3.8±0.42,P0.05;1.3±0.48比0.4±0.52,P紧密连接蛋白zo-1及MLCK可通过影响肠粘膜屏障功能,改变肠粘膜的通透性,促进非酒精性脂肪肝病发生发展。

关键词：非酒精性脂肪性肝病肠粘膜屏障肌球蛋白轻链激酶紧密连接蛋白zo-1

三焦祛湿方对膜性肾病小鼠肾组织zo-1和synaptopodin蛋白表达的影响

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天津中医药 2022年第5期39卷 649-655页

作者：陈静洁方敬赵亚云刘海平马赟陈志强河北中医学院河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室石家庄050091 河北中医学院第一附属医院石家庄050011

[目的]探讨三焦祛湿方对膜性肾病小鼠肾组织的保护作用以及对紧密连接蛋白zo-1和骨架蛋白synaptopodin表达的影响。[方法]将60只雌性Balb/c小鼠随机分为对照组10只和造模组50只。造模组预免疫2周后,开始正式免疫。给予尾静脉注射阳离子... 详细信息

[目的]探讨三焦祛湿方对膜性肾病小鼠肾组织的保护作用以及对紧密连接蛋白zo-1和骨架蛋白synaptopodin表达的影响。[方法]将60只雌性Balb/c小鼠随机分为对照组10只和造模组50只。造模组预免疫2周后,开始正式免疫。给予尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)(6.5 mg/kg),隔日1次,持续6周,复制膜性肾病小鼠模型。6周后,测造模组所有小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)显示均为阳性,提示造模成功;并随机选取4只作肾脏病理,观察到基底膜增厚并伴有免疫复合物的沉积,证实膜性肾病小鼠模型建模成功。将造模组随机分为模型组10只、中药低剂量组10只、中药高剂量组10只和盐酸贝那普利组10只,开始灌胃。空白组和模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,三焦祛湿方高低剂量组以及盐酸贝那普利组分别给予相应药物治疗(中药低剂量组3.71 g/kg、中药高剂量组7.42 g/kg、盐酸贝那普利组1.3 mg/kg),每日1次,持续4周。实验结束后,麻醉小鼠,腹主动脉取血,收集血液标本检测总胆固醇(TC)、血清白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜下观察肾组织病理形态;免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中zo-1和synaptopodin的表达水平。[结果]与空白组相比,模型组小鼠24 h-UTP、TC显著升高(P0.05)。各组小鼠Scr、BUN相比无显著性差异(P>0.05)。与空白组相比,模型组小鼠肾组织zo-1、synaptopodin的表达显著减少(Pzo-1、synaptopodin的表达显著升高(Pzo-1、synaptopodin的表达无显著性差异(P>0.05)。[结论]三焦祛湿方对膜性肾病小鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与上调zo-1和synaptopodin蛋白的表达量有关。

关键词：三焦祛湿方膜性肾病实验研究紧密连接蛋白zo-1 骨架蛋白synaptopodin

丁苯酞对急性一氧化碳中毒大鼠血脑屏障zo-1和Claudin-5蛋白表达的影响

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丁苯酞对急性一氧化碳中毒大鼠血脑屏障ZO-1和Claudin-5蛋白表达...