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自发性狼疮肾炎模型小鼠肾小球系膜细胞的原代培养和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第7期38卷 611-616页

作者：陈鹤鸣林婷宋艳芳林青福建中医药大学附属人民医院检验科福建福州350004

目的原代培养及鉴定自发性狼疮肾炎模型小鼠肾小球系膜细胞,探索分离、培养的最佳条件。方法对照组ICR小鼠和模型组MRL/lpr自发性狼疮肾炎小鼠各9只,在12、 14和18周龄时,ELISA检测小鼠的自身抗体,二辛可宁酸(BCA)法检测尿蛋白;HE染色... 详细信息

目的原代培养及鉴定自发性狼疮肾炎模型小鼠肾小球系膜细胞,探索分离、培养的最佳条件。方法对照组ICR小鼠和模型组MRL/lpr自发性狼疮肾炎小鼠各9只,在12、 14和18周龄时,ELISA检测小鼠的自身抗体,二辛可宁酸(BCA)法检测尿蛋白;HE染色和Masson染色观察小鼠狼疮肾炎病变情况。采用细胞筛网分离出肾小球,结合优生选择法原代培养肾小球系膜细胞。通过细胞形态学、免疫细胞化学染色检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、足细胞裂隙素(nephrin)表达鉴定MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞。结果模型组小鼠抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(dsDNA)抗体明显增高,尿蛋白在14和18周龄明显增高;MRL/lpr小鼠从12周开始,肾组织即表现出狼疮肾炎相关的病理改变。接种肾小球系膜细胞25 d后,MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞逐渐铺满培养瓶底,相差显微镜下呈星形、梭形。免疫细胞化学显示α-SMA阳性、 nephrin阴性,排除其他肾小球固有细胞。结论建立了自发性狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞的原代培养方法并进行了鉴定。

关键词： MRL/lpr小鼠狼疮肾炎系膜细胞原代培养鉴定

IgA肾病患者肾组织2型补体受体的表达及参与补体C3沉积的可能机制

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中华肾脏病杂志 2023年第6期39卷 405-413页

作者：方梦婷司美君余学清华南理工大学医学院广州510006 南方医科大学附属广东省人民医院肾内科(广东省医学科学院) 广州510080 粤港慢性肾病免疫与遗传研究联合实验室广州510080

目的探讨IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者肾组织系膜细胞2型补体受体(complement receptor 2,CR2)的表达及其参与补体C3沉积的可能机制。方法选取广东省人民医院2021年8月至2022年5月肾活检确诊的IgAN患者,按照系膜区补体C3沉积强度... 详细信息

目的探讨IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者肾组织系膜细胞2型补体受体(complement receptor 2,CR2)的表达及其参与补体C3沉积的可能机制。方法选取广东省人民医院2021年8月至2022年5月肾活检确诊的IgAN患者,按照系膜区补体C3沉积强度将患者分为补体C3沉积系膜细胞,随机分为对照组和实验组,实验组使用IgA蛋白(2 g/L)刺激系膜细胞8 h,Western印迹法和实时荧光定量PCR法检测系膜细胞CR2的表达;通过基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析分析两组差异基因的表达情况及不同功能组成。结果该研究共纳入75例IgAN患者,其中补体C3沉积细胞计数为阴性、1+、2+、3+~4+者分别占2.0%、8.0%、18.0%、72.0%,较补体C3沉积细胞实验中,Western印迹和实时荧光定量PCR结果显示,IgA蛋白组CR2表达高于对照组(P系膜细胞发生活跃的通路变化。结论IgA蛋白刺激系膜细胞表达CR2参与补体C3沉积可能是IgAN补体C3活化的重要机制。

关键词：肾小球肾炎,IgA 补体C3 受体,补体系膜细胞

RREB1对TGF-β1诱导系膜细胞增殖的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2022年第1期42卷 8-13页

作者：赵雅洁施会敏何田田季嘉玲甘卫华张爱青南京医科大学第二附属医院儿肾科江苏南京210003

目的:探讨ras反应元件结合蛋白1(ras responsive element binding protein 1,RREB1)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导大鼠系膜细胞增殖的影响。方法:用TGF-β1及RREB1-siRNA转染干预系膜细胞,CCK-8法检测系膜细胞增殖活力,RT-PCR法检测细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)及RREB1 mRNA水平,Western blot法检测PCNA、α-SMA及RREB1蛋白的表达,流式细胞术检测系膜细胞周期。结果:与对照组相比较,TGF-β1干预后CCK-8法检测系膜细胞增殖活力增加(P细胞周期检测提示S期细胞百分率增多,G1期细胞百分率减少(P系膜细胞增殖活力下降(P细胞周期提示S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高(P系膜细胞增殖。

关键词： RREB1 转化生长因子β1 系膜细胞增殖

芪黄健脾滋肾颗粒对肾小球系膜细胞过度增殖的改善作用

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中华中医药杂志 2023年第2期38卷 831-835页

作者：尚双双李明黄传兵安徽中医药大学合肥230038 安徽中医药大学第一附属医院合肥230031

目的:探讨芪黄健脾滋肾颗粒改善肾小球系膜细胞增殖的作用及其可能机制。方法:以体外培养的HBZY-1肾小球系膜细胞为模型,模型组采用TGF-β1刺激模拟肾小球系膜细胞过度增殖,血清组在模型组基础上加入芪黄健脾滋肾颗粒含药血清;采用CCK-... 详细信息

目的:探讨芪黄健脾滋肾颗粒改善肾小球系膜细胞增殖的作用及其可能机制。方法:以体外培养的HBZY-1肾小球系膜细胞为模型,模型组采用TGF-β1刺激模拟肾小球系膜细胞过度增殖,血清组在模型组基础上加入芪黄健脾滋肾颗粒含药血清;采用CCK-8法检测肾小球系膜细胞的增殖活力;运用RT-PCR技术检测LncRNA GAS5、miR-21-5p、Sprouty1 mRNA、ERK1/2 mRNA的表达;采用Western blot法检测Sprouty1、p-ERK1/2、ERK1/2蛋白表达;结果:含药血清在10%浓度下对模型组的异常细胞增殖有明显的抑制作用(P系膜细胞增殖。

关键词：系统性红斑狼疮芪黄健脾滋肾颗粒 LncRNA GAS5/miR-21/Sprouty1/ERK HBZY-1细胞肾小球系膜细胞

小檗碱激活SIRT1/AMPK信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖和自噬功能

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安徽医科大学学报 2023年第6期58卷 896-901页

作者：杨琳王蓉蓉郭小雨唐丽琴魏伟安徽医科大学临床药理研究所合肥230032 中国科学技术大学附属第一医院药剂科合肥230001

目的研究小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境下的系膜细胞增殖和自噬水平的影响及具体的分子机制。方法将指数生长期的系膜细胞分成以下几组:正常组、高糖组、高糖+小檗碱治疗组(30、60、90μmol/L)、高糖+小檗碱(90μmol/L)+腺苷酸活化蛋白激酶... 详细信息

目的研究小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境下的系膜细胞增殖和自噬水平的影响及具体的分子机制。方法将指数生长期的系膜细胞分成以下几组:正常组、高糖组、高糖+小檗碱治疗组(30、60、90μmol/L)、高糖+小檗碱(90μmol/L)+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组(CC组);高内涵细胞成像仪计算系膜细胞的数量;免疫荧光法检测Ⅳ型胶原蛋白(Col-IV)、纤连蛋白(FN)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)在系膜细胞中表达情况;Western blot法检测细胞上LC3B、Beclin-1、p62、Col-IV、FN和沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路蛋白表达水平。结果与正常组比较,高内涵细胞成像仪结果显示高糖组系膜细胞异常增殖;免疫荧光法和Western blot法结果显示高糖组系膜细胞外基质沉积蛋白Col-IV、FN的表达水平升高;Western blot法结果显示高糖组系膜细胞中SIRT1、p-AMPK、LC3B、Beclin-1蛋白表达降低,p-p65、p62蛋白表达升高。与高糖组比较,BBR对高糖诱导的系膜细胞异常增殖能力具有抑制作用;BBR能降低系膜细胞外基质沉积蛋白Col-IV、FN的表达水平;BBR能升高系膜细胞上SIRT1、p-AMPK、LC3B、Beclin-1蛋白的表达,同时降低p-p65、p62蛋白的表达;CC组减弱了大剂量BBR抑制系膜细胞增殖和促进自噬的作用。结论小檗碱能有效抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和提高细胞自噬水平,这可能与SIRT1/AMPK信号通路有关。

关键词：小檗碱糖尿病肾病系膜细胞 SIRT1/AMPK 增殖自噬

火绒草黄芪混煎液对系膜增生性肾小球肾炎模型大鼠的改善作用及机制

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中国药房 2022年第19期33卷 2359-2363页

作者：侯侠赵玥张颖贾冬仲坤房小楠董笑博齐越江苏省徐州医药高等职业学校药学技术系江苏徐州221116 辽宁中医药大学附属第二医院药理室沈阳110034 辽宁中医药大学中医研究生学院沈阳110847

目的研究火绒草黄芪混煎液(HRCHQ)对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)模型大鼠的改善作用及机制。方法将70只大鼠按体质量分为假手术组(n=10)和造模组(n=60)。假手术组大鼠行假手术,造模组大鼠采用免疫学方法(弗氏佐剂+牛血清蛋白+脂多糖)复... 详细信息

目的研究火绒草黄芪混煎液(HRCHQ)对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)模型大鼠的改善作用及机制。方法将70只大鼠按体质量分为假手术组(n=10)和造模组(n=60)。假手术组大鼠行假手术,造模组大鼠采用免疫学方法(弗氏佐剂+牛血清蛋白+脂多糖)复制MsPGN模型。将造模成功的50只大鼠按体质量随机分为模型组和HRCHQ高、中、低剂量组(4.05、2.03、1.02g/kg)以及盐酸贝那普利片组(20 mg/kg),每组各10只。假手术组、模型组大鼠灌胃蒸馏水,其余各组大鼠灌胃相应药液15mL/kg,每天1次,连续5周。末次给药后,测定大鼠血清中总蛋白、白蛋白、尿素氮含量,采用免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏组织中转移生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,采用免疫荧光法检测大鼠肾脏组织中补体C3的表达,采用Western blot法检测大鼠肾脏组织中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β(PI3K/Akt/GSK3β)信号通路相关蛋白的磷酸化水平及纤连蛋白(FN)的表达水平。结果与模型组比较,HRCHQ高剂量组大鼠血清中总蛋白、白蛋白含量均显著升高(P系膜细胞增殖以及抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路活性来改善MsPGN。

关键词：火绒草黄芪系膜增生性肾小球肾炎系膜细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β信号通路

黄芪甲苷抑制内质网应激及CHOP信号通道改善衣霉素诱导的系膜细胞凋亡

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医药导报 2022年第2期41卷 150-154页

作者：王增四高文陈丹陈菁黄丹武汉市中西医结合医院肾病内科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉430030

目的观察黄芪甲苷对衣霉素诱导的系膜细胞凋亡、内质网应激标志蛋白和CHOP信号通路表达的影响,从系膜细胞凋亡角度探讨黄芪甲苷治疗早期糖尿病肾病的可能机制。方法采用衣霉素诱导大鼠系膜细胞产生内质网应激,分为模型对照组、黄芪甲苷... 详细信息

目的观察黄芪甲苷对衣霉素诱导的系膜细胞凋亡、内质网应激标志蛋白和CHOP信号通路表达的影响,从系膜细胞凋亡角度探讨黄芪甲苷治疗早期糖尿病肾病的可能机制。方法采用衣霉素诱导大鼠系膜细胞产生内质网应激,分为模型对照组、黄芪甲苷小剂量组(AS-IVL,50μg·mL^(-1))、黄芪甲苷大剂量组(AS-IVH,100μg·mL^(-1))、4-苯基丁酸组(PBA,10 mmol·L^(-1)),并设置正常对照组。流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞eIF2α、PERK和IRE1α磷酸化水平,测定GRP78、CHOP、BAX、Bcl-2和Cleaved caspase 3蛋白的表达变化。结果与正常对照组比较,模型对照组系膜细胞凋亡水平升高,内质网应激相关蛋白eIF2α、PERK及IRE1α磷酸化水平显著上调,而调控细胞凋亡的CHOP、BAX和Cleaved caspase 3表达明显升高(P细胞比较,2种浓度黄芪甲苷组系膜细胞凋亡水平明显下降(P细胞内质网应激、缓解CHOP介导的细胞过度凋亡,显著改善衣霉素诱导的大鼠系膜细胞凋亡。

关键词：黄芪甲苷细胞凋亡内质网应激系膜细胞

糖尿病对肾小球内葡萄糖转运蛋白1表达的影响

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中国老年学杂志 2022年第23期42卷 5749-5753页

作者：张丽吴美延许颖许钟镐吉林大学第一医院肾病科吉林长春130061

目的通过肾小球系膜细胞培养及2型糖尿病动物模型来研究糖尿病对葡萄糖转运蛋白(GLUT)1的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖(HG)刺激12 h、24 h后提取RNA及蛋白。高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素诱导2型糖尿病肾病(DN)... 详细信息

目的通过肾小球系膜细胞培养及2型糖尿病动物模型来研究糖尿病对葡萄糖转运蛋白(GLUT)1的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖(HG)刺激12 h、24 h后提取RNA及蛋白。高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素诱导2型糖尿病肾病(DN)大鼠模型,随机分成对照(Control)组、DN组,记录大鼠体重、血糖,留取尿液、血清、肾脏组织进行生化指标、12脂氧化酶(12-LO)、GLUT1测定及组织病理等检查。结果在体外,HG刺激下肾小球系膜细胞内12-LO转录及蛋白水平均升高,而GLUT1转录及表达在HG刺激12 h后升高,24 h后下降。在体内,PAS染色显示DN组肾小球体积明显增大,系膜基质增生,囊腔裂隙变窄,肾小管管腔狭窄,肾小管肿胀。与Control组相比,DN组肾组织内12-LO表达明显升高,GLUT1表达明显下降(P<0.05)。免疫组化示DN组肾小球内12-LO表达显著增加,GLUT1表达显著降低(P<0.05)。结论DN条件下不同阶段肾小球内12-LO和GLUT1表达不完全同步,提示12-LO和GLUT1在DN肾小球损伤过程中可能既有致病作用,又有保护性作用。

关键词：糖尿病肾病 GLUT1 12-LO 系膜细胞

Nrf2调节氧化应激在糖尿病肾病中的作用机制

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中国临床研究 2023年第5期36卷 646-650页

作者：尹大鹏郭志新山西医科大学第二医院内分泌科山西太原030001

氧化应激参与糖尿病肾病(DN)的发生,葡萄糖代谢异常会导致氧自由基的产生,损伤肾脏固有细胞,影响肾组织的结构和功能。同时高糖诱导的氧化应激抑制抗氧化因子核因子红系2相关因子(Nrf2)的表达,其激活对糖尿病小鼠肾脏具有保护作用,能够... 详细信息

氧化应激参与糖尿病肾病(DN)的发生,葡萄糖代谢异常会导致氧自由基的产生,损伤肾脏固有细胞,影响肾组织的结构和功能。同时高糖诱导的氧化应激抑制抗氧化因子核因子红系2相关因子(Nrf2)的表达,其激活对糖尿病小鼠肾脏具有保护作用,能够在细胞水平上改善肾损伤。但Nrf2参与DN的抗氧化机制目前仍未阐明,因此本文将介绍Nrf2在细胞水平上调节氧化应激改善高糖引起的肾损伤。

关键词：氧化应激核因子红系2相关因子糖尿病肾病足细胞系膜细胞肾小球内皮细胞肾小管铁死亡