检索结果-南通市图书馆

LncRNA-UC.25+对背根神经节P2Y14受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用及可能机制

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA-UC.25+对背根神经节P2Y14受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的...

作者：但煜南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:在世界范围内,糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种常见的多发性代谢性疾病,由于神经病变导致的糖尿病神经病理痛(Diabetic neuropathic pain,DNP)是最严重的一种并发症,涉及进行性神经元损伤和功能障碍。背根神经节(dorsal ro... 详细信息

研究背景:在世界范围内,糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种常见的多发性代谢性疾病,由于神经病变导致的糖尿病神经病理痛(Diabetic neuropathic pain,DNP)是最严重的一种并发症,涉及进行性神经元损伤和功能障碍。背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的神经元负责伤害性信息的传递,并且DRG中表达的分子或受体功能改变会导致疼痛。神经性疼痛的发展与神经元之间异常的信号传导有关,卫星胶质细胞(Satellite glial cells,SGCs)紧密地包围着DRG神经元的胞体,SGCs在伤害性信号通讯中发挥重要作用。活化和受损的细胞将大量的三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)释放到细胞外,从而激活两种类型的P2嘌呤能受体,包括P2X和P2Y受体。有研究表明P2Y受体参与糖尿病神经病理痛,但P2Y受体是否参与DNP,以及P2Y受体介导DNP的过程和作用机制尚不清楚。长链非编码RNA(long noncodingRNA,lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子,能够参与维持细胞和组织稳态等多种生物学过程,尽管大多数lncRNA功能尚不清楚,但lncRNA与多种疾病的发生发展密切相关。本课题通过建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,探究lncRNA-UC.25+对背根神经节P2Y受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用及机制。目的:1.通过建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,探究背根神经节P2Y受体在2型糖尿病神经病理痛中的作用。2.观察lncRNA-UC.25+在大鼠DRG卫星胶质细胞上的P2Y受体介导2型糖尿病神经病理痛中的作用。3.探究lncRNA-UC.25+调控P2Y受体介导的2型糖尿病神经病理痛的可能机制。方法:建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,并将大鼠随机分为5组:正常对照组(Control组)、2型糖尿病神经病理痛模型组(DNP组)、模型合并P2YshRNA处理组(DNP+P2Y shRNA组)、模型合并lncRNA-UC.25+shRNA处理组(DNP+UC.25+shRNA组)及模型合并阴性对照质粒处理组(DNP+Negative Control,简称DNP+NC shRNA)。实验内容:(1)测定大鼠机械性缩足痛阈值和热缩足潜伏期;(2)Real-time PCR(Q-PCR)检测各组大鼠背根神经节(DRG)中P2Y受体和lncRNA-UC.25+的表达水平,蛋白印迹(Western blot)检测P2Y受体的蛋白表达水平;(3)免疫荧光双标法检测各组大鼠DRG中P2Y受体与卫星胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的共表达;(4)蛋白印迹检测白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达变化;(5)蛋白印迹检测p38的磷酸化水平表达变化;(6)通过试剂盒检测各组大鼠血清及DRG中SOD活力及GSH,MDA的含量;(7)通过生物信息学技术来预测P2Y受体的转录因子;(8)通过免疫共沉淀实验(RIP)确定与lncRNA-UC.25+相互作用的蛋白,培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),分为两组:共转染pc DNA3.0-UC.25+×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒实验组,共转染pc DNA3.0-12×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒对照组,再通过蛋白印迹观察STAT1蛋白表达变化;(9)培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),转染lncRNA-UC.25+过表达质粒和STAT1过表达质粒,通过Q-PCR和蛋白印迹观察STAT1和P2Y受体表达变化。结果:(1)与Control组大鼠相比,DNP组大鼠机械性缩足痛阈值和热缩足潜伏期均明显降低(p痛阈值和热缩足潜伏期均明显升高(p0.05);(2)与Control组相比,DNP组大鼠背根神经节中的UC.25+的表达显著升高(p0.05);(3)免疫荧光双标结果显示:P2Y受体与卫星胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)存在共表达,且DNP组、DNP+NC shRNA组荧光强度高于Control组(p<0.05),DNP+P2Y sh

关键词：糖尿病神经病理痛 P2Y14受体背根神经节 lncRNA 卫星胶质细胞

背根神经节卫星胶质细胞P2Y12受体在糖尿病神经病理痛中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

背根神经节卫星胶质细胞P2Y12受体在糖尿病神经病理痛中的作用研究

作者：王寿玉南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病作为一种全球性的慢性流行病,对人类的健康水平和生活质量影响极大。糖尿病病人除了高血糖这一明显指征外,还会出现众多的并发症,也正是这些并发症很大程度上危及着患者的生命。其中,糖尿病神经病理痛(DNP)是糖尿病最常... 详细信息

研究背景:糖尿病作为一种全球性的慢性流行病,对人类的健康水平和生活质量影响极大。糖尿病病人除了高血糖这一明显指征外,还会出现众多的并发症,也正是这些并发症很大程度上危及着患者的生命。其中,糖尿病神经病理痛(DNP)是糖尿病最常见并且难以治愈的一种并发症,患者常出现痛觉过敏、自发痛及触诱发痛等临床症状。目前,有关糖尿病神经病理痛(DNP)的发生、发展机制尚不确切。以往通常将神经元作为治疗疼痛的靶标,但越来越多的研究指出:参与慢性疼痛病理变化的不单单是神经元细胞,胶质细胞在该过程中也具有重要作用。外界的伤害性刺激可引起初级感觉神经节神经末梢释放大量的三磷酸腺苷(ATP),ATP作为神经递质能够作用于嘌呤2(P2)受体,P2受体包含P2X和P2Y受体,P2X和P2Y受体相关亚型参与神经病理痛病理过程。研究指出,伤害性刺激能够使得初级感觉神经节卫星胶质细胞对ATP的敏感性增强,且大鼠背根神经节卫星胶质细胞存在P2Y嘌呤受体的表达。目的:本研究通过建立II型糖尿病大鼠模型及高糖高脂原代卫星胶质细胞(来源于大鼠背根神经节)模型,旨在探究背根神经节卫星胶质细胞P2Y嘌呤受体在II型糖尿病神经病理性疼痛中的作用及其机制。方法:1、动物实验。本研究应用II型糖尿病大鼠模型,探究糖尿病神经病理痛(DNP)的相关机制。实验共分为四个组:对照组(Ctrl)、II型糖尿病模型组(DM)、模型合并P2Y短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)处理组(DM+P2Ysh RNA)及模型合并空载质粒处理组(即模型合并阴性对照处理组:DM+Negative Control,简称DM+NC)。实验内容:(1)血糖测定;(2)行为学测定(分别测定各组大鼠的机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期);(3)Real-time PCR方法检测各组大鼠背根神经节(DRG)中P2Y受体、缝隙连接蛋白Cx43及炎性因子白介素1β(IL-1β)的m RNA表达水平;(4)蛋白印迹方法检测各组大鼠背根神经节(DRG)中P2Y受体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和肿瘤坏死因子I型受体(TNFR1)蛋白表达水平;(5)免疫荧光双标法检测各组实验大鼠背根神经节P2Y受体与卫星胶质细胞标记物谷氨酰氨合成酶(GS)的表达变化。2、细胞实验。本研究通过高糖高脂处理原代培养的背根神经节卫星胶质细胞(SGCs),建立其高糖高脂细胞模型,探寻背根神经节(DRG)卫星胶质细胞P2Y受体在糖尿病神经病理痛中的作用及机制。细胞实验共有两个部分:一个部分的分组为对照组(Ctrl)、高糖高脂模型组(HGHF)、模型合并P2Ysh RNA处理组(HGHF+P2Ysh RNA)及模型合并空载质粒处理组(即模型合并阴性对照处理组:HGHF+Negative Control,简称HGHF+NC);另一部分分组为:对照组(Ctrl)、高糖高脂模型组(HGHF)及模型合并P2Y受体拮抗剂组(HGHF+P2Yantagonist)。实验内容:(1)Real-time PCR方法检测各组背根神经节卫星胶质细胞(SGCs)中P2Y受体、IL-1β的m RNA表达水平;(2)蛋白印迹方法检测各组卫星胶质细胞(SGCs)中P2Y受体及磷酸化P38(p-P38)蛋白表达水平;(3)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)方法检测各组卫星胶质细胞(SGCs)培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放量;(4)荧光素-荧光素酶方法检测各组卫星胶质细胞(SGCs)ATP的释放量。结果:1、动物实验。(1)正常饮食大鼠餐后血糖水平组间无差异,DM组高糖高脂饮食四周后,餐后血糖水平仍与Ctrl组无明显差异。直至小剂量STZ注射后的第七周末,DM组大鼠餐后血糖水平明显高于Ctrl组(p糖尿病大鼠成模的餐后血糖指标。P2Ysh RNA处理十天后,DM+P2Ysh RNA组大鼠餐后血糖明显低于DM组大鼠(p0.05)。(3)DM组大鼠背根神经节P2Y受体、缝隙连接蛋白Cx43及IL-1β的m RNA表达水平均明显高于Ctrl组(分别为p神经节P2Y受体、IL-1β的m RNA表达水平较DM组明显降低(p<0.001),Cx43 m RNA表达水平也同样低于DM组(p<0.05

关键词：糖尿病神经病理痛背根神经节卫星胶质细胞嘌呤P2Y12受体

LncRNA-UC.25+对脊髓P2Y14受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用及机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA-UC.25+对脊髓P2Y14受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用及...

作者：武保国南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病神经病理痛是糖尿病的常见并发症,其复杂的发病机制及临床表现为临床治疗带来了很大困扰。脊髓作为中枢神经系统的重要组成部分,是调控糖尿病神经病理痛发生发展的重要部位。脊髓小胶质细胞可以调节脊髓神经元的活性,对... 详细信息

研究背景:糖尿病神经病理痛是糖尿病的常见并发症,其复杂的发病机制及临床表现为临床治疗带来了很大困扰。脊髓作为中枢神经系统的重要组成部分,是调控糖尿病神经病理痛发生发展的重要部位。脊髓小胶质细胞可以调节脊髓神经元的活性,对慢性疼痛具有调节作用。当发生神经损伤或者糖尿病时,小胶质细胞被大量激活,促进释放多种炎症因子和趋化因子,增强神经元的兴奋性并促进疼痛传导。同时,活化的小胶质细胞引发ATP释放到细胞外,激活嘌呤能P2受体。有研究表明,P2Y受体参与糖尿病神经病理性疼痛,P2Y与P2Y受体具有高度的序列同源性,但未见P2Y受体参与糖尿病神经病理痛的报道。Lnc RNAs不具有蛋白质编码功能,仅以RNA状态调控基因的表达水平。越来越多的研究已证实,lnc RNAs的失调与许多人类疾病密切相关,具有促进或抑制疾病发生发展的作用。本研究通过建立动物模型,探究P2Y受体是否参与糖尿病神经病理痛过程并研究lnc RNA-UC.25+是否通过影响P2Y受体的表达影响糖尿病神经病理痛及其可能机制。目的:1、探究脊髓P2Y受体在2型糖尿病神经病理痛中的作用。2、了解lnc RNA-UC.25+在大鼠脊髓P2Y受体介导糖尿病神经病理痛中的作用及可能机制。方法:1、建立2型糖尿病神经病理痛模型,随机将SD大鼠分为四组:对照组(Control)、模型组(DNP)、模型加P2Y sh RNA处理组(DNP+P2Ysh RNA)、模型加空载质粒处理组(DNP+NC sh RNA)。分别测定各组大鼠机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期;实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测大鼠脊髓P2Y受体m RNA和蛋白表达情况;蛋白印迹检测大鼠脊髓白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α受体(TNF-α)的表达情况以及p38 MAPK磷酸化水平的表达情况;免疫荧光双标检测大鼠脊髓P2Y受体与小胶质细胞标志物OX42的共表达情况。2、在确定P2Y受体参与糖尿病神经病理痛的基础上,再次建立动物模型,随机将SD大鼠分为四组:对照组(Control)、模型组(DNP)、模型加UC.25+sh RNA处理组(DNP+UC.25+sh RNA)、模型加空载质粒处理组(DNP+NC sh RNA)。分别测定各组大鼠机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期;实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测大鼠脊髓lnc RNA-UC.25+以及P2Y受体m RNA和蛋白的表达情况;蛋白印迹检测大鼠脊髓IL-1β和TNF-α的表达情况以及p38MAPK磷酸化水平的表达情况;免疫荧光双标检测大鼠脊髓P2Y受体与小胶质细胞标志物OX42的共表达情况。为探讨lnc RNA-UC.25+对P2Y受体的调控机制,采用RNA结合蛋白免疫沉淀实验(RIP)结合蛋白印迹检测lnc RNA-UC.25+与转录因子STAT1的相互作用;染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测转录因子STAT1与P2Y基因启动子的相互结合情况;正常培养以及高糖培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),分别转染lnc RNA-UC.25+过表达与低表达质粒以及STAT1过表达与低表达质粒,通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测STAT1和P2Y受体的表达情况。结果:1、造模之前各组大鼠体重、血糖等各项指标比较无差别(p>0.05)。与Control组相比,DNP组大鼠机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期明显降低(p0.05)。2、与Control组相比,DNP组大鼠的机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期明显降低(p<0.01);P2Y m RNA和蛋白的表达以及lnc RNA-UC.25+的表达均明显增加(p<0.01);IL-1β和TNF-α以及p38 MAPK磷酸化水平也明显增加(p<0.01);P2Y与OX42共表达水平增加(p<0.01)。经UC.25+sh RNA处理之后,与DNP组相比,DNP+UC.25+sh RNA组大鼠机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期明显增加(p<0.01);P2Ym RNA和蛋白的表达以及lnc RNA-UC.25+的表达显著下降(p<0.01);IL-1β和TNF-α以及p38 MAPK磷酸化水平也明显降低(p

关键词：糖尿病神经病理痛脊髓小胶质细胞 P2Y14受体 lncRNA

嘌呤能2X7受体在背根神经节TRPV1介导大鼠糖尿病神经病理痛中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

嘌呤能2X7受体在背根神经节TRPV1介导大鼠糖尿病神经病理痛中的作...

作者：王安慧南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种常见的内分泌代谢性疾病,糖尿病神经病理痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是其最常见的慢性并发症之一,亦是临床最常见的神经病理痛类型之一。目前,关于糖尿病神经病理痛的发病机... 详细信息

研究背景和目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种常见的内分泌代谢性疾病,糖尿病神经病理痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是其最常见的慢性并发症之一,亦是临床最常见的神经病理痛类型之一。目前,关于糖尿病神经病理痛的发病机制尚不清楚,且治疗并不理想,患者生活质量受到严重影响。研究表明,P2X7受体分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的卫星胶质细胞(satellite glial cells,SGCs)中,参与了炎性痛和神经病理痛的发病过程;而分布于DRG神经元中的瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1),也称为辣椒素受体,与DNP密切相关;而感觉神经节中神经元与胶质细胞存在相互作用,提示DRG卫星胶质细胞P2X7受体与神经元TRPV1在DNP中可能存在一定的关系和作用。因此,本研究旨在探索大鼠DRG卫星胶质细胞P2X7受体在神经元TRPV1介导的大鼠糖尿病神经病理痛中的作用及其可能机制,将为糖尿病并发神经病理痛的发病机制与相关防治研究提供新的途径。方法:本实验通过高糖高脂饮食加低剂量STZ注射建立大鼠DNP模型,将所有实验大鼠随机分为对照组(Control)、DNP模型组(DNP)、DNP加鞘内注射A438079组(DNP+A438079)、DNP加鞘内注射生理盐水组(DNP+NS,NS表示生理盐水),每组6只。实验内容:实验大鼠血糖和体重的测定;通过行为学检测各组实验大鼠机械痛敏与热痛敏的变化;通过实时荧光定量PCR(q PCR)、蛋白印迹(western blot)、免疫荧光双标(double-labeled immunofluorescence)检测大鼠DRG中TRPV1和P2X7受体的表达;采用蛋白印迹方法检测DRG中IL-1β、IL-10等炎性因子以及p-p38、p-ERK1/2信号通路分子的表达;以及利用分子对接研究A438079与P2X7受体和TRPV1的氢键亲和力。结果:1、常规饲料喂养组大鼠空腹血糖及体重无明显差异(p>0.05)。高糖高脂饲料喂养四周后腹腔注射STZ以诱导大鼠成模,DNP组大鼠空腹血糖水平较Control组明显升高(p痛敏和热痛敏较Control组大鼠降低(p0.05);第8周末,鞘内注射P2X7受体拮抗剂A438079的DNP组(DNP+A438079)大鼠的机械痛敏和热痛敏明显高于DNP组(p0.05)。4、蛋白印迹结果表明,与Control组相比,TRPV1和P2X7受体在DNP大鼠DRG中的水平明显升高(p0.05)。5、免疫荧光结果显示,DNP大鼠DRG神经元TRPV1与Neu N和卫星胶质细胞P2X7受体与GFAP的共表达较Control组明显增加(p0.05)。6、蛋白印迹结果表明,与Control组相比,DNP组大鼠DRG中IL-1β蛋白水平明显升高(p0.05)。相反,与Control组相比,DNP组大鼠DRG中IL-10蛋白水平明显降低(p0.05)。7、蛋白印迹结果表明,与Control组相比,DNP组大鼠DRG中p-p38和p ERK1/2蛋白水平明显升高(p0.05)。8、分子对接的结果显示,A438079,即P2X7受体拮抗剂,与P2X7受体之间可形成氢键,但与TRPV1没有氢键结合。结论:P2X7受体参与了TRPV1介导的糖尿病神经病理痛,p38和ERK1/2信号通路涉及其病理生理过程。

关键词：背根神经节 TRPV1 糖尿病神经病理痛卫星胶质细胞神经元 P2X7受体

二氢杨梅素对大鼠海马P2X7受体介导的糖尿病神经病理痛合并抑郁症的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

二氢杨梅素对大鼠海马P2X7受体介导的糖尿病神经病理痛合并抑郁症...

作者：沈钰琳南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:糖尿病神经病理痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病的常见并发症之一,伴有自发性疼痛、知觉过敏和植物神经功能障碍,通常表现为肢体远端特别是下肢皮肤烧灼样疼痛,严重的还可导致焦虑或抑郁样行为。糖尿病有时... 详细信息

研究背景和目的:糖尿病神经病理痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病的常见并发症之一,伴有自发性疼痛、知觉过敏和植物神经功能障碍,通常表现为肢体远端特别是下肢皮肤烧灼样疼痛,严重的还可导致焦虑或抑郁样行为。糖尿病有时会引起抑郁症等大脑认知功能障碍,另一方面抑郁(depression,DP)也是导致糖尿病神经病理痛发展的一个危险因素。当DNP和DP共同发病时,会对患者的生活质量产生极大的影响。P2X受体是ATP门控离子通道家族中的一员,研究表明其可能参与了痛觉信息的调制和传导以及抑郁症的发病。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在神经系统发育中可促进神经元的生长、分化并维持神经元的存活,在海马、基底核及前脑活跃表达,并已证实与抑郁密切相关。二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)可降低糖尿病大鼠血糖血脂,减弱神经损害作用。本课题通过建立糖尿病神经病理性疼痛合并抑郁症模型,研究二氢杨梅素对糖尿病神经病理痛合并抑郁症大鼠海马P2X受体和BDNF的影响及其机制,为临床治疗糖尿病神经病理痛合并抑郁症提供新的实验依据。方法:将实验大鼠随机分为:正常对照组(Control组)、正常+二氢杨梅素组(Control+DHM组)、模型+生理盐水组(DNP+DP组)、模型+二氢杨梅素组(DNP+DP+DHM组)、模型+P2X拮抗剂A438079(DNP+DP+A438079)组。建立糖尿病神经病理痛合并抑郁症模型,通过足底机械痛阈值(MWT)、热痛敏阈值(TWL)、糖水偏好实验(SPT)、强迫游泳不动时间(IMFST)、旷场实验(OFT)观察大鼠行为变化。通过QPCR和蛋白印迹来检测各组大鼠海马中P2X、BDNF、TrkB的表达。采用免疫组化方法观察海马中P2X和BDNF的表达,并通过免疫荧光双标的方法来检测海马中嘌呤受体P2X与GFAP(胶质细胞标记物)共表达的情况。采用ELISA检测各组大鼠血清炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的变化情况。采用蛋白印迹实验检测大鼠海马中ERK1/2及其磷酸化程度的变化。结果:1、造模成功后,模型组大鼠的MWT、TWL、SPT和OFT值与Control组相比显著性降低,IMFST显著升高(p0.05)。2、QPCR结果表明,DNP+DP组海马P2X受体表达较Control组明显升高(p0.05)。3、蛋白印迹结果表明,各组总TrkB表达无统计学意义(p>0.05),与Control组比较,DNP+DP组中P2X的表达水平显著升高(P0.05)。4、免疫组化结果显示,DNP+DP组海马P2X受体的表达较Control组明显升高(p0.05)。5、免疫荧光双标结果表明,DNP+DP组大鼠海马胶质细胞P2X受体和GFAP的共表达增高,二氢杨梅素和A438079能对此起到抑制作用。6、ELISA检测结果表明,DNP+DP组血清TNF-α和IL-1β水平较Control组明显升高(p0.05)。7、采用蛋白印迹方法测量海马中ERK1/2磷酸化程度,结果表明:各实验组中ERK1/2对β-acti

关键词：糖尿病神经病理痛抑郁症二氢杨梅素 P2X7受体脑源性营养因子海马

二氢杨梅素对P2X7受体介导的大鼠糖尿病神经病理痛合并抑郁行为的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

二氢杨梅素对P2X7受体介导的大鼠糖尿病神经病理痛合并抑郁行为的...

作者：关书南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病神经病理痛(Diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病神经病变中危害较大的一个常见并发症,通常表现为下肢远端皮肤烧灼样的疼痛,糖尿病患者的疼痛或神经损伤症状的发生率随年龄和病程增长而升高。严重的DNP还可伴有焦... 详细信息

研究背景:糖尿病神经病理痛(Diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病神经病变中危害较大的一个常见并发症,通常表现为下肢远端皮肤烧灼样的疼痛,糖尿病患者的疼痛或神经损伤症状的发生率随年龄和病程增长而升高。严重的DNP还可伴有焦虑或者抑郁(Depression,DP)。与其它糖尿病并发症相比,DNP是DP的一个比较重要的危险因素,并且可以加重DP的症状,DP和DNP之间存在相互促进病情进展的作用,DNP并发DP严重影响患者生活质量。目前临床尚缺乏针对DNP合并DP有效的治疗药物。P2X是嘌呤能受体家族的成员之一,ATP可通过激活P2X受体产生疼痛,在神经炎症通路中发挥重要作用,并可参与抑郁症状的产生,神经系统的胶质细胞中的P2X受体是DNP及DP共病的重要靶点。二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)具有抗氧化、抗炎等多种药理作用,并可缓解神经损伤。目的:本研究通过建立DNP合并DP大鼠模型,观察DHM对DNP合并DP大鼠的影响,探索其可能的作用机制,拓宽和深化对DHM作用和机制的认识,为防治DNP合并DP探索新方法。方法:将SD大鼠随机分成六组:正常对照组(Control组)、正常和二氢杨梅素组(Control+DHM组)、模型组(DNP+DP组)、模型和二氢杨梅素组(DNP+DP+DHM组)、模型和P2X shRNA组(DNP+DP+P2X shRNA)组、模型和scramble shRNA组(DNP+DP+scramble shRNA)组。建立DNP合并DP大鼠模型,通过足底机械缩足反射阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)、热缩足反射潜伏期(Thermal withdrawl latency,TWL)监测大鼠痛行为的变化,通过糖水偏好实验(Sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(Forced swimming test,FST)和旷场实验(Open-field test,OFT)监测大鼠抑郁行为的变化。通过实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白印迹(Western blot)法来检测各组大鼠背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)以及脊髓(Spinal cord,SPI)中P2X受体、TNF-α和IL-1β的表达。采用免疫组化方法测定各组大鼠DRG以及SPI中P2X受体的表达,并通过免疫荧光双标的方法来检测大鼠DRG以及SPI中P2X受体与GFAP共表达的情况。采用ELISA检测各组大鼠血清中炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达变化情况。采用蛋白印迹法检测大鼠DRG以及SPI中ERK1/2及其磷酸化程度的变化。结果:1、DNP合并DP大鼠模型建立成功,与Control组相比,DNP+DP组大鼠的MWT、TWL、SPT和OFT值显著降低,FST不动时间显著升高(p0.05);DNP+DP组大鼠DRG以及SPI中p-ERK1/2和ERK1/2的比值较Control组显著升高,模型大鼠ERK1/2磷酸化程度显著增强(p痛和抑郁

关键词：糖尿病神经病理痛抑郁症二氢杨梅素 P2X7受体脊髓背根神经节

长链非编码核糖核酸BC168687参与P2X7受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

长链非编码核糖核酸BC168687参与P2X7受体介导大鼠糖尿病神经病理...

作者：刘成龙南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)一般是指长度大于200个核苷酸的RNA,位于细胞核内或胞浆中,无蛋白质编码功能,但以RNA形式在多种层面上调控基因的表达水平,而广泛参与机体多种生理和病理过程。瞬时受体电位通道(Tran... 详细信息

研究背景:长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)一般是指长度大于200个核苷酸的RNA,位于细胞核内或胞浆中,无蛋白质编码功能,但以RNA形式在多种层面上调控基因的表达水平,而广泛参与机体多种生理和病理过程。瞬时受体电位通道(Transient receptor potential channels,TRPs)是一类非选择性阳离子通道蛋白,它至少包括28个不同基因编码的产物,主要负责温度、化学和机械性刺激等感觉的传入。其中TRPV1受体是目前研究最为广泛的非选择性阳离子通道蛋白之一,它可被辣椒素、热、酸和多种内源性物质等激活,主要分布于周围神经系统背根神经节(Dorsal root ganglia,DRG)和三叉神经节(Trigeminal ganglia,TG)的中、小直径神经元。研究表明,TRPV1在急性炎性疼痛模型中可作为前致痛因子,在痛觉产生及痛觉敏感性增强的过程中具有重要作用。P2X受体是以三磷酸腺苷(Adenosine 5’-triphosphate,ATP)为配体的门控离子通道,可表达于卫星胶质细胞(Satellite glial cells,SGCs),并参与介导许多炎症和神经疾病的发生。ATP兴奋P2X受体可导致Na、Ca内流和K外流,实现对胞外信号的传导,引起相应的生物学效应。周围神经系统急性损伤时,受损神经元囊泡中ATP的释放,可激活邻近胶质细胞上的P2X受体,使周围胶质细胞以自分泌或旁分泌的形式释放ATP,使得ATP信号级联放大,促进炎症反应。此外,兴奋P2X受体可增加胶质细胞肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素-1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)等炎症因子的释放从而引发慢性痛。因此,我们推测抑制P2X和TRPV1受体的表达上调可能对缓解糖尿病神经病理痛(Diabetic neuropathic pain,DNP)具有重要意义,长链非编码RNA可能涉及此病理生理过程。目的:本实验应用lncRNA BC168687小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)分别处理高糖高脂(High glucose and high free fatty acid,HGHF)诱导原代培养SGCs损伤模型和链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导DNP大鼠动物模型,研究lncRNA BC168687参与P2X和TRPV1受体介导的DNP病理生理过程。方法:1、细胞实验。本实验通过构建HGHF诱导原代培养SGCs损伤模型,检测lncRNA BC168687 siRNA细胞转染后细胞相关指标变化。实验分组:正常组(Control)、HGHF细胞损伤模型组(HGHF)、HGHF细胞损伤模型加lncRNA BC168687 siRNA处理组(HGHF+BCsi)及HGHF细胞损伤模型加随机干扰siRNA阴性对照组(HGHF+NCsi)。实验内容:(1)小干扰的筛选;(2)实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测各组细胞P2X mRNA表达水平;(3)蛋白印迹方法(Western blot,WB)检测各组细胞P2X蛋白表达变化;(4)免疫荧光双标法检测各组细胞P2X和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)荧光强度;(5)荧光素-荧光素酶法检测各组细胞培养液ATP水平;(6)硝酸还原酶法检测各组细胞培养液一氧化氮(Nitric oxide,NO)水平;(7)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测各组细胞内ROS水平;(8)WB检测各组细胞中细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化蛋白表达水平变化。2、动物实验。本实验首先建立STZ诱导DNP大鼠模型,然后检测鞘内注射lncRNA BC168687si RNA后大鼠的相关指标变化。实验分组:正常组(Control)、DNP大鼠模型组(DNP)、DNP大鼠模型加lncRNA BC168687 siRNA处理组(DNP+BCsi)及DNP大鼠模型加随机干扰siRNA阴性对照组(DNP+NCsi)。实验内容:(1)血糖测定;(2)动物行为学测定;(3)QPCR检测各组大鼠DRG中P2X和TRPV1 mRNA表达水平;(4)WB检测各组大鼠DRG中P2X和TRPV1蛋白表达水平;(5)免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测各组大鼠DRG中TRPV1受体的表达变化;(6)免疫荧光双标法检测各组大鼠DRG中P2X受体和GFAP荧光强度;(7)酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunoso

关键词：长链非编码核糖核酸BC168687 P2X7受体 TRPV1受体糖尿病神经病理痛

蛇床子素及长非编码核糖核酸UC.360+短发夹RNA对P2X受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

蛇床子素及长非编码核糖核酸UC.360+短发夹RNA对P2X受体介导大鼠...

作者：袁辉龙南昌大学

学位级别：硕士

研究背景:国际糖尿病联盟数据显示,糖尿病(Diabetes mellitus,DM)已经成为了一种全球流行病,尤其是在发展中国家。糖尿病神经病理痛(Diabeticneuropathic pain,DNP)是糖尿病中最为常见的一种并发症,经常表现出神经病理性疼痛的特征。背... 详细信息

研究背景:国际糖尿病联盟数据显示,糖尿病(Diabetes mellitus,DM)已经成为了一种全球流行病,尤其是在发展中国家。糖尿病神经病理痛(Diabeticneuropathic pain,DNP)是糖尿病中最为常见的一种并发症,经常表现出神经病理性疼痛的特征。背根神经节(Dorsal root ganglia,DRG)属于初级感觉神经节,DRG主要是由神经元胞体以及围绕在神经元周围的卫星胶质细胞(SGCs)组成。已有研究表明DNP发病时DRG感觉神经元的功能出现改变,其中最重要的是离子通道性能的异常改变,神经元上的嘌呤受体对ATP的敏感性增强,从而产生慢性疼痛。但最近的研究表明围绕在神经元周围的卫星胶质细胞也参与了各种慢性疼痛的过程。嘌呤P2受体分为离子通道型受体(P2X受体)和G蛋白偶联型受体(P2Y受体)。在DRG中,P2X受体主要表达在SGCs,而P2X受体在神经元以及SGCs上都有表达。本实验室前期研究已经发现,P2X受体参与了多种神经病理性疼痛的过程,但是P2X受体亚型中P2X、P2X受体怎样参与DNP的病理发生过程尚不清楚。我们推测在DRG中异常的SGCs-神经元间相互作用可能与DNP的病理机制相关。蛇床子素是一种天然中药单体,具有抗炎、抗氧化、降血压等作用。已有研究表明,蛇床子素能够缓解小鼠的糖尿病症状,临床上发现它能够抑制神经性疼痛和伤害性反应。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)以前一直是被人们所忽略的无蛋白编码功能的“垃圾”片段,但现在的研究发现它在多个层面上参与生命过程的调控,并与多种神经病理性疼痛密切相关。本课题通过建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,探究蛇床子素中药单体药物以及lncRNA UC.360+短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)对DRG中P2X、P2X受体介导Ⅱ型糖尿病神经病理性疼痛的作用及其机制。目的:(1)建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,探索蛇床子素中药单体对大鼠DRG中卫星胶质细胞P2X受体介导的糖尿病神经病理性疼痛的作用及其可能机制。(2)通过建立大鼠Ⅱ型糖尿病动物模型,观察lncRNA UC.360+短发夹RNA对大鼠背根神经节神经元P2X受体介导的Ⅱ型糖尿病神经病理痛的作用及机制。方法:(1)选择180-200g Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,经高糖高脂喂食4周后,通过小剂量STZ诱导建立大鼠Ⅱ型糖尿病动物模型。实验随机分组:正常组(Ctrl)、模型组(DM)、模型加P2X拮抗剂5-BDBD组(DM+5-BDBD)、模型加蛇床子素组(DM+osthole)、模型加二甲基亚砜溶剂对照组(DM+DMSO)。动物成模后,给予DM+osthole组大鼠连续腹腔注射蛇床子素2周,而DM+DMSO组大鼠续腹腔注射等剂量的生理盐水及DMSO溶剂,DM+5-BDBD组鞘内注射P2X拮抗剂5-BDBD。分别检测各组大鼠机械痛阈值和热痛阈值,实时定量荧光PCR(Quantitative Real-time PCR,Q-PCR)检测P2Xm RNA的表达,蛋白印迹(WB)检测各组大鼠P2X受体、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)、肿瘤坏死因子-α受体(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)蛋白表达变化以及p38 MAPK磷酸化水平,免疫荧光双标检测各组大鼠DRG中P2X受体与GFAP的共表达程度。(2)建立大鼠Ⅱ型糖尿病动物模型。实验随机分组:正常组(Ctrl)、模型组(DM)、模型加lncRNA UC.360+短发夹RNA组(DM+UC.360+shRNA)、模型加乱码(Scramble)RNA(阴性对照,NC短发夹RNA)组(DM+NC shRNA)。应用Q-PCR技术筛选有效的UC.360+shRNA干扰序列。动物成模后,给予DM+UC.360+shRNA组大鼠鞘内注射UC.360+短发夹RNA,而DM+NC shRNA组大鼠鞘内注射等剂量的NC短发夹RNA。分别检测各组大鼠机械痛阈值和热痛阈值以及血糖的变化,Q-PCR检测各组大鼠DRG中P2X m RNA和lncRNA UC.360+的表达,原位杂交(In situ hybridization,ISH)技术检测大鼠DRG中lncRNA UC.360+的表达,RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)检测lncRNA UC.360+与P2X受体相互结合情况,WB技术检测各组大鼠P2X受体、肿瘤坏死因子-α受体(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)蛋白表达变化以及细胞外信号调节激酶1

关键词：糖尿病神经病理痛蛇床子素 P2X4受体 P2X7受体长非编码核糖核酸UC.360+

加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3表达的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

徐州医学院学报 2014年第5期34卷 281-284页

作者：苗蓓周田田邵翠杰徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室江苏徐州221004

目的：观察加巴喷丁（gabapentin， GBP）对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）表达的影响。方法80只成年健康雄性SD大鼠，随机分为正常组（Control 组）、糖尿病神经病理痛组（ DNP组）、生理盐... 详细信息

目的：观察加巴喷丁（gabapentin， GBP）对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）表达的影响。方法80只成年健康雄性SD大鼠，随机分为正常组（Control 组）、糖尿病神经病理痛组（ DNP组）、生理盐水＋DNP组（ SC＋DNP组）和加巴喷丁＋DNP组（ GBP＋DNP组），每组20只。采用链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病神经病理痛大鼠模型；SC＋DNP组和GBP＋DNP组于STZ注射15天起分别腹腔注射生理盐水或GBP 50 mg/kg，1次/d，连续7天；采用行为学测试测定STZ注射前1天及注射后3、7、10、14、21、28天大鼠缩足反射机械刺激阈值（PWMT）和缩足反射热辐射潜伏期（PWTL），免疫组化方法检测大鼠背根神经节（DRG）中p-STAT3的表达。结果与Control 组比较， DNP组PWMT〔（3．8±0．84） g〕降低、PWTL〔（5．9±0．94） s〕缩短，DRG中p-STAT3蛋白的表达上调（P＜0．05）；与DNP组比较， SC＋DNP组大鼠在腹腔注射生理盐水后，PWMT〔（4．03±0．5） g〕、PWTL〔（6．2±0．7） s〕和p-STAT3蛋白的表达无明显改变（P＞0．05）；与DNP组和SC＋DNP组比较， GBP＋DNP组PWMT〔（8．4±0．87） g〕升高，PWTL〔（10±1．2） s〕延长， DRG中p-STAT3蛋白的表达下调（P＜0．05）。结论 GBP能减轻大鼠糖尿病神经病理痛，其机制可能与抑制p-STAT3的表达水平有关。

关键词：糖尿病神经病理痛加巴喷丁背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3 p-STAT3