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洋葱及其活性成分蒜氨酸对糖基化反应的抑制研究

洋葱及其活性成分蒜氨酸对糖基化反应的抑制研究

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作者：梁哲瑞沈阳农业大学

学位级别：硕士

洋葱是我国主栽蔬菜之一,其主要成分有黄酮类化合物、含氮化合物、含硫化合物、多糖以及前列腺素A等活性物质,具有良好的降低血压、抗衰老等功效。它含有的活性成分蒜氨酸,又称S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜(SACS),为洋葱等葱属植物中特有的... 详细信息

洋葱是我国主栽蔬菜之一,其主要成分有黄酮类化合物、含氮化合物、含硫化合物、多糖以及前列腺素A等活性物质,具有良好的降低血压、抗衰老等功效。它含有的活性成分蒜氨酸,又称S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜(SACS),为洋葱等葱属植物中特有的非蛋白含硫氨基酸,具有抗氧化、清除自由基、抗癌、降血压等功效。本研究以洋葱及其含硫化合物蒜氨酸为研究对象,通过粉碎法、冷冻干燥法等对紫皮洋葱和黄皮洋葱进行预处理;利用离子交换树脂提取分离与纯化洋葱活性成分蒜氨酸;采用UPLC-MS/MS法定性定量分析蒜氨酸;采用ABTS法与FRAP法对蒜氨酸的总抗氧化能力进行测定。同时,在葡萄糖-牛血清蛋白(Glc-BSA)、葡萄糖-赖氨酸(Glc-Lys)模拟体系中对不同浓度的紫皮洋葱和黄皮洋葱以及不同浓度的蒜氨酸对美拉德产物的抑制能力进行比较。主要的方法与结果如下:(1)利用离子交换树脂提取、分离与纯化洋葱中活性成分蒜氨酸,并采用UPLC-MS/MS法对蒜氨酸进行定量分析,确定蒜氨酸百分含量为53.48%。采用ABTS与FRAP两种方法测定蒜氨酸的总抗氧化能力,结果表明,10mg/mL的蒜氨酸清除自由基的能力相当于13.98mmol/L的Trolox或14.63mmol/L的FeSO。(2)对比分析紫皮洋葱和黄皮洋葱对Glc-Lys体系中荧光性AGEs、戊糖素、薛夫碱、乙二醛(GO)、5-羟甲基糠醛(HMF)的抑制效果,洋葱浓度分别为20,40,50,60,80mg/mL,60℃下反应40h,每8h取样一次。结果表明,洋葱的最佳添加浓度为20mg/mL,该浓度洋葱对上述产物整体抑制率分别为20.99%,15.49%,14.02%,8.45%,22.18%,其中紫皮洋葱的整体抑制效果明显优于黄皮洋葱(p糖基化反应产物、类黑精和N-羧甲基赖氨酸(CML)的抑制作用,浓度分别为0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/mL,60℃下反应40h,每8h取样一次。结果表明,0.5mg/mL蒜氨酸对上述其他反应产物的抑制率分别高于氨基胍11.32%,-8.07%,3.46%,2.41%,1.44%,12.03%,7.36%,洋葱蒜氨酸的平均抑制效果高于氨基胍,仅对戊糖素的抑制效果低于氨基胍(p<0.05)。

关键词：蒜氨酸氨基胍糖基化反应产物抑制

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负载天然活性物质的糖基化蛋白—多酚Pickering乳液递送体系的构建及稳定性研究

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作者：王麒武汉轻工大学

学位级别：硕士

蛋白基Pickering乳液是选用安全无毒、生物相容性好的蛋白质大分子颗粒稳定油水界面的一种乳液,其不但具有传统乳液的功能特性,更具有高稳定性,粒度分布可控、低毒性和不含表面活性剂等特点,可以广泛应用于生物医学、食品等领域。蛋白基... 详细信息

蛋白基Pickering乳液是选用安全无毒、生物相容性好的蛋白质大分子颗粒稳定油水界面的一种乳液,其不但具有传统乳液的功能特性,更具有高稳定性,粒度分布可控、低毒性和不含表面活性剂等特点,可以广泛应用于生物医学、食品等领域。蛋白基Pickering乳液稳定性及功能特性与许多因素有关,而蛋白颗粒的稳定性尤其关键,由于蛋白在酸热条件下易发生变性、沉淀或者凝胶化其在Pickering乳液稳定性和Pickering乳液递送药物体系中的应用有限。为构建稳定性高、应用范围广的蛋白基Pickering乳液,本文在实验室的前期建立的糖基化反应可以有效改善蛋白功能特性的研究基础上,采用乳清蛋白分离物与乳糖进行共价结合形成酸热稳定性的糖基化反应产物,利用表没食子儿茶素没食子酸酯调控蛋白复合物的粒径大小,制备粒径可控的糖基化蛋白-多酚纳米复合物构建Pickering乳液递送体系,包埋天然疏水性活性成分,并对其体外稳定性进行评估,本论文的主要工作内容如下:1.糖基化蛋白-多酚纳米颗粒的制备及表征。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)、傅里叶红外光谱以及内源荧光光谱对蛋白-多酚复合物进行表征,判断蛋白与EGCG的结合方式,同时通过粒径电位分析,优化蛋白与EGCG结合的比例,溶液pH环境,结果表明,糖基化反应产物与E GCG以氢键以及疏水相互作用进行结合,最佳结合比例为蛋白:EGCG为1:1(w/w),溶液pH为3.0,制备得到粒径约为110nm的糖基化蛋白-多酚纳米颗粒,并使用原子力显微镜对优化的纳米颗粒进行微观形貌表征。***乳液的制备及稳定性分析。利用光学显微镜、荧光共聚焦显微镜等技术手段对不同油相质量分数制备的Pickering乳液进行宏观和微观表征,并对Pickering乳液进行储藏稳定性、热稳定性分析,结果表明糖基化蛋白-EGCG纳米颗粒稳定的Pickering乳液具有良好的稳定性,能够有效抑制乳液的絮凝、沉淀。3.选用最佳的乳液条件,分别包埋姜黄素和β-胡萝卜素,分别探究包埋两种活性物质下乳液的稳定性,以及活性物质在不同体外模拟环境中的稳定性和保留率,结果表明通过糖基化蛋白-多酚纳米颗粒稳定的Pickering对姜黄素和胡萝卜素有良好的保护作用,明显提高了其稳定性。体外模拟胃液环境消化实验表明,该乳液能够在胃液等恶劣环境下保持稳定。通过模拟肠液对Pickering乳液的消化发现糖基化蛋白-多酚纳米颗粒稳定的乳液消化最慢,活性物质的保留率最高。综上,我们构建了一种同时负载了亲/疏水性天然活性成分的Pickering乳液递送体系,糖基化的蛋白-EGCG纳米颗粒构建的Pickering乳液确实能提高姜黄素和β-胡萝卜素等脂溶性活性成分的稳定性及保留率。为天然活性物质在乳液递送体系的应用提供了一些理论上的依据,以期能够拓宽蛋白基Pickering乳液体系在食品工业中的应用。

关键词：乳清分离蛋白糖基化反应产物表没食子儿茶素没食子酸酯 Pickering乳液包埋稳定性保留率

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