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十氯酮诱导氧化应激损伤对秀丽隐杆线虫精细胞影响

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中国公共卫生 2018年第8期34卷 1106-1109页

作者：戴抒豪简子海刘冉浦跃朴尹立红东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室江苏南京210009

目的探讨十氯酮对雄性秀丽隐杆线虫精细胞的毒性效应及其与氧化应激损伤作用的关系。方法幼虫1期线虫分别暴露于4个剂量十氯酮(0.02、0.20、2.00、20.00μg/L)、对照组(M9溶液),48 h后,计数后代数目和观测世代时间;通过二氢荧光素乙酰乙... 详细信息

目的探讨十氯酮对雄性秀丽隐杆线虫精细胞的毒性效应及其与氧化应激损伤作用的关系。方法幼虫1期线虫分别暴露于4个剂量十氯酮(0.02、0.20、2.00、20.00μg/L)、对照组(M9溶液),48 h后,计数后代数目和观测世代时间;通过二氢荧光素乙酰乙酸(CM-H2DCFDA)探针法检测线虫体内活性氧(ROS)水平;荧光显微镜观测线虫远端顶细胞(DTC)荧光强度;二脒基苯基吲哚(DAPI)染色后计数性腺有丝分裂区生殖细胞数;显微镜明场下观测线虫精子畸形率和体外活化率。结果十氯酮高剂量组秀丽隐杆线虫后代数目为(255.00±13.72)个,明显低于对照组(335.60±21.31)个;十氯酮高剂量组秀丽隐杆线虫世代时间为(69.60±1.96)h,长于对照组(55.80±1.94)h,差异有统计学意义(P细胞荧光强度降低(P细胞数目为(87.90±3.75)个、精子畸形率为(12.70±1.16)%、体外活化率为(77.00±9.82)%,20.00μg/L十氯酮组线虫有丝分裂区生殖细胞数目[(47.90±5.42)个]下降、精子畸形率[(84.00±7.29)%]明显上升、体外活化率[(8.70±2.41)%]明显下降。结论氧化应激损伤可能是十氯酮暴露后引发生殖毒性作用的重要机制。

关键词：十氯酮秀丽隐杆线虫氧化应激生殖毒性精细胞

基于鼠精细胞的味觉阻抗传感器用于苦味物质检测的研究

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传感技术学报 2016年第12期29卷 1785-1790页

作者：田玉兰苏凯麒邱先鑫方佳如秦臻李蓉王平浙江大学生物传感器国家专业实验室生物医学工程教育部重点实验室生仪学院杭州310027

本文设计了一种基于雄鼠精细胞的细胞阻抗传感器用于苦味物质的特异性检测。雄鼠精细胞内含有大量T2Rs受体(G蛋白偶联受体)可以对苦味物质产生特异性响应,苦味受体被苦味物质激活后产生的响应会引起细胞形态骨架的变化,从而可以被细胞... 详细信息

本文设计了一种基于雄鼠精细胞的细胞阻抗传感器用于苦味物质的特异性检测。雄鼠精细胞内含有大量T2Rs受体(G蛋白偶联受体)可以对苦味物质产生特异性响应,苦味受体被苦味物质激活后产生的响应会引起细胞形态骨架的变化,从而可以被细胞阻抗传感器检测。本文探索了实验的最佳细胞密度,检测了苯硫脲和奎宁两种常见的苦味物质的响应,苯硫脲检测范围为10μmol/L^200μmol/L,检出限为4μmol/L;奎宁检测范围为62.5μmol/L^1 000μmol/L,检出限为40μmol/L。传感器阻抗值增量与苦味物质浓度呈一定的线性相关性。此外,论文对该味觉传感器的特异性进行了测试分析,表明了基于细胞传感器的检测方法为代替动物和人的苦味测试提供了一种可能的新的手段。

关键词：苦味检测细胞阻抗传感器精细胞

起始密码子上游核苷酸影响拟南芥精细胞翻译起始效率的研究

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起始密码子上游核苷酸影响拟南芥精细胞翻译起始效率的研究

作者：张莉西北大学

学位级别：硕士

翻译起始对于蛋白质合成效率至关重要。已有研究结果表明:在动物细胞中,翻译起始在优化背景——Kozak序列存在时效率最高。但在植物细胞中,起始密码子上游的核苷酸影响翻译起始效率的细节仍有待进行深入的研究。本研究以拟南芥（Arabido... 详细信息

翻译起始对于蛋白质合成效率至关重要。已有研究结果表明:在动物细胞中,翻译起始在优化背景——Kozak序列存在时效率最高。但在植物细胞中,起始密码子上游的核苷酸影响翻译起始效率的细节仍有待进行深入的研究。本研究以拟南芥（Arabidopsis thaliana）精细胞为实验材料,通过对其起始密码子AUG上游的四个热点核苷酸进行突变,评估了不同位置上的核苷酸对翻译起始效率的影响。此外,本研究还探讨了在优化及劣化背景下,翻译能否起始于非AUG起始密码子处。获得的主要结果如下:已有结果表明碱基A在起始密码子AUG上游-1～-4中出现频率最高。在起始密码子AUG上游为劣化的背景下,本研究构建了四个-1、-2、-3、-4位分别为碱基A的载体,通过农杆菌介导的遗传转化,获得了各自载体对应的转基因植株,并用荧光显微镜对其进行了定量观察。统计结果显示:与劣化背景相比,各个位置上的核苷酸对翻译起始效率的提高存在不同的影响;其中,-1位对翻译起始的效率影响最小,-2～-3位次之,-4位影响最大。在Kozak序列存在时,动物细胞中的翻译能起始于非AUG起始密码子处。但在植物细胞中,这一问题仍未被调查过。在起始密码子AUG上游为优化（-1～-4位为A）的背景下,本研究构建了四个将起始密码子AUG突变为AGG,ACG,CUG,AUC的载体,并获得了各自载体对应的转基因植株。来自荧光显微镜的观察结果表明:所有这四个转基因系的精细胞中都存在GFP蛋白的表达。这些结果提示在优化背景下翻译仍能起始于AGG,ACG,CUG,AUC密码子处。在起始密码子AUG上游为劣化的背景下,本研究也构建了四个将起始密码子AUG突变为AGG,ACG,CUG,AUC的载体,并获得了各自载体对应的转基因植株。荧光显微镜观察结果表明:这四个转基因系的精细胞中都不存在GFP蛋白的表达。这表明在上游为劣化的背景下翻译不能起始于AGG,ACG,CUG,AUC密码子处。本研究揭示了起始密码子AUG上游的四个热点核苷酸对拟南芥精细胞中的翻译起始效率存在不同的影响;再者,本研究还表明在优化背景下翻译能够起始于非AUG起始密码子处,但在劣化背景下,翻译却无法起始于非AUG起始密码子处。这些研究结果表明精细胞在翻译起始调控方面并不存在异于体细胞的机制,从而有助于我们对精细胞发育的理解。

关键词：热点核苷酸非AUG起始密码子翻译起始调控精细胞拟南芥

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

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法医学杂志 2012年第2期28卷 112-114,119页

作者：李冯锐周懿舒朱兰卉崔洪刚王保捷丁梅庞灏中国医科大学法医学院法医血清教研室辽宁沈阳110001 包头医学院法医学系内蒙古包头014060

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、... 详细信息

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。

关键词：法医遗传学精细胞特异性岩藻糖基转移酶类

变黑白头翁提取物降低亚砷酸盐对小鼠精细胞的毒性(英文)

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中西医结合学报 2012年第12期10卷 1433-1442页

作者： Asmita Samadder Jayeeta Das Sreemanti Das Durba Das Arnab De Kakali Bhadra Anisur Rahman Khuda-Bukhsh Cytogenetics and Molecular Biology Laboratory Department of Zoology University of Kalyani Entomology Laboratory Department of Zoology University of Kalyani

目的:研究变黑白头翁提取物降低亚砷酸盐对小鼠精细胞毒性的作用。方法:给予实验小鼠亚砷酸钠(20mg/kg每日),并分别在第30、60、90天对小鼠进行检测。亚砷酸盐中毒小鼠被分为2组,其中一组给予变黑白头翁提取物(35mg/kg),另一组给予85%... 详细信息

目的:研究变黑白头翁提取物降低亚砷酸盐对小鼠精细胞毒性的作用。方法:给予实验小鼠亚砷酸钠(20mg/kg每日),并分别在第30、60、90天对小鼠进行检测。亚砷酸盐中毒小鼠被分为2组,其中一组给予变黑白头翁提取物(35mg/kg),另一组给予85%乙醇。通过检测小鼠精细胞凋亡标志蛋白CYP1A1、p53及caspase3的活性,确定细胞及DNA的损伤情况,并测定睾丸毒性标志物的水平。通过圆二色光谱仪及熔化温度数据检测变黑白头翁提取物与DNA的相互作用情况。结果:亚砷酸盐中毒小鼠的所有细胞凋亡标志蛋白及睾丸毒性标志物的水平均有所上升,而经变黑白头翁提取物治疗的小鼠上述各项指标均降低或恢复至正常水平。变黑白头翁提取物与DNA相互作用,引起了DNA结构和构象的变化。结论:变黑白头翁提取物可作为砷中毒引起的生殖功能损害的治疗药物给予研究和开发。

关键词：白头翁属植物提取物亚砷酸盐类细胞凋亡精细胞小鼠

鼠精细胞味觉传感器及其在苦味检测中的应用研究

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鼠精细胞味觉传感器及其在苦味检测中的应用研究

作者：田玉兰浙江大学

学位级别：硕士

苦味感受作为人们的一种防御机制,在人的生活中起到很重要的作用,如今苦味评价广泛应用于食品药品中,用于检测毒性,研究苦味掩味剂等方面。由于传统的人尝味的方法具有很大的不确定性,近年来基于化学和生物的电子舌得到广泛的发展,然而... 详细信息

苦味感受作为人们的一种防御机制,在人的生活中起到很重要的作用,如今苦味评价广泛应用于食品药品中,用于检测毒性,研究苦味掩味剂等方面。由于传统的人尝味的方法具有很大的不确定性,近年来基于化学和生物的电子舌得到广泛的发展,然而存在用于检测的敏感性膜检测的单一性和细胞敏感元件较难获取等缺陷。味觉细胞是通过G蛋白偶联受体（GPCR）来检测苦味的,研究发现小鼠精细胞中含有大量的苦味基因的表达,可以用来检测苦味化合物,当苦味化合物激活GPCR后,一系列的级联反应会引起细胞骨架的变化以及胞内钙离子浓度的变化,细胞阻抗传感器可以检测出GPCR引起的细胞形态的变化,利用钙离子荧光探针可以检测胞内的钙离子的浓度变化。基于以上,本文详细研究了检测苦味化合物浓度的方法。本论文的主要工作和创新点如下:1.深入研究了细胞阻抗传感器及其检测系统的设计和应用本文研究了细胞阻抗传感器的细胞阻抗模型,阻抗传感器检测细胞的状态的原理,阻抗传感器在GPCR检测中的应用。研究了细胞阻抗传感器芯片的设计和加工流程,以及叉指电极的尺寸选取,接着介绍了整个阻抗传感器系统的构成。为后续实验提供检测系统。2.设计了基于鼠精细胞的阻抗传感器,提出了检测苦味化合物的新方法。本文构建了一种基于鼠精细胞的阻抗传感器系统用于检测苦味化合物。利用鼠精细胞作为初级敏感元件,阻抗传感器作为换能元件来检测苦味物质。利用该传感器检测了三种常见的化合物,该方法对苯硫脲线性检测浓度范围为10-200μmol/L,检测限为4μmol/L;奎宁检测线性范围为62.5-1000μmol/L,检测限为40μmol/L。苯甲地那铵的线性范围为50-1000μmol/L,检测限为13.5μmol/L,并且对苦味检测有良好的特异性。相对于传统的利用重组细胞来检测苦味物质来说,原代的精细胞具有获取简单,数量大的优势,并且阻抗传感器可以对细胞的变化进行实时无损的监测,操作简单,在苦味评价方面具有很大的应用潜力。3.提出结合鼠精细胞的流式细胞仪和钙离子荧光探针检测苦味物质的方法本文提出一种用鼠精细胞作为初级敏感元件,利用Fluo4-AM和流式细胞仪来检测胞内钙离子浓度从而检测苦味化合物浓度的方法。该方法对苯硫脲的线性检测浓度范围为25μmol/L-1000μmol/L,检测限为25.1μmol/L;奎宁的检测线性范围为50μmol/L-20000μmol/L,检测限为5.7μmol/L。苯甲地那铵的线性范围为50μmol/L-4000μmol/L,检测限为15.6μmol/L。并且对苦味检测有良好的特异性。该方法与传统的钙离子荧光成像方法相比,具有操作简单,容易定量计算的优点,具有一定的应用前景。

关键词：苦味检测细胞阻抗传感器精细胞钙离子检测

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拟南芥精细胞中的翻译起始调控研究

拟南芥精细胞中的翻译起始调控研究

作者：曹媛西北大学

学位级别：硕士

翻译是核糖体将mRNA所携带的遗传信息转换为蛋白质的过程,包含翻译起始、翻译延伸和翻译终止三个步骤。翻译起始是43S起始前复合物(PIC)通过扫描机制寻找起始密码子AUG并在此启动蛋白质合成的过程,是调控蛋白合成效率进而调节蛋白丰度... 详细信息

翻译是核糖体将mRNA所携带的遗传信息转换为蛋白质的过程,包含翻译起始、翻译延伸和翻译终止三个步骤。翻译起始是43S起始前复合物(PIC)通过扫描机制寻找起始密码子AUG并在此启动蛋白质合成的过程,是调控蛋白合成效率进而调节蛋白丰度的关键步骤。在动物细胞中,已有的研究表明:翻译起始在优化背景——Kozak序列存在时效率最高而且不受翻译起始因子eIF1的调控;而在非优化背景下,其起始效率变低并受到翻译起始因子eIF1的负调控。不像其它细胞,被子植物(Angiosperms)的精细胞并不独立存在,而是包含于营养细胞之中。这种特殊的“细胞包含细胞”的结构是否会使得精细胞有异于普通细胞的翻译起始调控机制?这个问题目前并未被研究过。本研究利用模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)调查了如下4个问题:(1)精细胞mRNA在起始密码子AUG附近的核苷酸组成有无特殊性?(2)精细胞中的翻译起始效率是否受到起始密码子AUG附近核苷酸序列的影响?如果影响,是受AUG上游还是AUG下游核苷酸序列的影响?(3)AUG附近核苷酸序列中的“热点”是否调控翻译起始的效率?(4)翻译起始因子eIF1在精细胞中是否影响翻译起始的效率?对这些问题的研究使我们获得了如下结果:(1)精细胞mRNA在起始密码子AUG附近的核苷酸组成并无特殊性。通过分析1000个精细胞中及1000个一号染色体上基因的mRNA序列,我们发现,两者在AUG上下游的15～18个核苷酸都偏向为A,其出现的概率大约都在30%左右,U次之,而C出现的概率最低,约为18%。其中,-1～-4位,A出现的概率最高,为42%～50%;同时,+4位偏向性呈现为G,出现概率大约为57%。(2)精细胞中的翻译起始效率显著地受到起始密码子AUG上游核苷酸序列的影响,而较小地受到AUG下游核苷酸序列的影响。通过构建不同核苷酸背景且精细胞特异表达的融合基因,我们观察到:当AUG上游18个核苷酸序列为最优序列时,其翻译起始的效率是最差核苷酸背景下的9倍;同时,当AUG下游15个核苷酸序列为最优序列时,其翻译起始的效率是最差核苷酸背景下的2倍。这些结果首先表明精细胞中起始密码子AUG附近的核苷酸序列能显著影响翻译起始的效率,且这种影响主要归因于AUG上游序列。(3)热点核苷酸在翻译起始效率中扮演关键的角色。在最差核苷酸背景下,当-1～-4位的核苷酸突变为A时,翻译起始效率显著提高,为上游最优背景下效率的79%。这表明-1～-4位的热点在翻译起始调控中发挥重要作用。在普通核苷酸背景下(AUG上下游核苷酸整体序列未经过人为突变),当-1～-4位的核苷酸突变为A时,翻译起始效率是-1～-4位核苷酸突变为低频核苷酸时效率的4倍,这也进一步说明了-1～-4位的热点在翻译起始调控中起重要的作用。(4)翻译起始因子eIF1在精细胞中并不影响翻译起始的效率。通过单精细胞RT-PCR,我们分离到精细胞表达的ateIF1。在最差核苷酸背景下,无论是过表达ateIF1还是敲降ateIF1,翻译起始效率都不受影响。这一结果暗示在精细胞中翻译起始因子eIF1并不影响翻译起始的效率。这些研究结果首次揭示了被子植物精细胞中AUG上游核苷酸序列能够显著影响翻译起始的效率,且这种影响主要归因于-1～-4位的核苷酸;同时,翻译起始因子eIF1在精细胞中并不参与翻译起始的调控,对于我们在细胞学水平上理解精细胞的发育提供了新的知识。

关键词：拟南芥精细胞翻译起始调控翻译起始因子eIF1 荧光强度

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被子植物生殖细胞与精细胞的分离方法

植物学报 2014年第3期49卷 229-245页

作者：鲁云龙魏丽勤戴绍军王台东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心东北油田盐碱植被与重建教育部重点实验室哈尔滨150040 中国科学院植物研究所植物分子生理学重点实验室北京100093

开花植物精细胞的发育经历一个独特的后减数分裂过程,在此过程中每个花粉母细胞减数分裂的产物——小孢子经不对称有丝分裂产生1个大的营养细胞和1个小的生殖细胞,随后生殖细胞经过正常的有丝分裂产生2个精细胞。近几年,随着高通量组学... 详细信息

开花植物精细胞的发育经历一个独特的后减数分裂过程,在此过程中每个花粉母细胞减数分裂的产物——小孢子经不对称有丝分裂产生1个大的营养细胞和1个小的生殖细胞,随后生殖细胞经过正常的有丝分裂产生2个精细胞。近几年,随着高通量组学技术的不断完善,利用组学技术比较分析生殖细胞和精细胞的分子特征、揭示决定精细胞命运与功能以及受精识别的重要分子已成为植物生殖生物学备受关注的课题。开展此项研究的关键是建立能获得大量高纯度的生殖细胞与精细胞分离纯化技术。该文综述了被子植物生殖细胞和精细胞分离方法的主要研究进展,分析了关键方法的特点和要点以及不同方法之间的差异和共性,以期为相关领域的研究人员提供借鉴。

关键词：生殖细胞精细胞渗透冲击密度梯度离心分离纯化

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微流控芯片技术在精细胞研究中的应用

分析测试学报 2014年第4期33卷 483-488页

作者：杨晖杨帆曹继刚陈缵光河南科技大学医学院河南洛阳471003 湖北中医药大学检验学院湖北武汉430065 湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065 中山大学药学院广东广州510006

具有多维网络微通道结构的微流控芯片可在微纳尺度上集成细胞进样、培养、分选、裂解和分离检测等多种功能单元,不仅在尺寸上与精细胞匹配,还可为精细胞提供相对封闭的接近生理状态的生长微环境。研究者已利用此系统的层流、微通道特殊... 详细信息

具有多维网络微通道结构的微流控芯片可在微纳尺度上集成细胞进样、培养、分选、裂解和分离检测等多种功能单元,不仅在尺寸上与精细胞匹配,还可为精细胞提供相对封闭的接近生理状态的生长微环境。研究者已利用此系统的层流、微通道特殊几何结构等特点对精子进行了多方面研究。该文对微流控芯片技术在精细胞的培养、分选、胞内成分分析和人工授精中的应用进行了综述,介绍了用于精细胞研究的多种微流控芯片系统,并讨论了精细胞分选的各种方法。

关键词：微流控芯片精细胞培养分选成分分析人工授精