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抗氧化中药多糖在家畜精液保存中的应用研究进展

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中国畜牧杂志 2023年第1期59卷 83-88页

作者：王赫川李天峰张涵张群王骞黄大鹏李雁冰魏国生李井春黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

活性氧(ROS)是造成家畜精液保存过程中质量下降的主要因素之一,ROS的过量产生会导致家畜精子发生不可逆损伤,如精子活力降低、质膜及顶体受损、脱氧核糖核酸(DNA)完整性降低等,最终导致母畜受精率不佳。在畜牧生产实践中常通过向精液稀... 详细信息

活性氧(ROS)是造成家畜精液保存过程中质量下降的主要因素之一,ROS的过量产生会导致家畜精子发生不可逆损伤,如精子活力降低、质膜及顶体受损、脱氧核糖核酸(DNA)完整性降低等,最终导致母畜受精率不佳。在畜牧生产实践中常通过向精液稀释液中添加各类抗氧化剂以减缓精子氧化应激,多糖作为一类优秀的天然抗氧化物质广泛存在于自然界中,中药多糖具有效果好、无残留、毒副作用低等特点,在家畜精液保存中的应用日益广泛。本文就抗氧化中药多糖在家畜精液保存中的应用研究进展进行综述,为进一步深入研究植物多糖抗氧化效果提供科学依据。

关键词：中药多糖抗氧化精液保存研究进展

精液保存和优化处理方法对精子DNA完整性的影响

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中华男科学杂志 2016年第5期22卷 432-436页

作者：郑毅春梁嘉颖杜鹏莫国柱汪李虎刘风华广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科广东广州510010

目的：探讨不同精液保存和处理方法对精子DNA完整性的影响。方法：筛选2015年1~12月就诊的100例精液正常志愿者,将每例志愿者的精液混匀后分别对其进行不同的保存和优化处理;保存方法包括直接冷冻法、试剂冷冻法、室温保存4 h和24 h等,... 详细信息

目的：探讨不同精液保存和处理方法对精子DNA完整性的影响。方法：筛选2015年1~12月就诊的100例精液正常志愿者,将每例志愿者的精液混匀后分别对其进行不同的保存和优化处理;保存方法包括直接冷冻法、试剂冷冻法、室温保存4 h和24 h等,优化处理方法包括简单洗涤法、直接上游法和非连续密度梯度离心法。保存和处理后均采用精子染色体扩散实验（SCD）分析其精子DNA碎片指数（DFI）;优化处理各组继续培养24 h,培养后再分析其精子活动率和DFI。结果：精液保存条件两两组间分析显示,直接冷冻法、试剂冷冻法和室温保存4 h的精子DFI分别为（27.3±6.4）%、（26.9±6.1）%和（24.7±6.8）%,结果无显著性差异（P〉0.05）,而室温保存24 h则显著增加精子DFI[（35.6±9.0）%]（P〈0.05）。与简单洗涤法的精子DFI[（13.7±2.0）%]相比,直接上游法的精子DFI[（9.1±1.3）%]和非连续密度梯度离心法的精子DFI[（8.0±2.5）%]均显著降低（P〈0.05）;再培养24 h后,非连续密度梯度离心法处理的精子DFI[（11.5±4.2）%]最低（P〈0.05）。结论：保存条件和优化处理方法对精子DNA完整性有影响,临床工作中需选取最合适的精液处理方法。

关键词：精液保存精液优化处理 DNA碎片精子染色体扩散实验

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番鸭精液低温液态保存技术的建立和优化

番鸭精液低温液态保存技术的建立和优化

作者：米世克云南农业大学

学位级别：硕士

番鸭的人工授精已经成为繁殖管理的重要手段之一,在生产实践中具有重要作用。通过精液保存技术,可以更好的促进优良种质资源的传播和共享,延长良种公番鸭的使用寿命,减少繁殖成本,提高生产效益。而番鸭精液低温液态保存技术直接决定着... 详细信息

番鸭的人工授精已经成为繁殖管理的重要手段之一,在生产实践中具有重要作用。通过精液保存技术,可以更好的促进优良种质资源的传播和共享,延长良种公番鸭的使用寿命,减少繁殖成本,提高生产效益。而番鸭精液低温液态保存技术直接决定着精液保存效果的优劣。本试验以番鸭精液为研究对象。首先进行4种稀释液的配制(YA-1、YA-2、YA-3和NO-1),把番鸭精液分别以2:1、1:1、1:2的比例稀释在配制的4种稀释液中,置于4℃的环境中连续保存4天。探讨精液低温液态保存过程中,不同成分的稀释液及稀释条件对精子运动性能等表观参数的影响,并进行相关的机制探讨。最终目的是研发一种有效的、可以进一步改善精子品质的番鸭低温保存稀释液配方,构建番鸭精液低温液态保存技术体系。研究结果如下:(1)不同成分的稀释液对精子的活率、活力及其他运动性能指标具有显著性的影响。其中YA-1稀释液对精子的保存效果最好,精子保存到第3、4天,各项运动性能指标都显著高于其他稀释液下的精子(P精液保存时间少于48小时,1:1的稀释比例对精子的保护效果最好;当精液保存时间超过48小时,1:2的稀释比例对精子的保护效果最好。(3)在精子顶体完整性和ROS的检测中,随着精子保存时间的延长,YA-1稀释液对精子顶体完整性保护效果趋势最明显,并能降低ROS的产生。(4)在人工授精试验中,YA-1稀释液下的精子混合液的孵化率最高,保存3天后仍有25%以上的孵化率。证明YA-1稀释液在保护精子、促进繁殖力方面优势明显。

关键词：番鸭精液保存稀释液人工授精

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不同抗氧化剂对绵羊精液保存效果的影响

不同抗氧化剂对绵羊精液保存效果的影响

作者： Animal husbandry 石河子大学

学位级别：硕士

目的:精子在体外存活时间限制了优秀公畜的精液利用效率。因此提高精液在体外的保存时间和质量成为提高人工授精效率的关键步骤。安石榴苷和表儿茶素是两种不同的抗氧化剂,探索这两种抗氧化剂对绵羊精液的保存效果的影响,可为提高良种... 详细信息

目的:精子在体外存活时间限制了优秀公畜的精液利用效率。因此提高精液在体外的保存时间和质量成为提高人工授精效率的关键步骤。安石榴苷和表儿茶素是两种不同的抗氧化剂,探索这两种抗氧化剂对绵羊精液的保存效果的影响,可为提高良种公羊力用率、种质资源保存等提供依据。方法:(1)不同抗氧化剂对多浪羊精液的常温保存:首先用假阴道采集3只健康多浪种公羊精液,用以“Tris+葡萄糖+果糖”为主的绵羊精液稀释液中不同安石榴苷(10、12.5、15、17.5、20μmol/L)和表儿茶素(250、300、375、450、600μmol/L)配制的绵羊精液常温稀释液进行稀释。通过测定精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性,以及精液中具有抗氧化性的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)的活性,综合评价多浪羊精液常温保存效果。(2)不同抗氧化剂对多浪羊精液的低温保存:在常温保存基础稀释液中加入10%的卵黄,再分别含有安石榴苷(10、12.5、15、17.5、20μmol/L)和表儿茶素(250、300、375、450、600μmol/L)配制低温稀释液。通过测定精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性,以及精液中SOD、CAT的活性,对多浪羊精液低温保存效果综合评价。(3)含有不同抗氧化剂的多浪羊精液冷冻保存:在低温保存稀释液的基础上添加5%甘油做为抗冻剂,再分别含有安石榴苷(10、12.5、15、17.5、20μmol/L)和表儿茶素(250、300、375、450、600μmol/L)配制冷冻稀释液。通过测定精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性,以及精液中SOD、CAT的活性筛选出冷冻效果较好的精液;对同期发情处理后的湖羊母羊进行人工授精,检测其受胎率,进一步判断精液冷冻保存的效果。结果:(1)多浪羊精液的常温保存时,以“Tris+葡萄糖+果糖”为主的绵羊精液稀释液中分别含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素,保存后精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性、CAT活性和SOD活性最高,且均显著高于对照组,其中保存后第3天两组精子活力分别为42.82%和51.55%。(2)多浪羊精液的低温保存时,分别含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素组的稀释液保存后,在低温精液保存下,精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性、CAT活性和SOD活性,同样最高且均显著高于对照组,其中保存后第7天精子活力分别为57.93%和58.14%。(3)多浪羊精液的冷冻保存时,同样分别含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素组的稀释液,在液氮冷冻精液保存后,精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性、CAT活性和SOD活性最高,且均显著高于对照组,两组含有抗氧化剂的精液冷冻保存受胎率为50%、55%。结论:(1)以“Tris+葡萄糖+果糖”为主的绵羊精液基础稀释液中,含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素的均能提高绵羊常温保存效果。(2)以卵黄为低温保护剂,同样含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素的低温稀释液,有利于延长绵羊精子的存活时间。(3)以甘油为抗冻剂,同样含有15μmol/L安石榴苷或375μmol/L表儿茶素的冷冻稀释液提高了多浪羊精液的冷冻保存效果,提高了母羊人工授精后的受胎率。

关键词：精液保存精液品质安石榴苷表儿茶素抗氧化剂

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绵羊精液保存稀释液的筛选研究

绵羊精液保存稀释液的筛选研究

作者：张文倩石河子大学

学位级别：硕士

随着畜牧业的快速发展，养羊模式逐步由放牧型转变为规模化舍饲，人工授精技术可极大地提高其养殖效益。精液保存技术可使羊的人工授精不再受地域、输精时间、活畜引种等的限制，而精液稀释液的优劣则直接决定着精液保存的效果。　　目... 详细信息

随着畜牧业的快速发展，养羊模式逐步由放牧型转变为规模化舍饲，人工授精技术可极大地提高其养殖效益。精液保存技术可使羊的人工授精不再受地域、输精时间、活畜引种等的限制，而精液稀释液的优劣则直接决定着精液保存的效果。　　目的：以绵羊精液为试验对象，逐级递进筛选精液保存液中不同缓冲物质、糖类和抗氧化物质，通过分析精液品质常规指标、精子抗氧化能力等相关指标，探索提高绵羊精液低温、冷冻保存的较优秀稀释液及保存方法。　　方法：（1）绵羊精液的低温保存，首先用假阴道法采集5只健康多浪羊种公羊精液，筛选不同缓冲体系的稀释液A1（EDTA+柠檬酸钠）、A2（Hepes+柠檬酸钠）、A3（柠檬酸钠）、A4（Tris+柠檬酸），再筛选不同糖类的稀释液B1（葡萄糖）、B2（果糖）、B3（葡萄糖+果糖）、B4（果糖+乳糖）、B5（葡萄糖+乳糖）;然后以效果较好的B5配方为基础，分别添加茶多酚（0、0.4、0.6、0.8、1、1.2mg/mL）和绿原酸（0、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12mg/mL）;试验通过检测精子活率、活力、运动性能（VSL、VCL、VAP）、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性、SOD活性等指标，进行绵羊精液低温保存效果评价。最后对湖羊进行同期发情，用对照组和较优配方的稀释液保存精液进行人工授精，并检测其受胎率，评价较优稀释液的保存效果。（2）绵羊精液的冷冻保存，以低温保存稀释液B5配方为基础，甘油为抗冻剂，分别添加茶多酚（0、0.4、0.6、0.8、1、1.2mg/mL）和绿原酸（0、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12mg/mL）设置冷冻稀释液，通过检测精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性、SOD活性以及冷冻相关基因BCL-2、TUBB、HSP70、HSP90表达量，对比抗氧化剂对绵羊精液的冷冻保存效果。然后以0.08mg/mL绿原酸组为基础，对比38℃30s、45℃20s、75℃3s三种不同解冻程序对冷冻精液品质的影响。最后，用对照组和较好流程保存的冻精进行人工授精，检测冻精的受胎率。　　结果：（1）绵羊精液低温保存时，“Tris+柠檬酸”的稀释液能显著提高精液的活率、活力、运动性能指标和质膜完整率。“葡萄糖+乳糖”组的精液保存质量显著高于其他组。在此配方基础上，添加1.0mg/mL茶多酚或0.08mg/mL绿原酸，则保存后精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性和SOD活性最高均显著高于对照组，两组低温保存后精液的受胎率分别为73.33%、76.67%。（2）绵羊精液冷冻保存时，含1.0mg/mL茶多酚组或含0.08mg/mL绿原酸组的稀释液，在液氮冷冻保存精液后，精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性和SOD活性，以及BCL-2、HSP70、HSP90基因表达量均显著高于对照组。在冷冻精液的解冻方法上，38℃30s的解冻程序对冻后精子解冻效果较好;两组添加抗氧化剂的冷冻保存精液的受胎率分别为52%、56%。　　结论：（1）添加1.0mg/mL茶多酚或0.08mg/mL绿原酸的“Tris+柠檬酸、葡萄糖+乳糖”为基础的稀释液均能提高绵羊精液低温保存的效果。（2）以甘油为抗冻剂，同样添加1.0mg/mL茶多酚或0.08mg/mL绿原酸的冷冻稀释液，有利于绵羊精液的冷冻保存;38℃30s的解冻程序对冻后精子解冻效果较好。

关键词：绵羊精液保存茶多酚绿原酸受胎率

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益母草碱对绵羊精液冷冻保存的影响

农业生物技术学报 2023年第10期31卷 2115-2122页

作者：李智星卿育洪李志远曹少奇高新梅曾维斌王静胡广东石河子大学动物科技学院新疆维吾尔自治区畜牧总站

精液冷冻保存是有效提升绵羊(Ovis aries)人工授精效率的有效手段之一，在精液保存稀释液中添加抗氧化剂是精液保存过程的关键，益母草碱作为一种抗氧化剂在精液保存的研究中鲜有报告。本研究在多浪羊精液冷冻保存稀释液中分别添加20、4... 详细信息

精液冷冻保存是有效提升绵羊(Ovis aries)人工授精效率的有效手段之一，在精液保存稀释液中添加抗氧化剂是精液保存过程的关键，益母草碱作为一种抗氧化剂在精液保存的研究中鲜有报告。本研究在多浪羊精液冷冻保存稀释液中分别添加20、40、60、80和100μmol/mL的益母草碱，通过检测精液品质、抗氧化能力、相关凋亡基因mRNA相对表达量及受胎率等指标，综合评价益母草碱对绵羊精液冷冻保存效果的影响。研究结果表明，与对照组(0μmol/mL)相比，在冷冻保存稀释液中添加益母草碱后，能显著提高多浪羊冷冻保存精液的活率、顶体完整率和质膜完整率(P精液超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)和过氧化氢酶(catalase, CAT)的活性，提高总抗氧化能力(total antioxidant eapacity, T-AOC)水平并降低丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量(P保存液中益母草碱添加浓度为60μmol/mL时保存效果最佳(P保存过程中，添加最佳浓度益母草碱组的精子相关凋亡基因肿瘤坏死因子受体超族成员6 (TNF receptor superfamily, member 6, Fas)、半胱天冬酶家族-3 (caspase family omega-3, Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2关联X蛋白(Bcl2-associated X, Bax)的m RNA相对表达量显著降低(P保存液中添加浓度为60μmol/mL组精子的受胎率为60%，高于0μmol/mL组，达到鲜精阴道输精的最低水平。本研究结果表明，在精液稀释液中添加浓度为60μmol/mL的益母草碱后可显著改善多浪羊冷冻保存精液品质，提升其抗氧化能力，同时起到抗凋亡作用，使受胎率达到一个良好的水平。本研究为探索益母草碱对提高绵羊精液保存效果提供了有益借鉴。

关键词：精液保存益母草碱精液品质抗氧化能力抗凋亡能力受胎率

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杜洛克公猪精液中微凝块对保存效果的影响

中国畜牧杂志 2022年第6期58卷 163-165,172页

作者：秦佳丽曹婷婷孙敬帅周健李智丽高彬文赵云翔佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528000 广西扬翔股份有限公司广西贵港537000 河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450000

本实验旨在探究微凝块在杜洛克公猪精液保存中的影响,采集15头健康良好的杜洛克公猪精液,依据精液所含凝块的情况以及处理方式分为无凝块组、凝块组、凝块过滤组。通过CASA系统对凝块的大小、数量及精液活力、前向运动、畸形率等指标进... 详细信息

本实验旨在探究微凝块在杜洛克公猪精液保存中的影响,采集15头健康良好的杜洛克公猪精液,依据精液所含凝块的情况以及处理方式分为无凝块组、凝块组、凝块过滤组。通过CASA系统对凝块的大小、数量及精液活力、前向运动、畸形率等指标进行连续8d的检测。结果显示:凝块直径范围在10~55μm,过滤后观察到凝块显著减少。精液质量方面,凝块组精液活力在保存第5~7天高于无凝块组(P保存第5~6天高于凝块过滤组(P精液畸形率在保存第2~5天高于无凝块组(P精液运动参数无降低趋势,总体上对于精液保存效果没有显著负面影响。

关键词：凝块精液活力前向运动精液保存

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微量精子冷冻保存技术研究进展

国际生殖健康/计划生育杂志 2024年第3期43卷 222-227页

作者：吴柱连汪彩珠周红陈焕华林若芸舒金辉广西壮族自治区妇幼保健院生殖医学中心

微量精子样本不仅获取难度大（睾丸/附睾穿刺手术或显微外科取精术）、数目少且质量差，采用传统的冷冻方法还容易导致精子复苏率和回收率低下。为改善微量精子的冷冻保存效果，对现有冷冻保存技术进行了多方面改进，如新研发的多种微... 详细信息

微量精子样本不仅获取难度大（睾丸/附睾穿刺手术或显微外科取精术）、数目少且质量差，采用传统的冷冻方法还容易导致精子复苏率和回收率低下。为改善微量精子的冷冻保存效果，对现有冷冻保存技术进行了多方面改进，如新研发的多种微量精子冷冻载体在提高活动精子复苏率、精子回收率和操作便利性方面取得了较大进步。抗冻蛋白、卵磷脂、纳米颗粒和抗氧化剂等精子冷冻保护剂辅助因子在一定程度上改善了精子冷冻效果。精子玻璃化冷冻保存技术逐渐展现其发展潜力。综述微量精子冷冻保存技术在冷冻载体、冷冻保护剂和冷冻方案的优化方面的研究进展。

关键词：精子低温保存冷冻精液保存冷冻保护剂

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绵羊精液液态保存中的应用现状

今日畜牧兽医 2023年第7期39卷 56-59页

作者：胡世超于小杰王净河北北方学院动物科技学院 075000 河北省肉羊产业技术创新战略联盟 075000

人工授精能提高优良公羊的利用率,是良种选育和扩繁的必备技术,其中最关键的是精液保存技术。精液稀释液是精子的直接生存环境,稀释液中的营养成分、pH值、渗透压等因素都会对精子的保存质量与时效产生影响。因此,本文对实践中常用的添... 详细信息

人工授精能提高优良公羊的利用率,是良种选育和扩繁的必备技术,其中最关键的是精液保存技术。精液稀释液是精子的直接生存环境,稀释液中的营养成分、pH值、渗透压等因素都会对精子的保存质量与时效产生影响。因此,本文对实践中常用的添加剂在绵羊精液液态保存中的研究和应用现状进行了综述,以期对研发新型稀释液提供参考。

关键词：绵羊精液保存常温低温