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实验生物学报 1998年第4期31卷 340-346页

作者：张红郑荣梁徐晨阳中国科学院近代物理研究所兰州730000 兰州大学生物系兰州730000 兰州医学院第一附属医院泌尿科兰州730000

本文分别采用过膜游动法、硫代巴比妥酸比色法和放射免疫分析法测定了正常人和精子活力低下的不育症患者精子膜的脂类过氧化反应(LP)、环一磷酸腺苷(cAMP)和环一磷酸鸟苷(cGMP)水平,研究了膜LP、细胞内cAMP和cGMP与运动性之间的关系。... 详细信息

本文分别采用过膜游动法、硫代巴比妥酸比色法和放射免疫分析法测定了正常人和精子活力低下的不育症患者精子膜的脂类过氧化反应(LP)、环一磷酸腺苷(cAMP)和环一磷酸鸟苷(cGMP)水平,研究了膜LP、细胞内cAMP和cGMP与运动性之间的关系。结果表明,无论正常还是活力低下的精子,膜LP和运动性之间均存在明显负相关(r=-0.76,P精子内两种环核苷酸与运动性之间则均存在明显正相关(cAMP:r=0.64,P运动性之间的相关性最高。这些结果提示,膜LP是造成精子运动性降低的主要原因之一;精子内两种环核苷酸也可能影响其运动性。

关键词：精子运动性精子活力低下男性不育症

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细胞外囊泡在铅暴露致男性生殖损伤过程中的作用研究

细胞外囊泡在铅暴露致男性生殖损伤过程中的作用研究

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作者：张平洋新乡医学院

学位级别：硕士

背景近30年来,铅已成为世界范围内广泛存在的环境污染物,最近本课题组对一般环境人群的流行病学调查发现尿铅浓度与精液质量存在负相关关系。研究发现细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)内的物质可以被有毒物质改变,使受体细胞的... 详细信息

背景近30年来,铅已成为世界范围内广泛存在的环境污染物,最近本课题组对一般环境人群的流行病学调查发现尿铅浓度与精液质量存在负相关关系。研究发现细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)内的物质可以被有毒物质改变,使受体细胞的微环境改变,从而导致病理过程;精浆EVs参与精子的运动性获得、获能和顶体反应等过程。铅暴露是否能造成精浆EVs产生改变,进而影响精子的运动性、获能、顶体反应尚不清楚。目的明确铅暴露是否可以通过EVs影响精子运动性、获能和顶体反应,进而导致男性生殖损伤;发现铅暴露后精浆EVs发生改变的关键生物分子。方法1.构建不同浓度铅染毒的大鼠模型,观察铅暴露对睾丸、附睾等生殖组织的损伤,提取精浆EVs刺激正常人类/大鼠精子,分析铅暴露精浆EVs对精子运动性、获能和顶体反应的影响。2.检测精浆EVs中与运动性和顶体反应可能有关的蛋白质,筛选差异蛋白。结果1.铅暴露对大鼠生殖系统的毒性作用与对照组大鼠相比,0.20%和0.80%Pb AC染毒组的非前向运动精子百分率NP、C级精子百分率均明显降低,D级精子百分率明显升高,铅暴露能造成精液质量下降。0.20%Pb AC组、0.40%Pb AC组和0.80%Pb AC染毒组的精子畸形指数SDI均显著升高;大鼠睾丸病理切片发现,Pb AC染毒组大鼠睾丸曲细精管内生精细胞明显减少或消失。2.精浆EVs对精子运动性、获能和顶体反应的影响与未添加EVs的空白组相比,我们发现健康男性/雄性大鼠精浆胞外囊泡组的前向运动精子百分率、A级、B级、C级精子百分率以及各运动速度指标均显著提高,Ca2+浓度、70KD大鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化水平及顶体反应率均显著升高,提示健康雄性精浆胞外囊泡能促进精子运动和顶体反应。3.铅暴露大鼠精浆EVs对精子运动性、获能和顶体反应的影响与对照组相比,在孵育1 h后,与对照组相比,0.20%Pb AC染毒组EVs共培养大鼠精子的A级精子百分率显著降低;在孵育4 h后,前向运动精子百分率PR、B级、C级精子百分率均显著降低;D级精子百分率显著升高。我们采用对照组和0.20%Pb AC染毒组大鼠胞外囊泡刺激健康男性/雄鼠正常精子,其运动性、钙离子浓度及顶体反应率也均是显著下降的,说明该组胞外囊泡对精子运动、获能和顶体反应可能具有抑制作用。4.大鼠精浆EVs蛋白质谱研究结果通过蛋白质谱鉴定出大鼠精浆EVs中的7种差异蛋白,分别为:极长链酰基辅酶A脱氢酶(ACADVL)、纤毛形成相关作用蛋白(TTC17)、非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、胆碱转运体样蛋白(CTL)、Src激酶相关磷蛋白2(SKAP2)、Ras关联(Ral GDS/AF-6)和pleckstrin同源结构域1(RAPH1)、血红素结合蛋白2(HEBP2)。结论1.铅暴露对大鼠生殖系统产生毒性作用,造成精子质量下降、畸形指数上升和睾丸结构破坏。2.精浆胞外囊泡对精子运动性、获能和顶体反应具有积极正调控作用,铅暴露可能通过改变精浆EVs,进而影响精子运动性和顶体反应。3.蛋白质谱鉴定出Src激酶相关磷蛋白2,参与精子发生、运动、获能、顶体反应等过程,可能的信号通路为:SKAP2-Arp2/3复合肌动蛋白通路,有希望成为筛选男性生殖损伤的有效生物标志物。

关键词：精子胞外囊泡铅暴露精子运动性顶体反应

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