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粘虫颗粒体病毒增效蛋白基因片段优化及功能

微生物学报 2016年第9期56卷 1459-1467页

作者：韩光杰刘琴徐贝贝王建军祁建杭李传明徐健江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007 扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载... 详细信息

【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载体,分析目的基因片段表达产物的表达水平、围食膜蛋白降解效能和增强活性,进一步明确Pu GV-Ps增效蛋白基因的功能区域。【结果】Pu GV-Ps增效蛋白含有M60-like结构域、锌离子催化域和糖蛋白结合域,并包含13个潜在的糖基化位点。以此为依据设计P69(短截M60-like结构域)和P77(短截糖蛋白结合域)2个截短片段,构建了表达载体p ET15b-P69和p ET15bP77,原核表达量明显高于全长基因P104。表达产物纯化蛋白围食膜降解活性表明,P69对斜纹夜蛾围食膜大分子蛋白降解程度高于P77,但两者均低于P104。病毒增强苏云金杆菌(Bt)实验表明,截短片段的表达产物提高了Bt对小菜蛾的毒力,但增强活性显著低于P104。【结论】研究结果表明,Pu GV-Ps增效蛋白基因N端M60-like结构域和C端糖蛋白结合域对其增效作用的发挥都具有一定功能,这些结构对维持增效蛋白的构象也发挥了一定的作用,截短片段P69有利于保持Pu GV-Ps增效蛋白的活性、提高表达水平。该研究结果对增效蛋白的工业化生产具有一定的指导意义。

关键词：粘虫颗粒体病毒增效蛋白短截片段增效活性

粘虫颗粒体病毒的增效因子提高杆状病毒的感染

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昆虫学报 1995年第4期38卷 407-413页

作者：丁翠邓塔蔡秀玉中国科学院动物研究所

一株美洲粘虫ＧＶ（增效品系）在东方粘虫幼虫上进行增殖，所获粘虫ＧＶ（ＰｕＧＶ－Ｐｓ）对东方粘虫ＮＰＶ（ＰｓＮＰＶ）、棉铃虫ＮＰＶ（ＨａＮＰＶ）和黄地老虎ＮＰＶ（ＡｓＮＰＶ）进行增效试验。实验结果证明ＰｕＧＶ－Ｐｓ对三... 详细信息

一株美洲粘虫ＧＶ（增效品系）在东方粘虫幼虫上进行增殖，所获粘虫ＧＶ（ＰｕＧＶ－Ｐｓ）对东方粘虫ＮＰＶ（ＰｓＮＰＶ）、棉铃虫ＮＰＶ（ＨａＮＰＶ）和黄地老虎ＮＰＶ（ＡｓＮＰＶ）进行增效试验。实验结果证明ＰｕＧＶ－Ｐｓ对三种ＮＰＶ都有明显的增效作用，其中以对ＰＳＮＰＶ为最强，增效率达５５％－８５％对ＨａＮＰＶ为３０％－８０％；而对ＡｓＮＰＶ只有１５％－３５％。用凝胶过滤技术从ＰＳＧＶ－Ｐｓ中分离增效因子ＰｕＳＦ－Ｐｓ，其对ＰｓＮＰＶ和ＡｓＮＰｙ的增效作用亦同样明显，２５０μｇ的ＰｕＳＦ－Ｐｓ可以提高ＰｓＮＰＶ的感染能力达８０％。经Ｓｅｐｈａｄｅｒ－１５０柱（１．６×９０）和使用四种标准蛋白（细胞色素Ｃ、胃蛋白酶、牛血清清蛋白和乳酸脱氢酶）测得ＰＳＳＦ－Ｐｓ的分子量为１６００００左右。

关键词：粘虫颗粒体病毒增效因子昆虫病毒杆状病毒

粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌δ-内毒素的酶解活化作用

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植物保护学报 2008年第3期35卷 263-269页

作者：徐健刘琴姚远王明明祝树德扬州大学园艺与植物保护学院扬州225009 江苏里下河地区农业科学研究所扬州225007

粘虫颗粒体病毒（Psedualetia unipuncta granulovirus，PuGV-Ps）对苏云金杆菌（Bacillusthuring．iensis，Bt）具有增效作用。为明确其增效机制，采用SDS．PAGE方法研究PuGV．Ps对Btδ-内毒素的降解活化作用。结果表明，碱性条件下晶... 详细信息

粘虫颗粒体病毒（Psedualetia unipuncta granulovirus，PuGV-Ps）对苏云金杆菌（Bacillusthuring．iensis，Bt）具有增效作用。为明确其增效机制，采用SDS．PAGE方法研究PuGV．Ps对Btδ-内毒素的降解活化作用。结果表明，碱性条件下晶体蛋白和PuGV-Ps共同孵育，130kD的δ-内毒素被进一步酶解为分子量为110、87、61、47kD等多种不同的肽链，其酶解活化程度随缓冲液pH的升高不断加深，在pH值10．7的0．1mol／LNa2CO2缓冲液中，δ-内毒素完全降解，并产生具有一定抗蛋白酶继续降解的分子量为47、60和61kD的活性片段。用氨苯磺胺偶氮酪蛋白为底物测定PuGV．Ps中总蛋白酶活性的结果表明，PuGV—Ps在pH值为7．38～10．38时均具有蛋白酶活性，且蛋白酶活性随pH升高而显著提高。4种蛋白酶抑制剂均可抑制PuGV-Ps的蛋白酶活性，且以STI的抑制作用最强。SDS—PAGE试验同样显示了STI可以抑制PuGV-Ps对δ-内毒素的酶解活化。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌 δ-内毒素酶解活化

粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对Bt毒蛋白的降解活化作用

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昆虫学报 2008年第1期51卷 26-32页

作者：徐健刘琴谭永安祝树德扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009 江苏里下河地区农科所江苏扬州225007

以小菜蛾Plutella xylostella为试虫,采用生物测定方法测定了粘虫颗粒体病毒（Pseudaletia unipuncta granulosis virus,PuGV-Ps）对苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）的增效作用。结果表明：不同配伍PuGV-Ps和Bt间的共毒系数在105.3至195.0之间,PuGV-Ps对Bt毒力具有增强作用,其中以Bt∶PuGV-Ps为4∶1增效作用最明显,72hLC50为0.039mg/mL。不同温度和pH值都影响PuGV-Ps对Bt的增效作用,16℃-20℃增效程度明显高于24℃-32℃,而碱性条件下（pH8-9）增效作用更显著。PuGV-Ps对Bt的增效作用因小菜蛾龄期不同而变化,2、3龄幼虫死亡率较单独使用Bt分别提高了50%和30.31%,而作用于低龄（1龄）和高龄（4龄）幼虫时对Bt的增效作用不显著。PuGV-Ps饲喂2h后再接毒Bt,小菜蛾死亡率明显提高,48h死亡率达66.67%,较直接饲喂Bt＋PuGV-Ps处理死亡率提高了53.87%,差异极显著。SDS-PAGE表明PuGV-Ps具有碱性蛋白酶的活性,离体条件下能促进δ-内毒素酶解为47kD,60kD和61kD的毒性肽。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌增效特性 Bt毒蛋白小菜蛾

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粘虫颗粒体病毒增效因子的基因定位

昆虫学报 2001年第2期44卷 148-154页

作者：刘强叶寅白小东丁翠中国科学院动物研究所北京100080 中国科学院微生物研究所北京100080

参考粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增强因子的基因序列 ,设计PCR引物 ,用PCR反应扩增出特异性产物。用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶酶切处理PCR反应产物 ,然后克隆到质粒pUC19中 ,构建重组质粒 pUC19 SF ;对重组质粒 pUC19 SF中的外源片段测... 详细信息

参考粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增强因子的基因序列 ,设计PCR引物 ,用PCR反应扩增出特异性产物。用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶酶切处理PCR反应产物 ,然后克隆到质粒pUC19中 ,构建重组质粒 pUC19 SF ;对重组质粒 pUC19 SF中的外源片段测序 ,结果证明PCR扩增产物是粘虫颗粒体病毒PuGV Ps增效因子基因的一段序列。重组质粒pUC19 SF的插入片段标记为探针 ,通过Southern杂交将增效因子基因定位于PuGV

关键词：粘虫颗粒体病毒增效因子基因定位 Southern杂交

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粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌增效作用初探

江苏农业科学 2003年第1期31卷 30-31页

作者：徐健殷向东朱锦磊祁建航秦启联江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007 中国科学院动物研究所北京100080

粘虫颗粒体病毒 (PuGV)对苏云金杆菌具有增效作用 ,Bt中加入 0 .17%的PuGV ,共毒系数达 137;灭活的PuGV对苏云金杆菌同样具有增效作用。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌增效作用共毒系数微生物杀虫剂

苏云金杆菌与粘虫颗粒体病毒联合作用对甜菜夜蛾的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 64-68页

作者：马谈斌刘琴徐健祁建杭李传明王艳孙俊施建德江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007 扬州绿源生物化工有限公司江苏扬州225008

以甜菜夜蛾为试虫,研究粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)对苏云金杆菌(Bt)毒力的增效作用。结果表明:PuGV-Ps对甜菜夜蛾无致毒作用,但Bt中加入PuGV-Ps后可提高Bt对甜菜夜蛾的毒力,甜菜夜蛾致死中量LC50由Bt单剂的1.094 mg.mL-1下降到0.862 mg.mL... 详细信息

以甜菜夜蛾为试虫,研究粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)对苏云金杆菌(Bt)毒力的增效作用。结果表明:PuGV-Ps对甜菜夜蛾无致毒作用,但Bt中加入PuGV-Ps后可提高Bt对甜菜夜蛾的毒力,甜菜夜蛾致死中量LC50由Bt单剂的1.094 mg.mL-1下降到0.862 mg.mL-1,共毒系数达127。亚致死剂量Bt处理甜菜夜蛾能影响昆虫的生长发育,表现为幼虫生长量相对减少、蛹重下降、化蛹率降低和化蛹历期延长,添加PuGV-Ps后可进一步增强Bt对甜菜夜蛾生长发育的抑制作用。甜菜夜蛾中肠蛋白酶活性测定结果表明,PuGV-Ps对甜菜夜蛾中肠酶活性具有抑制作用;昆虫同时取食PuGV-Ps和Bt后,中肠酶液总蛋白酶活力均有所下降,在中肠酶液最适pH范围内蛋白酶活力抑制作用最明显。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌甜菜夜蛾蛋白酶活性

粘虫颗粒体病毒与苏云金杆菌联合作用对甜菜夜蛾的影响

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生物安全学报 2009年第2期18卷 124-129页

作者：刘琴徐健祁建杭施建德李传明马谈斌江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007

以甜菜夜蛾为试虫,测定了粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)对苏云金杆菌(Bt)毒力的增效作用。结果表明PuGV对甜菜夜蛾没有致毒作用,但Bt中加入PuGV后可以提高Bt对甜菜夜蛾的毒力,甜菜夜蛾致死中量LC_(50)由Bt单剂的1.094 mg/mL下降到0.862 mg/mL... 详细信息

以甜菜夜蛾为试虫,测定了粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)对苏云金杆菌(Bt)毒力的增效作用。结果表明PuGV对甜菜夜蛾没有致毒作用,但Bt中加入PuGV后可以提高Bt对甜菜夜蛾的毒力,甜菜夜蛾致死中量LC_(50)由Bt单剂的1.094 mg/mL下降到0.862 mg/mL,共毒系数达127。亚致死剂量Bt处理甜菜夜蛾影响了幼虫的生长发育,表现为幼虫生长量相对减少、蛹重下降、化蛹率降低和化蛹历期延长,添加了PuGV-Ps后进一步增强了Bt对甜菜夜蛾的生长发育的抑制作用。甜菜夜蛾中肠蛋白酶活性测定结果表明,PuGV-Ps对甜菜夜蛾中肠酶活性具有抑制作用;昆虫同时取食PuGV-Ps和Bt后,中肠酶液总蛋白酶活力都有所下降,在中肠酶液最适pH范围内蛋白酶活力抑制作用最明显。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌甜菜夜蛾蛋白酶活性

东方粘虫颗粒体病毒超氧化物歧化酶基因的克隆与分析

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昆虫知识 2008年第5期45卷 722-725页

作者：邹媛媛李轶女朱越雄苏州大学生命科学学院苏州215021 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

为获得东方粘虫颗粒体病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因组序列,采用随机克隆方法,建立PsGV的质粒基因文库,并通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得编码超氧化物歧化酶蛋白的基因(PsGV-sod)。该基因阅读框为462bp... 详细信息

为获得东方粘虫颗粒体病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因组序列,采用随机克隆方法,建立PsGV的质粒基因文库,并通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得编码超氧化物歧化酶蛋白的基因(PsGV-sod)。该基因阅读框为462bp,共编码153个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性比较结果表明该基因与其他颗粒体病毒同源性较高,通过保守基序分析,认为其为铜锌超氧化物歧化酶。

关键词：粘虫颗粒体病毒 sod基因同源性分析