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脂微球替代增溶剂消除维生素K_1注射液的严重不良反应

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中国药学杂志 2014年第20期49卷 1832-1835页

作者：米燕妮肖雪平娜娜朱银静朱岩冰刘静曹永孝西安交通大学医学院西安710061

目的维生素K1注射液产生的类过敏反应是其严重的不良反应,本实验拟用脂微球替代增溶剂的维生素K1脂微球以消除类过敏反应。方法 Beagle犬分别静脉注射维生素K1脂微球和维生素K1注射液,比较行为学、血压、血浆IgE、组胺等指标的变化。用... 详细信息

目的维生素K1注射液产生的类过敏反应是其严重的不良反应,本实验拟用脂微球替代增溶剂的维生素K1脂微球以消除类过敏反应。方法 Beagle犬分别静脉注射维生素K1脂微球和维生素K1注射液,比较行为学、血压、血浆IgE、组胺等指标的变化。用分光光度法和流式细胞术检测RBL-2H3细胞的脱颗粒及细胞凋亡。结果维生素K1注射液能诱发犬Ⅳ级及以上类过敏症状,评分(16.8±1.6)(P类过敏反应,而不引起过敏。维生素K1脂微球既不引起类过敏反应也不引起过敏反应。

关键词：维生素K1 脂微球注射液类过敏过敏 Beagle犬 RBL-2H3细胞

注射用益气复脉(冻干)对BN大鼠和比格犬的致敏性研究

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药物评价研究 2020年第8期43卷 1548-1553页

作者：万梅绪张燕欣王蕴华宋美珍李智李德坤鞠爱春天津天士力之骄药业有限公司天津300410 天津市中药注射剂安全性评价企业重点实验室天津300410

目的通过BN大鼠全身主动过敏(ASA)、被动皮肤过敏(PCA)和比格犬类过敏模型考察注射用益气复脉(冻干)(YQFM)的致敏性。方法 ASA和PCA过敏试验:BN大鼠随机分成5组,即阴性对照组、卵白蛋白(阳性药,2%)组和YQFM低、中、高剂量(230.30、460.6... 详细信息

目的通过BN大鼠全身主动过敏(ASA)、被动皮肤过敏(PCA)和比格犬类过敏模型考察注射用益气复脉(冻干)(YQFM)的致敏性。方法 ASA和PCA过敏试验:BN大鼠随机分成5组,即阴性对照组、卵白蛋白(阳性药,2%)组和YQFM低、中、高剂量(230.30、460.60、921.20 mg/kg,460.60 mg/kg为临床等效剂量)组,每组9只,ip给药,隔日注射1次,共致敏5次。致敏结束后随机每组取3只用于取血得血清混匀后用于PCA试验;另外6只用于ASA试验的激发,激发30 min内,观察BN大鼠的全身过敏反应症状,评分并记录;观察结束后取血得血清用于IgE、组胺及β-氨基己糖苷酶水平检测。比格犬类过敏试验:比格犬随机分为阴性对照组、吐温-80(阳性药,2%)组、YQFM(460.60 mg/kg,临床等效剂量)组,每组4只。iv给药1次,分别于给药前、给药后30 min取血,检测血中组胺、IgE、β-氨基己糖苷酶的含量变化;观察给药后比格犬的行为学变化。结果 ASA试验结果显示,除阳性药组外,其他组别BN大鼠未出现阳性过敏反应症状;PCA试验结果显示,除阳性药组外,其他各组大鼠均未出现阳性蓝斑;与阴性对照组比较,阳性药组中的BN大鼠致敏血清IgE、β-氨基己糖苷酶、组胺水平均显著升高(P类过敏试验结果显示,与阴性对照组比较,给药后吐温-80组的组胺、β-氨基己糖苷酶显著升高(P过敏反应为阴性,对犬类过敏反应也为阴性。

关键词：注射用益气复脉(冻干) BN大鼠比格犬过敏类过敏 IgE 组胺 β-氨基己糖苷酶

生脉注射剂致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒研究

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广州中医药大学学报 2014年第3期31卷 410-413,417,496页

作者：朱远洪王青董燕邓向亮易浪王培训广州中医药大学临床药理研究所免疫室广东广州510405

【目的】通过分析生脉注射液致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒及其对2种细胞的细胞毒作用,评价生脉注射剂的致类过敏情况。【方法】分离大鼠腹腔肥大细胞,加入不同浓度的生脉注射剂共孵育,采用荧光法检测组胺并计算释放率。RBL-2H... 详细信息

【目的】通过分析生脉注射液致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒及其对2种细胞的细胞毒作用,评价生脉注射剂的致类过敏情况。【方法】分离大鼠腹腔肥大细胞,加入不同浓度的生脉注射剂共孵育,采用荧光法检测组胺并计算释放率。RBL-2H3细胞与不同浓度的生脉注射剂共孵育,采用显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率。分别采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法与流式细胞术检测生脉注射剂对2种细胞的细胞毒作用。【结果】生脉注射剂在终浓度为12.5～100μL/mL时可引起肥大细胞组胺释放率增加,25～100μL/mL时可引起RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率增加（均P〈0.05或P〈0.01）,上述剂量范围内对2种细胞均未表现细胞毒作用。【结论】生脉注射剂在未表现细胞毒作用的剂量下可引起大鼠腹腔肥大细胞和RBL-2H3细胞脱颗粒,提示生脉注射剂具有致类过敏的可能。

关键词：生脉注射剂/药理学类过敏脱颗粒肥大细胞细胞培养

RBL-2H3细胞脱颗粒模型评价注射用丹参多酚酸的安全性

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药物评价研究 2021年第11期44卷 2403-2407页

作者：周大铮肖辉万梅绪李智李德坤鞠爱春天津市中药注射剂安全性评价企业重点实验室天津300410 天津天士力之骄药业有限公司天津300410

目的通过RBL-2H3肥大细胞脱颗粒模型考察注射用丹参多酚酸及丹参多酚酸B、D的致敏性。方法RBL-2H3肥大细胞分为对照(PBS)组、C48/80(阳性对照,4 mg/mL)组和梯度浓度(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800 mg/mL)的注射用丹参多酚... 详细信息

目的通过RBL-2H3肥大细胞脱颗粒模型考察注射用丹参多酚酸及丹参多酚酸B、D的致敏性。方法RBL-2H3肥大细胞分为对照(PBS)组、C48/80(阳性对照,4 mg/mL)组和梯度浓度(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800 mg/mL)的注射用丹参多酚酸、丹参多酚酸B、丹参多酚酸D组,孵育30 min后,通过中性红染色试验观察脱颗粒现象,化学荧光法测定组胺释放率,酶联免疫吸附(ELISA)法测定β-氨基己糖苷酶释放率、类胰蛋白酶释放量。结果与对照组比较,阳性药C48/80组、质量浓度≥0.2mg/mL的丹参多酚酸B组、质量浓度≥0.4mg/mL的丹参多酚酸D组、质量浓度为0.8mg/mL的注射用丹参多酚酸组的细胞脱颗粒度显著升高(P类胰蛋白酶释放量无显著性差异,质量浓度≥0.025 mg/mL的丹参多酚酸D组类胰蛋白酶释放量显著增加(P<0.001);注射用丹参多酚酸没有引起β-氨基己糖苷酶释放率增加,0.8mg/mL的丹参多酚酸D组、质量浓度≥0.1mg/mL的丹参多酚酸B组的β-氨基己糖苷酶释放率显著增加(P<0.001)。结论注射用丹参多酚酸在致敏性方面有较好的安全性。

关键词：注射用丹参多酚酸 RBL-2H3细胞组胺类胰蛋白酶 β-氨基己糖苷酶类过敏

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羊水栓塞的临床表现及诊断

中国实用妇科与产科杂志 2005年第2期21卷 69-70页

作者：李力第三军医大学大坪医院野战外科研究所

在分娩时,羊水进入母体血循环,引起肺栓塞、休克、弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC),导致肾功能衰竭或突发死亡,此一系列严重症状的综合征称为羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE).也有人称为妊娠类过... 详细信息

在分娩时,羊水进入母体血循环,引起肺栓塞、休克、弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC),导致肾功能衰竭或突发死亡,此一系列严重症状的综合征称为羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE).也有人称为妊娠类过敏性综合征(anaphylactoid syndrome of pregnancy).羊水栓塞是一罕见、凶险的分娩并发症,病死率极高,国内外报道为70%～85%,妊娠早、中期流产亦可发生,但相对来说症状较轻.

关键词：诊断羊水栓塞综合征临床表现母体血血循环罕见类过敏休克肺栓塞

血塞通注射液对人血清补体系统影响的体外研究

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辽宁中医杂志 2015年第4期42卷 808-810页

作者：刘春琰窦德强辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:体外研究血塞通注射液对人血清补体系统的影响,探讨血塞通注射液引起类过敏反应的发生机制。方法:采用体外补体激活评价模型,研究血塞通注射液对人血清补体系统的影响,将血塞通注射液与人体血清共同孵育30 min,采用ELISA法检测血... 详细信息

目的:体外研究血塞通注射液对人血清补体系统的影响,探讨血塞通注射液引起类过敏反应的发生机制。方法:采用体外补体激活评价模型,研究血塞通注射液对人血清补体系统的影响,将血塞通注射液与人体血清共同孵育30 min,采用ELISA法检测血塞通注射液对人血清补体末端复合物SC5b-9含量的影响。结果:血塞通注射液能使人血清中SC5b-9的含量降低,与PBS组比较,差异有统计学意义(P类过敏反应与补体激活途径无关。

关键词：血塞通注射液补体激活系统类过敏 SC5b-9

清开灵注射液及其中间品对RBL-2H3细胞增殖的影响

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中华中医药杂志 2015年第1期30卷 50-53页

作者：王欢王庆国屈会化赵琰北京中医药大学北京100029

目的:研究不同浓度的清开灵注射液及其生产过程中的中间品对RBL-2H3细胞增殖的影响,建立相应类过敏细胞模型及利用该模型评价清开灵注射液及其中间品的不良反应,进而为全流程监控药品质量奠定基础。方法:将清开灵注射液及其中间品分别... 详细信息

目的:研究不同浓度的清开灵注射液及其生产过程中的中间品对RBL-2H3细胞增殖的影响,建立相应类过敏细胞模型及利用该模型评价清开灵注射液及其中间品的不良反应,进而为全流程监控药品质量奠定基础。方法:将清开灵注射液及其中间品分别以体积比1/4为初始浓度,2倍稀释至1/4 096,共11个浓度作用于RBL-2H3细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态,用四甲基偶氮唑盐法测定不同浓度清开灵注射液及其中间品对RBL-2H3细胞生长的抑制作用,并计算细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)。结果:较低浓度的清开灵注射液及其中间品对RBL-2H3细胞生长有轻度促进作用,随着药液浓度的增加,对RBL-2H3细胞生长的抑制作用逐渐明显,细胞存活率显著降低(P类过敏细胞模型,评价清开灵注射液及其中间品的不良反应及全流程的监控药品质量。

关键词：清开灵注射液中间品四甲基偶氮唑盐法 RBL-2H3细胞类过敏

利用小鼠嗜碱性粒细胞活化标志研究中药注射剂的致敏性

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利用小鼠嗜碱性粒细胞活化标志研究中药注射剂的致敏性

作者：陈典广州中医药大学

学位级别：硕士

中药作为我国中医药瑰宝的重要组成部分,传统剂型是以丸、散、膏、丹为主,近年来在此基础上开发了多种新的剂型。其中,注射剂因其易吸收、起效快等特点,迅速打开了市场,并取得了良好的临床疗效。但是,随着中药注射剂（Traditional Chine... 详细信息

中药作为我国中医药瑰宝的重要组成部分,传统剂型是以丸、散、膏、丹为主,近年来在此基础上开发了多种新的剂型。其中,注射剂因其易吸收、起效快等特点,迅速打开了市场,并取得了良好的临床疗效。但是,随着中药注射剂（Traditional Chinese Medicine Injection,TCMI）使用的增加,中药注射剂不良反应事件也随之增多,受到业界的广泛关注。 TCMI的不良反应多为Ⅰ型超敏反应或类过敏反应,都是肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒,释放炎症介质所致。嗜碱性粒细胞是免疫反应的重要效应细胞,参与了天然免疫反应和获得性免疫反应,在免疫反应的起始和持续阶段都扮演了重要的角色。利用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）的嗜碱性粒细胞活化实验（Basophil Activation Test,BAT）,被认为是分析过敏原存在致敏性的有效手段。小鼠嗜碱性粒细胞尚无特异性表面标志,通过组合标记的方法可以鉴定外周血中的嗜碱性粒细胞。最近,有研究称CD200R可以作为小鼠嗜碱性粒细胞的活化标志。根据文献及嗜碱性粒细胞的性质本研究选择了三种表面标志,分别为CD200R、CD107a、CD69,分析其作为嗜碱性粒细胞活化标志的可行性。最终,本实验拟在小鼠BAT中,观察嗜碱性粒细胞表面活化分子的表达变化,分析TCMI是否存在致敏性潜能。 1实验研究 1.1小鼠外周血嗜碱性粒细胞鉴定取BALB/c小鼠外周血,抗-IgE-FITC/抗-CD4-PE/cy7/抗-CD45R B220-PE/cy7染色,流式细胞术分析,对IgE+/CD4-/CD45RB220-进行双色荧光强度检测,细胞比例为0.7%。提示该方法可以标记外周血中的嗜碱性粒细胞。 1.2小鼠外周血嗜碱性粒细胞的活化将抗-IgE作为嗜碱性粒细胞的刺激剂,加入BALB/c小鼠外周血。孵育30min后,结合三色免疫荧光染色和流式细胞术检测嗜碱性粒细胞表面CD200R、CD107a、CD69的表达。结果显示CD200R、CD107a、CD69在抗-IgE刺激后表达皆显著升高提示这三种分子作为嗜碱性粒细胞的活化表型,用于进一步的实验研究中。 1.3抗-IgE刺激小鼠外周血嗜碱性粒细胞的活化条件优化为选择较优的活化条件,针对表面标志表达的规律和特点,将刺激剂抗-IgE分为三种浓度及三个不同的刺激时间,利用流式细胞术分析嗜碱性粒细胞表面CD200R、 CD107a、CD69表达情况。最终确定了抗-IgE刺激嗜碱性粒细胞活化标志高表达的较优的时间-浓度组合分别为：CD200R在抗-IgE的刺激时间-浓度为30min-125ng/mL时表达明显;CD107a在抗-IgE的刺激时间-浓度为5min-125ng/mL时表达明显;CD69在抗-IgE的刺激时间-浓度为60min-125ng/mL时表达明显。 1.4离子霉素、佛波酯及二者组合刺激小鼠外周血嗜碱性粒细胞的活化以离子霉素、佛波酯及二者组合分别作为刺激剂,针对不同的活化表型观察在三种不同刺激时间的作用下,CD200R、CD107a、CD69表达情况。实验结果显示：离子霉素刺激后活化表型表达升高不明显,佛波酯及离子霉素+佛波酯均可以刺激嗜碱性粒细胞表面CD200R、CD107a、CD69表达升高。 1.5致敏小鼠嗜碱性粒细胞活化卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）腹腔注射免疫BALB/c小鼠,取致敏小鼠外周血,体外以PBS、抗-IgE及OVA刺激,利用FCM分析嗜碱性粒细胞中的CD200R、 CD107a、CD69表达情况。结果显示,致敏后体外刺激抗-IgE及OVA都可以使CD200R、CD107a、CD69表达升高,提示CD200R、CD107a、CD6可以作为特异性免疫反应引起的小鼠嗜碱性粒细胞活化。 1.6TCMI刺激小鼠嗜碱性粒细胞活化表型变化获得正常BALB/c小鼠外周血,体外分别刺激PBS、抗-IgE或离子霉素+佛波酯及血塞通等9种中药注射剂,应用FCM对嗜碱性粒细胞表面CD200R、CD107a、CD69进行荧光强度检测。结果发现,抗-IgE或离子霉素+佛波酯组成的阳性组皆发生了CD200R、CD107a、CD69表达升高,TCMI各组中血塞通注射液使嗜碱性粒细胞表面CD200R表达升高,CD69也有升高趋势。 1.7TCMI过敏性实验检测小鼠嗜碱性粒细胞活化表型变化将BALB/c小鼠按照组别两次腹腔注射鱼腥草等5种TCMI;一周后,获得全血,按照组别体外加入鱼腥草等5种TCMI进行激发,利用FCM分析各TCMI刺激后嗜碱性粒细胞表面的CD200R、CD107a、CD69表达情况。结果发现：双黄连注射液致敏后

关键词：嗜碱性粒细胞中药注射剂活化流式细胞术过敏类过敏

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双黄连注射剂类致敏成分群筛查方法研究

双黄连注射剂类致敏成分群筛查方法研究

作者：夏赞韶湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的：本研究以双黄连注射剂为模型药物,通过谱毒学(毒理学与指纹图谱关联)的研究,从毒理学层面阐明了双黄连注射剂(SHLI)中的类致敏原成分种类及毒效强度,最终为建立中药注射剂类致敏性成分与网络靶点作用的关联性的筛查方法,为中药注... 详细信息

目的：本研究以双黄连注射剂为模型药物,通过谱毒学(毒理学与指纹图谱关联)的研究,从毒理学层面阐明了双黄连注射剂(SHLI)中的类致敏原成分种类及毒效强度,最终为建立中药注射剂类致敏性成分与网络靶点作用的关联性的筛查方法,为中药注射剂制剂工艺改造(对类致敏成分的除去或屏蔽)研究奠定基础。方法：1双黄连类过敏反应效应指标的适宜性研究。昆明小鼠分别尾静脉注射含0.4%依文思蓝的不同浓度的SHLI、生理盐水和Compound48/80溶液,给药30min后记录各组动物耳廓蓝染的阳性率,评分耳廓蓝染程度,并定量测定耳廓依文思蓝渗出量。Wistar大鼠分别尾静脉注射不同浓度的SHLI、生理盐水、Compound48/80和OVA。SHLI、生理盐水、Compound48/80组给药10min后取血检测血浆组胺水平和血清类胰蛋白酶和总补体水平;SHLI、生理盐水和OVA组再致敏三次,末次致敏后第10天取血检测血清IgE水平。2双黄连注射剂样品制备条件的研究采用溶度参数法获取确定11种不同极性的提取溶媒,用11种溶媒提取双黄连注射剂得到双黄连注射剂不同极性段成分群,考察各溶媒提取成分群的指纹图谐特征及相似度评价。3双黄连注射剂类过敏的谱毒学研究根据均匀设计考察和评价双黄连注射剂引起类过敏的毒效作用,结合本实验室建立的谱毒效学数学模型,计算双黄连注射剂成分与类过敏各效应指标间的谱毒学关系,得到一系列的谱毒学参数。结果：1双黄连类过敏反应效应指标的适宜性研究。阳性.药Compound48/80组所有动物双耳均出现不同程度蓝染,反应率和耳蓝染率均达100%;SHLI360、720、1440mg/kg组的反应率分别为80%,90%,100%,耳蓝染率分别达到80%,85%,100%,与对照组相比均有显著差异(P类胰蛋白酶与血浆组胺的变化趋势一致。Compound48/80组总补体浓度达77.15U/mL,与空白组相比明显升高(p0.05)。2双黄连注射剂样品制备条件的研究不同溶媒提取的成分群指纹图谱差异性很大,所合成分种类和含量不同。最终选取所合成分种类和含量差异性最大的成分群的提取溶媒作为双黄连注射剂试药制备的提取溶媒。3双黄连注射剂类过敏的谱毒学研究以组胺、类胰蛋白酶、总补体、C3a为检测指标,结合谱毒效学数学模型和双黄连指纹图谱,得到各成分与各靶标的作用系数。结论：通过比较作用系数,从而筛查出类致敏性可疑成分为350nm图谱上的X1、X4、X5、X8、X10、X12、X14和254nm图谱上的X12、X24、X32。相同的成分注射给药能产生过敏,而口服不致敏未能得到解释,这可能与药物中形成超分子引起过敏反应有关,但只是一个猜测,具体的验证还需做后续的深入研究。

关键词：双黄连注射剂类过敏组胺类胰蛋白酶补体谱毒学超分子