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体外循环血浆对类中性粒细胞趋化和CXCR4表达的影响

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中国细胞生物学学报 2018年第3期40卷 341-348页

作者：彭艳华涂然杨陶波王寿勇重庆医科大学附属儿童医院麻醉科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014

为研究体外循环血浆对类中性粒细胞趋化功能和CXCR4表达的影响,选择体外循环下心内直视手术(CPB组)和超声引导下外科微创室间隔缺损封堵术(N-CPB组)的患儿各12例,收集手术前后血浆,采用Transwell细胞培养系统测定其对体外培养的类中性... 详细信息

为研究体外循环血浆对类中性粒细胞趋化功能和CXCR4表达的影响,选择体外循环下心内直视手术(CPB组)和超声引导下外科微创室间隔缺损封堵术(N-CPB组)的患儿各12例,收集手术前后血浆,采用Transwell细胞培养系统测定其对体外培养的类中性粒细胞的趋化效应,并采用流式细胞术和Western blot测定经血浆刺激后类中性粒细胞表面趋化因子受体4[chemokine(C-X-C motif)receptor 4,CXCR4]蛋白质及其磷酸化水平的变化,运用RT-q PCR检测CXCR4 m RNA水平。结果表明,CPB血浆对类中性粒细胞趋化效应明显增强,T1和T2时刻趋化指数分别为3.89±0.77和7.68±1.55,CXCR4特异性拮抗剂AMD3100对这一增强效应有抑制作用;CPB血浆刺激后,类中性粒细胞表面CXCR4蛋白质及其磷酸化水平均明显升高,但其m RNA水平未发生明显变化。体外循环血浆可激活类中性粒细胞CXCR4信号通路,其机制与增加细胞表面CXCR4蛋白质及其磷酸化水平有关,但与其m RNA水平无关,这一机制可能与体外循环过程中中性粒细胞向肺部和其他血管外组织浸润有关。

关键词：趋化因子受体4 类中性粒细胞体外循环趋化效应

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KLF2对类中性粒细胞S1PR1与L-selectin启动子活性的影响

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KLF2对类中性粒细胞S1PR1与L-selectin启动子活性的影响

作者：莫磊南华大学

学位级别：硕士

目的:研究KLF2对类中性粒细胞S1PR1与L-selectin启动子活性的影响。方法:1、空载及KLF2质粒转染293T细胞,分别使用PCR、WB检测空白组、空载组、过表达组KLF2 m RNA与蛋白水平的表达变化;2、将KLF2质粒与S1PR1、L-selectin启动子报告质... 详细信息

目的:研究KLF2对类中性粒细胞S1PR1与L-selectin启动子活性的影响。方法:1、空载及KLF2质粒转染293T细胞,分别使用PCR、WB检测空白组、空载组、过表达组KLF2 m RNA与蛋白水平的表达变化;2、将KLF2质粒与S1PR1、L-selectin启动子报告质粒共转染至293T细胞中,利用双荧光素酶报告基因技术,检测KLF2对S1PR1、L-selectin启动子活性的影响;3、使用1.3%二甲基亚砜（DMSO）诱导HL-60细胞分化为类中性粒细胞（d HL-60）,通过CHIP实验检测KLF2与S1PR1、L-selectin的启动子区域结合情况。结果:1、质粒瞬时转染293T细胞48小时后,通过荧光显微镜观测空载组、空白组、过表达组的荧光,并计算出转染效率为80%;通过RT-PCR、Westernblot检测KLF2 m RNA及蛋白表达量,结果显示过表达组KLF2的m RNA及蛋白表达较对照组显著增加,差异具有统计学意义（P＜0.01）。实验表明成功构建KLF2质粒进行后续实验。2、将L-selectin、S1PR1启动子报告基因质粒与KLF2质粒共同或分别转染293T细胞时,发现实验组较对照组中KLF2质粒能显著提高S1PR1、L-selectin启动子活性,差异具有统计学意义（P＜0.01）。3、使用1.3%DMSO诱导HL-60细胞分化为类中性粒细胞,CHIP实验结果显示,KLF2与S1PR1启动子核心区（+75bp,-44bp）及L-selectin启动子核心区（-262bp,-377bp）结合。结论:类中性粒细胞KLF2可上调L-selectin、S1PR1启动子活性,并能结合S1PR1启动子核心区（+75bp,-44bp）及L-selectin启动子核心区（-262bp,-377bp）。

关键词：类中性粒细胞启动子 KLF2 S1PR1 L-selectin

KLF2调控S1PR1对类中性粒细胞迁移的影响

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KLF2调控S1PR1对类中性粒细胞迁移的影响

作者：石丹丹南华大学

学位级别：硕士

目的和意义：支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，约50%的哮喘与嗜酸性粒细胞炎症有关，而其余的哮喘中大部分伴随着中性粒细胞增多。在重症哮喘患者的诱导痰中，中性粒细胞比例明显增加。哮喘中性粒细胞增多与中性粒细胞凋亡延迟或... 详细信息

目的和意义：支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，约50%的哮喘与嗜酸性粒细胞炎症有关，而其余的哮喘中大部分伴随着中性粒细胞增多。在重症哮喘患者的诱导痰中，中性粒细胞比例明显增加。哮喘中性粒细胞增多与中性粒细胞凋亡延迟或减少有关，也与中性粒细胞表面粘附迁移分子表达增加，引起迁移增加有关。本文从细胞水平研究KLF2是否调控S1PR1，影响类中性粒细胞迁移。方法：（1）将HL-60细胞用含1.3%DMSO培养5天后，分化为类中性粒细胞，通过迪夫快速染色法观察细胞核形态及Realtime PCR检测中性粒细胞分化标志物CD11b mRNA的表达，确定是否诱导成功。（2）用空载及KLF2-RNAi慢病毒载体感染类中性粒细胞。应用荧光显微镜鉴定感染率。应用Western blot、Realtime PCR进行KLF2敲减率鉴定。（3）Realtime PCR检测三组(空白组、空载组、干扰组)中KLF2、S1PR1mRNA的表达，Western blot检测三组中KLF2、S1PR1蛋白的表达，免疫荧光检测KLF2蛋白表达。（4）应用Transwell实验计数0.1μM S1P对三组类中性粒细胞的趋化迁移率。结果：1.成功的将HL-60细胞诱导成类中性粒细胞将HL-60细胞用含1.3%DMSO培养5天后提取细胞，经迪夫快速染色法发现细胞体积变小，出现肾型核。Real-timePCR检测CD11b mRNA表达情况，类中性粒细胞CD11b表达明显增加（P＜0.01）。2.慢病毒转染①荧光显微镜下观察干扰组和空载组的感染效率，感染效率达到90%以上。②KLF2表达情况Real-timePCR结果中，干扰组较空白组、空载组KLF2表达明显减少（P＜0.01），空载组和空白组KLF2表达基本相同（P＞0.05），计算其敲除率约为81%。慢病毒成功干扰KLF2基因表达，且排除病毒本身的干扰。免疫荧光显示，干扰组较空白组、空载组KLF2表达减少。3.S1PR1mRNA表达变化Realtime PCR结果中，干扰组较空白组、空载组S1PR1表达明显减少（P＜0.01），4.S1PR1蛋白表达变化Western blot结果中，干扰组较空白组、空载组S1PR1表达明显减少（P＜0.01）。5.Transwell实验：选取0.1μM浓度的S1P进行Transwell实验，干扰组较空白组、空载组，迁移率明显减少（P＜0.01）。结论：KLF2通过上调S1PR1表达，促进S1P趋化下的类中性粒细胞迁移。

关键词： KLF2 S1PR1 S1P 类中性粒细胞迁移

HIF-1α/BNIP3通路对类中性粒细胞自噬、凋亡的影响

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HIF-1α/BNIP3通路对类中性粒细胞自噬、凋亡的影响

作者：梁丽霞南华大学

学位级别：硕士

目的:在细胞水平上探索HIF-1α/BNIP3通路对类中性粒细胞自噬、凋亡的影响,为中性粒细胞性哮喘发病机制的研究提供理论依据。方法:1.类中性粒细胞诱导分化:培养人急性早幼粒白血病细胞(HL-60),取对数生长期的HL-60细胞加入1.3%DMSO培养... 详细信息

目的:在细胞水平上探索HIF-1α/BNIP3通路对类中性粒细胞自噬、凋亡的影响,为中性粒细胞性哮喘发病机制的研究提供理论依据。方法:1.类中性粒细胞诱导分化:培养人急性早幼粒白血病细胞(HL-60),取对数生长期的HL-60细胞加入1.3%DMSO培养4天后,Diff染色检测细胞形态,流式细胞术检测CD11b表达水平,确定类中性粒细胞是否诱导成功;2.构建IL-8培养下的类中性粒细胞模型:HL-60细胞诱导分化为类中性粒细胞后加入0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/m L、800ng/ml浓度的IL-8培养24h,流式细胞术检测类中性粒细胞的凋亡率,选择凋亡率最低组的IL-8浓度与类中性粒细胞培养0h、6h、12h、24h、48h,检测各组类中性粒细胞的凋亡率,选择凋亡率最低的组进行下一步实验;3.验证HIF-1α调控BNIP3对类中性粒细胞自噬、凋亡的影响:分为6个组:1.空白组2.IL-8组3.IL-8+HIF-1α组4.IL-8+HIF-1α-vector组5.IL-8+HIF-1αsi RNA组6.IL-8+HIF-1αsi RNA-vector组,分别用Western-blot、RT-q PCR方法检测每组HIF-1α、BNIP3、LC3Ⅱ的表达水平,用流式细胞术检测类中性粒细胞凋亡率,用免疫荧光检测细胞内LC3Ⅱ的表达情况。结果:1.1.3%二甲基亚砜(DMSO)诱导HL-60细胞4天后,迪夫染色鉴定细胞核呈肾形、分叶核改变;流式细胞术检测发现诱导组CD11b蛋白的表达较空白组明显增加(p类中性粒细胞诱导成功。2.流式细胞术检测不同IL-8浓度和培养时间组的类中性粒细胞凋亡率,发现400ng/ml、24h组类中性粒细胞凋亡率较低(p细胞术、免疫荧光检测发现:(1)IL-8组与空白组相比较:Western-blot、RT-q PCR结果显示HIF-1α、BNIP3和LC3Ⅱ表达增加(P细胞术结果显示类中性粒细胞凋亡率下降(P细胞术结果显示凋亡率明显下降(P细胞术结果显示类中性粒细胞凋亡率增加(P类中性粒细胞自噬增加、凋亡抑制;2.HIF-1α/BNIP3通路可诱导类中性粒细胞自噬增加、凋亡抑制;3.IL-8可能通过HIF-1α/BNIP3通路诱导类中性粒细胞自噬增加、凋亡抑制。

关键词：类中性粒细胞 HIF-1α BNIP3 自噬凋亡

DMSO诱导HL-60转化为类中性粒细胞的实验研究

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重庆理工大学学报（自然科学） 2011年第8期25卷 25-29页

作者：郑小莉李申张艺刘佳佳泸州医学院基础医学院四川泸州646000

通过DMSO诱导HL-60细胞分化为类中性粒细胞,从细胞形态、CD11b基因的表达等方面进行研究,探索这种类中性粒细胞是否可以作为进一步研究中性粒细胞自发性凋亡死亡机制的细胞模型。体外培养HL-60细胞,在对数生长期细胞加入DMSO(终浓度1%)... 详细信息

通过DMSO诱导HL-60细胞分化为类中性粒细胞,从细胞形态、CD11b基因的表达等方面进行研究,探索这种类中性粒细胞是否可以作为进一步研究中性粒细胞自发性凋亡死亡机制的细胞模型。体外培养HL-60细胞,在对数生长期细胞加入DMSO(终浓度1%)对其进行刺激和诱导,然后分别于24、48、72、144 h收集细胞,以未加DMSO处理的相应各时间点HL-60细胞作为空白对照组,运用光学显微镜镜下观察细胞的形态学变化,用RT-PCR检测分化标志物CD11b基因的表达。结果显示:随着诱导时间的延长被诱导细胞的体积逐渐增大,48 h后出现了肾形核、分叶核、蚕豆核等粒细胞核型,并随时间的延长逐渐增多;DMSO处理后,24 h开始类中性粒细胞中CD11b的表达上调,与空白对照组相比有明显差异(P细胞分化为类中性粒细胞;类中性粒细胞具有成为中性粒细胞研究替代模型的潜能。

关键词：中性粒细胞 HL-60细胞类中性粒细胞 CD11b

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人类中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒介导荚膜组织胞浆菌组分的鉴定

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国外医学(微生物学分册) 2001年第3期24卷 47-48页

作者：余传霖

以往曾证明,人类中性粒细胞对荚膜组织胞浆菌具有较强且持续性抑制真菌的作用,而且所有的抑制真菌活性均存在于嗜苯胺蓝颗粒之中。本文报告具有抑制真菌活性的特异性嗜苯胺蓝颗粒成分的鉴定,即将嗜

关键词：荚膜组织胞浆菌类中性粒细胞介导苯胺蓝颗粒

人类中性粒细胞有HLA—DR非依赖的辅助细胞功能

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国外医学(免疫学分册) 1987年第1期 47-47页

作者：尹廷贵

众所周知,巨噬细胞作为抗原提呈细胞在免疫应答中有重要的辅助作用,但对中性粒细胞在免疫反应中的作用了解甚少,至于是否有抗原提呈作用,一直存在争论,故本文作者对DR~-人类中性粒细胞在免疫反应中的作用做了研究,其方法和结果如下: 实... 详细信息

众所周知,巨噬细胞作为抗原提呈细胞在免疫应答中有重要的辅助作用,但对中性粒细胞在免疫反应中的作用了解甚少,至于是否有抗原提呈作用,一直存在争论,故本文作者对DR~-人类中性粒细胞在免疫反应中的作用做了研究,其方法和结果如下: 实验标本取自自愿接受纯蛋白衍生物(PPD)免疫的健康人外周血,用右旋糖酐沉淀和密度梯度离心法,纯化人外周血多形核白细胞(PMN),经非特异性酯酶染色

关键词： PMN 辅助细胞类中性粒细胞巨噬细胞吞噬细胞功能 HLA DR

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上期请您会诊临床讨论

中国社区医师 1993年第7期 1-2页

1.本病例特点 (1)男孩,3岁,既往无热惊厥史,病前有不洁饮食史。 (2)发病急,病始为恶心、呕吐,继之发热,发热16小时内抽搐12次,发作历时短暂。 (3)神志不清,烦躁,有不自主的小舞蹈样动作,瞳孔大小正常,光反应存在,颈稍强直,克、布氏征(-)... 详细信息

1.本病例特点 (1)男孩,3岁,既往无热惊厥史,病前有不洁饮食史。 (2)发病急,病始为恶心、呕吐,继之发热,发热16小时内抽搐12次,发作历时短暂。 (3)神志不清,烦躁,有不自主的小舞蹈样动作,瞳孔大小正常,光反应存在,颈稍强直,克、布氏征(-),巴氏征(+)。 (4)血白细胞总数增高,分类中性粒细胞略

关键词：临床讨论无热惊厥巴氏征舞蹈样动作布氏征类中性粒细胞不洁饮食史细菌性食物中毒