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应用与环境生物学报 2020年第4期26卷 775-782页

作者：郑鑫王蒙许子牧黄晓雨王淼啸黄婷方源聂勇吴晓磊汪家权合肥工业大学资源与环境学院合肥230009 北京大学工学院北京100871

Dietzia属菌具有很好的烃类降解和良好的高盐、高碱耐受能力.为研究Dietzia属降解烷烃和耐受盐碱的分子机制,以Dietzia ***12-45-1b为研究菌株,利用双质粒系统p Tip-istAB-sacB和pRTSK-sacB,成功构建库容为30720的随机突变体文库.随机... 详细信息

Dietzia属菌具有很好的烃类降解和良好的高盐、高碱耐受能力.为研究Dietzia属降解烷烃和耐受盐碱的分子机制,以Dietzia ***12-45-1b为研究菌株,利用双质粒系统p Tip-istAB-sacB和pRTSK-sacB,成功构建库容为30720的随机突变体文库.随机挑选的突变克隆及突变克隆传代20次后的Southern blot结果表明:转座序列插入的随机性较好,均为单插入突变,并且具有较好的遗传稳定性,可用于长期筛选功能基因.在此基础上,分别以高盐培养和正十六烷为单一碳源培养,利用高通量基因筛选,成功获得了一个耐盐突变体M9G和5个降解利用正十六烷相关突变株M6A、M6B、M7A、M9A、M81C.与野生型相比,5个降解利用正十六烷相关突变株的降解率下降范围为16.67%-84.35%.插入位点分析结果显示,M9G、M6A、M6B、M7A、M9A和M81C的插入基因分别预测为丝氨酸蛋白酶、铁氧化还原蛋白、假定蛋白、铁氧化还原蛋白还原酶、ABC转运蛋白和细胞色素P450类CYP153烷烃羟化酶.其中除了预测假定蛋白外,有些基因与传统上确定的功能存在差异,暗示着其可能具有新的功能.Dietzia菌随机插入突变体文库的构建及筛选可为研究Dietzia菌的抗逆和烷烃降解机制奠定基础.(图6表3参28)

关键词：随机突变体文库 Dietzia属筛库耐盐烷烃降解

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番茄果实中LeERF1、LeERF2基因的克隆及序列分析(英文)

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农业生物技术学报 2004年第2期 132-137页

作者：蔚变云朱本忠罗云波中国农业大学食品学院北京100083 中国农业大学食品学院

乙烯反应元件结合蛋白属于植物特有的一个转录因子家族,这个家族保守的DNA结合域称为ERF结构域。根据对番茄(Lycopersiconesculentum)和其它植物物种中EREBP基因家族的同源性比较,在保守区(ERF区域)设计合成一对简并引物,通过RT-PCR扩... 详细信息

乙烯反应元件结合蛋白属于植物特有的一个转录因子家族,这个家族保守的DNA结合域称为ERF结构域。根据对番茄(Lycopersiconesculentum)和其它植物物种中EREBP基因家族的同源性比较,在保守区(ERF区域)设计合成一对简并引物,通过RT-PCR扩增得到一个114 bp的片段,用此片段作探针筛选番茄cDNA文库(粉红期),得到两个基因LeERF1和LeERF2。通过BLAST工具在GenBank中搜索表明, LeERF1和LeERF2 基因属于EREBP家族,LeERF1与EREBP-4 和DDTFR10/A在氨基酸水平上的序列相似性为35%,LeERF2与EREBP-3 和pti5在氨基酸水平上的序列相似性为46%,是新的基因。LeERF1和LeERF2的核酸序列在GenBank发表,登录号分别为AY077626和AY275554。

关键词：番茄乙烯反应元件结合蛋白筛库 LeERF1基因 LeERF2基因

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Latrunculin B介导的拟南芥花粉管生长异常突变体的筛选

Latrunculin B介导的拟南芥花粉管生长异常突变体的筛选

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作者：李盼盼兰州大学

学位级别：硕士

已有的药理学和遗传学实验表明,微丝骨架在被子植物花粉管极性生长过程中发挥了至关重要的调控作用。前人已经对花粉管极性生长过程中微丝骨架进行了大量的研究,取得很多原创性的成果,但是目前有关微丝骨架精确调控花粉管极性生长的分... 详细信息

已有的药理学和遗传学实验表明,微丝骨架在被子植物花粉管极性生长过程中发挥了至关重要的调控作用。前人已经对花粉管极性生长过程中微丝骨架进行了大量的研究,取得很多原创性的成果,但是目前有关微丝骨架精确调控花粉管极性生长的分子机制在许多方面仍有待研究。例如,调节微丝骨架的信号网络还不够完善;各种信号分子在不同时间和空间如何协同调控微丝骨架的组织和动态变化;微丝骨架精确调节了花粉管极性生长过程中的哪些细胞活动等。为了探索微丝骨架在调控花粉管生长过程中的功能和作用机制,本论文基于微丝解聚药物Latrunculin B（LatB）开展了正向遗传筛选工作,通过在拟南芥EMS诱变植株花粉萌发过程中外源施加LatB,筛选了花粉萌发和花粉管生长发生异常的突变体,主要取得了如下研究结果:1、成功建立了外源LatB介导的拟南芥花粉管生长异常突变体筛选实验体系。2、在M1代筛选了6000株EMS诱变突变体植株,获得了407株在外源施加3 nM的LatB处理时花粉萌发和花粉管生长发生异常的突变体。3、在M2代和M3代筛选了花粉萌发和花粉管生长对外源LatB处理有抗性的突变体R-1—R-20和对LatB处理敏感的突变体S-1—S-18等38个表型能够稳定遗传突变体的纯合株系。4、进行了21个突变体的纯合验证,并获得了与野生型的回交材料,这些株系在F1代花粉萌发和花粉管生长对外源LatB处理仍存在稳定表型。5、在F2代遗传群体中筛选出4个突变体（R-1、S-1、S-2和S-3）的纯合株系,并证实了R-1、S-1、S-2和S-3均为单基因隐性突变。6、初步观察了R-1、S-1、S-2和S-3突变体中微丝排布以及FM4-64标记的内吞囊泡和内化速率。综上所述,通过基于外源施加LatB的正向遗传学实验,我们初步筛选出了一些花粉管极性生长产生缺陷的突变体,这些突变体可以作为遗传材料进行表型分析和鉴定新的基因功能,有可能为揭示微丝骨架参与极性生长调控机制的相关研究提供新的实验材料和研究思路。

关键词：拟南芥极性生长微丝骨架 EMS诱变筛库

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白菜核雄性不育两用系花蕾cDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛选

白菜核雄性不育两用系花蕾cDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初...

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作者：帅琪峰浙江大学

学位级别：硕士

白菜(Brassica campestris L. ssp. chinensis Makino;syn. B. rapa L ssp. chinensis)原产我国，其栽培历史悠久，品种资源丰富，在我国农业生产和人民生活中占有重要地位。作为典型的异花授粉作物，白菜具有明显的杂种优势，其雄性不... 详细信息

白菜(Brassica campestris L. ssp. chinensis Makino;syn. B. rapa L ssp. chinensis)原产我国，其栽培历史悠久，品种资源丰富，在我国农业生产和人民生活中占有重要地位。作为典型的异花授粉作物，白菜具有明显的杂种优势，其雄性不育系的利用被认为是目前一代杂种生产的理想途径，因而，对白菜雄性不育机理的研究一直深受人们的重视。随着现代生物技术的不断发展，利用分子生物学手段来从分子水平阐明白菜雄性不育发生机理显示出巨大潜力。而建立一个比较完整的cDNA文库，是开展分子生物学研究的基础工作，是分离特定基因，特别是分离高等真核生物基因的有效手段，目的基因的克隆对于研究基因结构，调节机制等方面具有十分重要的意义。本研究以‘矮脚黄’白菜(B. campestris ssp. chinensis var. communis cv. Aijiaohuang)隐性核雄性不育两用系(A／B line)为材料，从形态上对可育株系和不育株系的植株性状、育性及花器结构进行了比较分析，构建了可育株系花蕾的cDNA文库并对其部分特性进行了鉴定，同时对该文库进行了初步筛选。具体研究结果如下： (1)用比较分析的方法，对白菜核雄性不育两用系中不育株与可育株的植株性状、育性和花器结构等进行形态学观察。结果表明，在幼苗期，白菜核不育两用系不育株与可育株的生长势差异很小;在抽薹开花期，不育株的生长势强于可育株。不育株与可育株的花朵在表型上有明显区别，不育株的花丝短小，花药小而干瘪，其颜色发白，无粉;雌蕊发育正常，有受精能力。可育株花丝发育正常，花药饱满，呈黄色。白菜核雄性不育两用系中不育株花粉败育彻底，不育株与可育株1：1分离，是一种稳定可靠的核雄性不育两用系。 (2)以可育株混合花蕾为材料，提取RNA，按照SMART cDNA文库构建试剂盒说明构建了cDNA文库，文库的宿主菌是XL1-Blue。对文库的部分特性进行研究鉴定，结果表明：原初文库的滴度约为8×10 pfu·mL，扩增文库的滴度约为3×10pfu·mL;随机挑选50个克隆进行插入片段的检测，电泳结果显示，PCR产物大于500 bp的占70％，插入片段平均大小约为760 bp;蓝白斑筛选表明，文库的重组率约为87％。 (3)以本实验室先前获得的4个白菜核雄性不育相关基因cDNA片段作为混合探针，初步筛选文库，得到了阳性噬菌斑。由此认为白菜花蕾cDNA文库已经建立，摘要为今后进一步分离、研究核雄性不育相关基因奠定了基础。

关键词：白菜 Brassica campestris Brassica rapa cDNA文库核雄性不育克隆筛库

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